李嬌艷，胡燕，董曉斐，周婭微，彭研獻，鄧婷

壞死性小腸結(jié)腸炎(necrotizing enterocolitis，NEC)是新生兒常見的急性胃腸道疾病，多見于極低體質(zhì)量兒和早產(chǎn)兒，具有病情進展快、病死率高及預(yù)后差的特點[1]。NEC早期癥狀不典型，漏診率較高，探尋早期診斷NEC的血清指標(biāo)對后續(xù)針對性治療尤為重要。白介素(interleukin，IL)-12為異二聚體細胞因子，參與細胞因子釋放、維持Th1/Th2平衡及T細胞增殖等免疫過程[2-3]。纖維蛋白原(fibrinogen，F(xiàn)ib)是一種由肝臟合成的急性時相糖基化蛋白，由2個相同的亞基組成[4-5]。IL-12和Fib均可作為重要的炎性反應(yīng)標(biāo)志物，但二者在NEC患兒中未見報道，且對NEC的預(yù)測價值尚不清楚。因此，現(xiàn)分析血清IL-12、Fib水平對新生兒NEC的診斷價值，報道如下。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 選取2019年7月—2021年12月湖南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院兒科收治的NEC患兒89例為NEC組，根據(jù)Bell-NEC分期標(biāo)準(zhǔn)[6]分為Ⅰ期47例，Ⅱ期23例，Ⅲ期19例；同時選取醫(yī)院正常同齡低體質(zhì)量(<2 500 g)新生兒85例為對照組。2組性別、日齡、胎齡、體質(zhì)量等資料比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，具有可比性，見表1。本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)(2019-026)，且新生兒監(jiān)護人均知情同意并簽署知情同意書。

表1 對照組與NEC組臨床資料比較

1.2 病例選擇標(biāo)準(zhǔn) (1)納入標(biāo)準(zhǔn)：①NEC符合《小兒外科學(xué)》[7]的診斷標(biāo)準(zhǔn)；②新生兒日齡均≤28 d；③凝血因子功能正常。(2)排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他感染者，如病毒性腦炎、肺炎等；②合并其他腸道畸形者，如先天性小腸閉鎖、腸旋轉(zhuǎn)不良及先天性巨結(jié)腸等；③先天性免疫功能異常者。

1.3 觀測指標(biāo)與方法 對照組于出生第3天、NEC組于治療前空腹?fàn)顟B(tài)下采集新生兒靜脈血10 ml置于抗凝管中，KA-2000離心機(日本久保田公司)在3 000 r/min(4 ℃)、半徑10 cm條件下，離心5 min，收集上層清液，通過酶聯(lián)免疫吸附法檢測血清C-反應(yīng)蛋白(CRP，試劑盒購自上海信?？萍脊?、IL-6、IL-12(試劑盒購自武漢伊萊瑞特生物科技公司)水平，均嚴格遵照試劑盒流程操作。采用CS5100型自動凝血分析儀(日本SYSMEX公司)檢測血清Fib水平。

2 結(jié) 果

2.1 2組血清IL-12、Fib、CRP、IL-6水平比較 NEC組新生兒血清IL-12、Fib、CRP及IL-6水平均高于對照組(P<0.01)，見表2。

表2 對照組與NEC組血清IL-12、Fib、CRP、IL-6水平比較

2.2 不同Bell-NEC分期患兒血清IL-12、Fib、CRP、IL-6水平比較 隨著NEC分期的升高，血清IL-12、Fib水平逐漸升高(P均<0.01)，而CRP、IL-6 水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)，見表3。

表3 不同Bell-NEC分期患兒血清IL-12、Fib、CRP、IL-6水平比較

2.3 NEC患兒血清中IL-12、Fib水平與IL-6、CRP的相關(guān)性 Pearson分析顯示，NEC患兒血清IL-12、Fib水平與IL-6、CRP水平均呈顯著正相關(guān)(P均<0.01)，見表4。

表4 NEC患兒血清IL-12、Fib水平與IL-6、CRP的相關(guān)性

2.4 血清IL-12、Fib水平預(yù)測新生兒NEC的價值 ROC曲線分析結(jié)果顯示，血清IL-12、Fib及二者聯(lián)合預(yù)測新生兒NEC的AUC分別為0.754、0.700、0.842，二者聯(lián)合的價值明顯高于單一指標(biāo)檢測(Z/P=6.154/<0.001、5.024/<0.001)，見表5、圖1。

表5 血清IL-12、Fib水平預(yù)測新生兒NEC的價值

圖1 血清IL-12、Fib水平預(yù)測新生兒NEC的ROC曲線

3 討 論

NEC的具體發(fā)病機制目前尚不清楚，可能與缺氧、免疫應(yīng)答異常、早產(chǎn)、感染及腸道菌群紊亂有關(guān)[1]。目前，常規(guī)血清指標(biāo)和X線檢查是臨床判斷NEC的主要手段，但敏感度和特異度較差，對早期診斷和評估病情幫助不大。據(jù)調(diào)查顯示，NEC的保守治療僅限于輕癥患兒，仍有50%～70%患兒需要手術(shù)治療，但術(shù)后并發(fā)癥發(fā)生率較高，導(dǎo)致患兒預(yù)后較差[8]。近年來，有學(xué)者指出，炎性介質(zhì)失衡在誘導(dǎo)NEC發(fā)生過程中具有重要作用[9]。本研究結(jié)果顯示，NEC組新生兒血清中IL-6、CRP水平均高于對照組，但在不同的NEC分期中IL-6、CRP水平比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義。這表明IL-6、CRP等常規(guī)炎性因子只能提示機體目前炎性反應(yīng)水平較高，但無法具體評估NEC病情的嚴重程度。因此，篩選新的血清指標(biāo)對早期評估及診斷NEC具有重要價值。

IL-12又稱p70，主要由樹突狀細胞、單核細胞及巨噬細胞等抗原提呈細胞產(chǎn)生，在克羅恩病(Crohn disease，CD)、病毒性腸炎及潰瘍性結(jié)腸炎(ulcerative colitis，UC)等炎性反應(yīng)性疾病中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。在炎性反應(yīng)性腸病動物模型中發(fā)現(xiàn)，外周血IL-12水平升高，且注射特異性IL-12抗體后，Th1細胞活性降低，使腸道內(nèi)炎性反應(yīng)減輕[10]。Clarke等[3]發(fā)現(xiàn)，血清中IL-12水平與UC發(fā)病密切相關(guān)，較高水平的IL-12是誘導(dǎo)UC的危險因素，且IL-12水平與UC嚴重程度呈顯著正相關(guān)。Fib是一種急性時相反應(yīng)蛋白，其相對分子質(zhì)量為340 kD，主要存在于血漿中，在促進紅細胞聚集、誘導(dǎo)血小板活化及介導(dǎo)炎性反應(yīng)等方面發(fā)揮重要作用[11]?；A(chǔ)實驗表明，F(xiàn)ib能夠誘導(dǎo)單核/巨噬細胞遷移至血管內(nèi)皮細胞處，通過釋放細胞因子激活成纖維細胞生長因子2，使血管發(fā)生粥樣硬化風(fēng)險增加[12]。Ohya等[5]發(fā)現(xiàn)，在輕度UC和中重度UC患者血清中Fib水平均存在明顯差異，對判定UC活動情況具有重要價值。有報道指出，CD活動指數(shù)與Fib的分解產(chǎn)物D-二聚體具有顯著相關(guān)性，側(cè)面反映了Fib具有評估CD嚴重程度的潛力[13-14]。

本結(jié)果顯示，NEC組新生兒血清中IL-12、Fib水平均高于對照組，表明IL-12、Fib可能參與調(diào)控NEC的起病過程。隨著NEC分期的進展，血清中IL-12、Fib水平逐漸升高，表明在NEC不斷進展過程中，IL-12、Fib可能起到了促進作用?；顒有訳C患者外周血中單核細胞數(shù)量增加，且血清中促炎細胞因子IL-12水平較正常人群明顯升高，這與本研究結(jié)果具有相似性[3]。Hombach等[15]發(fā)現(xiàn)，IL-12能夠激活信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和轉(zhuǎn)錄激活因子4，使其磷酸化，促進原始T細胞分化為Th1細胞，并使Th1細胞轉(zhuǎn)化為活化狀態(tài)，分泌干擾素-γ，損傷腸道上皮細胞，促進NEC進展。Zaigham等[16]研究發(fā)現(xiàn)，當(dāng)腸壁缺血壞死時，血小板和Fib水平明顯升高，可能與機體炎性反應(yīng)應(yīng)答及缺氧條件有關(guān)。Fib能夠激活血管內(nèi)皮細胞表面的細胞間黏附因子-1，促進單核細胞趨化因子-1表達，誘導(dǎo)白細胞聚集并黏附于內(nèi)皮細胞表面，損傷血管內(nèi)皮細胞，從而阻礙腸道血液循環(huán)，加劇腸管內(nèi)缺血缺氧情況，使NEC病情加重[17-19]。Li等[20]亦發(fā)現(xiàn)，F(xiàn)ib通過結(jié)合整合素，誘導(dǎo)細胞外信號相關(guān)激酶磷酸化，促進血管表面的F-肌動蛋白增殖分裂，使內(nèi)皮細胞間隙增寬，血管通透性增加，損傷腸道正常的血運狀態(tài)，使腸管發(fā)生缺血壞死性疾病風(fēng)險增加。本結(jié)果顯示，NEC患兒血清中IL-12、Fib聯(lián)合診斷能夠提高新生兒發(fā)生NEC的診斷效能，且敏感度較單一指標(biāo)診斷明顯提高，說明二者聯(lián)合檢測有利于早期進行NEC的篩查診斷。但新生兒NEC血清中IL-12、Fib變化的具體機制尚不清楚，需要在后續(xù)的基礎(chǔ)實驗中進一步證實。同時，后續(xù)將繼續(xù)擴大樣本量來驗證本研究成果。

總之，新生兒NEC血清中IL-12、Fib水平升高，二者能夠反映NEC的嚴重程度，且與常規(guī)炎性指標(biāo)具有良好的相關(guān)性。血清IL-12、Fib聯(lián)合檢測對新生兒NEC具有良好的診斷效能，且敏感度較高，可能成為動態(tài)監(jiān)測NEC的潛在血清指標(biāo)，有利于臨床早期提供針對性治療。

利益沖突：所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明

李嬌艷：設(shè)計研究方案，實施研究過程，論文撰寫;胡燕：實施研究過程，資料搜集整理，論文修改；董曉斐：提出研究思路，分析試驗數(shù)據(jù)，論文審核;周婭微：進行統(tǒng)計學(xué)分析;彭研獻：課題設(shè)計，論文撰寫；鄧婷：資料搜集整理，分析試驗數(shù)據(jù)