陳麗娥，董曉尉

金華市食品藥品檢驗(yàn)檢測研究院 (金華 321015)

脫氫乙酸是一種廣譜類防腐劑，對引起食品腐敗的酵母菌、霉菌具有很好的抑制作用，是一種安全型食品防霉、防腐保鮮劑，廣泛應(yīng)用于食品中。作為食品添加劑，一般使用的是脫氫乙酸鈉。趙偉亞[1]在大鼠凝血機(jī)制的研究中發(fā)現(xiàn)，高劑量的脫氫乙酸鈉對大鼠凝血障礙發(fā)揮著重要調(diào)節(jié)作用；楊康妮[2]發(fā)現(xiàn)食品添加劑脫氫乙酸鈉可以通過改變細(xì)菌的代謝狀態(tài)進(jìn)而誘導(dǎo)抗生素耐受性的形成；戴有金等[3]通過大小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)，認(rèn)為脫氫乙酸鈉屬于低毒級(jí)別。

我國對脫氫乙酸及其鈉鹽的使用范圍和最大使用量都有明確規(guī)定，目前，常用的脫氫乙酸檢測方法是GB 5009.121—2016[4]，標(biāo)準(zhǔn)中明確了適用的食品種類，其他食品可參考執(zhí)行。醋和蛋白飲料并未在明確的適用食品類別中，因醋和蛋白飲料屬于液體類，但基質(zhì)復(fù)雜又含蛋白質(zhì)，根據(jù)其特性，選擇標(biāo)準(zhǔn)里氣相色譜法中5.1.1果蔬汁、果蔬漿和5.1.3面包、糕點(diǎn)、烘烤食品餡料、復(fù)合調(diào)味料、預(yù)制肉制品及熟肉制品兩種試樣制備方法對加標(biāo)樣品進(jìn)行測定，并進(jìn)行分析比較，為醋和蛋白飲料中脫氫乙酸測定的前處理方法選擇提供參考。

1 材料與方法

1.1 儀器、試劑與材料

7890B型氣相色譜儀，配火焰離子化檢測器(FID)，美國Agilent公司；2500TH型數(shù)控超聲波清洗器，上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；Multi reax型多管振蕩器，德國Heidolph公司；Direct-Q?5UV型超純水機(jī)，默克密理博；2-16KL型冷凍離心機(jī)，德國Sigma公司；ME204型電子天平，瑞士梅特勒公司；移液器，德國Eppendorf公司。

陳醋、紅曲醋、2種白醋(大米、糯米)和4種蛋白飲料，均購于當(dāng)?shù)厥袌觯幻摎湟宜針?biāo)準(zhǔn)品(純度99.9%)，購于上海安譜實(shí)驗(yàn)科技股份有限公司；乙酸乙酯和正己烷(色譜純)，購于德國默克股份兩合公司；鹽酸、氯化鈉、氫氧化鈉、硫酸鋅和鹽酸(分析純)，購于國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2 方法

1.2.1標(biāo)準(zhǔn)溶液的配制

標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液：準(zhǔn)確稱取100 mg脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)品于容量瓶中，用乙酸乙酯溶解并定容至100 mL，配制成1.0 mg/mL的脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備液，于0 ℃～4 ℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)工作液：將脫氫乙酸儲(chǔ)備液用乙酸乙酯稀釋，配制成濃度為10、20、40、60、80、100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，待測。

1.2.2試樣制備

1.2.2.1 果蔬汁、果蔬漿(方法一)

稱取樣品5 g于50 mL離心管中，加10 mL水振搖1 min，加1 mL鹽酸(1+1)酸化后，加入5 mL乙酸乙酯，振搖提取2 min，靜置分層后取上清液測定，同時(shí)進(jìn)行2水平3平行加標(biāo)試驗(yàn)。

1.2.2.2 面包、糕點(diǎn)、烘烤食品餡料、復(fù)合調(diào)味料、預(yù)制肉制品及熟肉制品(方法二)

稱取樣品5 g于50 mL離心管中，加15 mL水、2.5 mL硫酸鋅溶液(120 g/L)混勻，用氫氧化鈉溶液(250 g/L)調(diào)pH至7.5，超聲提取15 min，轉(zhuǎn)移至25 mL容量瓶中并加水定容，樣液加入5 mL正己烷，振搖1 min，靜置分層后取下層水相于離心管中，離心，取10 mL上清液，加1 mL鹽酸(1+1)酸化后，加入5 mL乙酸乙酯，振搖提取2 min，靜置分層后取上清液測定，同時(shí)進(jìn)行2水平3平行加標(biāo)試驗(yàn)。

1.2.3色譜條件

色譜柱： HP-5柱(30 m×0.320 mm×0.25 μm，美國Agilent公司)；進(jìn)樣口溫度250 ℃；檢測器(FID)溫度300 ℃；程序升溫，初始溫度為80 ℃，以20 ℃/min的速率升至200 ℃。進(jìn)樣模式為分流進(jìn)樣，分流比5∶1，分流流量9 mL/min；流速1.8 mL/min；進(jìn)樣量1 μL。

2 結(jié)果與討論

2.1 線性范圍

將脫氫乙酸儲(chǔ)備液用乙酸乙酯稀釋，配制成濃度為10、20、40、60、80、100 μg/mL的標(biāo)準(zhǔn)工作液，在1.2.3的色譜條件下進(jìn)行檢測，以峰面積對標(biāo)準(zhǔn)溶液中各組分的質(zhì)量濃度繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。脫氫乙酸在10～100 μg/mL范圍內(nèi)線性關(guān)系良好，相關(guān)系數(shù)(r2)大于0.995(見表1)。

表1 脫氫乙酸的線性方程、相關(guān)系數(shù)

2.2 回收率、精密度試驗(yàn)

以陳醋、紅曲醋、2種白醋(大米、糯米)和4種蛋白飲料作為研究對象，分別加入0.04、0.08 g/kg這2個(gè)不同濃度水平的脫氫乙酸標(biāo)準(zhǔn)溶液，按前處理方法進(jìn)行處理分析，各濃度水平分別進(jìn)行3次平行試驗(yàn)，各試樣的平均回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD)見表2。

表2 樣品中脫氫乙酸的平均加標(biāo)回收率和相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(n=3)

在醋和蛋白飲料基質(zhì)中，方法一的平均回收率為115.8%～126.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD，n=3)為0.34%～1.44%；方法二的平均回收率為99.4%～106.2%，相對標(biāo)準(zhǔn)偏差(RSD，n=3)為0.31%～1.29%。方法一前處理中采用直接酸化提取，樣品中存在一定的基質(zhì)干擾，造成回收率偏高；醋的工藝及分類不同，其基質(zhì)復(fù)雜且存在一定差異性，回收率也相差較大，不同蛋白飲料的基質(zhì)干擾相差不大。方法二前處理中先加入硫酸鋅和氫氧化鈉，調(diào)pH至7.5，使脫氫乙酸轉(zhuǎn)化成鈉鹽溶于水，沉淀蛋白及部分雜質(zhì)，用正己烷去脂后再酸化提取，從結(jié)果看出，8種樣品基質(zhì)干擾均明顯減少?？紤]到食品樣品基質(zhì)的特殊性，每種樣品的基質(zhì)都不盡相同，基質(zhì)匹配定量在日常檢測的應(yīng)用中會(huì)受到限制，本實(shí)驗(yàn)采用溶劑標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)行定量。

3 結(jié)論

本文通過比較GB 5009.121—2016氣相色譜法中兩種試樣制備方法中醋和蛋白飲料的回收率，發(fā)現(xiàn)面包、糕點(diǎn)、烘烤食品餡料、復(fù)合調(diào)味料、預(yù)制肉制品及熟肉制品的前處理方法適用于醋和蛋白飲料中脫氫乙酸測定，其結(jié)果更可靠、準(zhǔn)確。