游 江, 高亞強, 周 蒲, 郭倩男, 徐志紅*,,2

(1. 長江大學 農(nóng)學院，湖北 荊州 434025；2. 長江大學 農(nóng)藥研究所，湖北 荊州 434025)

三唑類衍生物在醫(yī)藥和農(nóng)藥領(lǐng)域中應(yīng)用廣泛，有抗病毒[1]、抗細菌[2]、抗真菌[3]、殺蟲[4]、除草[5]及植物生長調(diào)節(jié)[6]等生物活性，其中三唑類殺菌劑對真菌麥角甾醇的生物合成有較好的抑制作用，從而破壞真菌細胞膜的結(jié)構(gòu)和功能[7]。

毒扁豆堿是天然的氨基甲酸酯類化合物，以毒扁豆堿為模板已經(jīng)開發(fā)出不同的氨基甲酸酯類化合物，其中氨基甲酸的肟 (酚) 基酯類可作為殺螨和殺蟲劑，如茚蟲威和丁硫克百威[8]等；而芳基氨基甲酸酯類則多具有殺菌活性，如乙霉威和異丙菌胺，其中含有雜環(huán)的氨基甲酸酯類則具有較好的殺菌活性，如多菌靈、苯菌靈和吡唑醚菌酯等[9]。此外，一些含有三唑環(huán)的氨基甲酸酯類化合物具有抗菌和殺蟲活性，Kumar 等[10]設(shè)計了2-(1-取代-1,2,3-三唑-4-基)-甲氨基-1-苯氨基甲酸叔丁醇酯(1)和2-雙 (1-取代-1,2,3-三唑-4-基)-甲氨基-1-苯氨基甲酸叔丁醇(2) (圖式1)，生物活性測定結(jié)果表明，兩個化合物均具有一定抑制細菌和真菌的活性，對金黃色葡萄球菌的最低抑菌濃度 (MIC)與對照藥劑環(huán)丙沙星相同。

圖式1 兩類2-(1,2,3-三唑-4-基)-甲氨基-1-苯基氨基甲酸酯的化學結(jié)構(gòu)Scheme 1 The structures of two classes of 2-(1,2,3-triazol-4-yl)-methylamino-1-phenylcarbamate

賈長青等[11]合成了兩個新型1-取代-3-取代苯基-1,2,4-三唑-5-氨基甲酸乙酯(3)及1-取代-3-取代苯基-1,2,4-三唑啉-4-乙氧羰基-5-亞氨基甲酸乙酯(4) (圖式2)，大部分化合物對桃蚜具有良好的殺蟲活性，在500 μg/mL 時致死率大于90%。

圖式2 兩類1,2,4-三唑-5-氨基甲酸乙酯的化學結(jié)構(gòu)Scheme 2 The structures of two classes of ethyl 1,2,4-triazole-5-carbamate

基于本課題組前期研究結(jié)果[12-13]，本研究以2′-氯-2,4-二氟苯乙酮為起始原料，將活性亞結(jié)構(gòu)1,2,4-三氮唑和取代苯基氨基甲酸酯拼接入結(jié)構(gòu)中，合成了一系列N-取代苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基氨基甲酸酯，并進行了殺菌活性和殺螨活性測定，以期篩選出活性較好的新化合物。

目標化合物的合成路線如圖式3 所示。

圖式3 目標化合物的合成路線Scheme 3 Synthetic route of target compounds

1 材料與方法

1.1 藥劑與儀器

所有化學藥品均為市售國產(chǎn)試劑。 98%烯唑醇 (diniconazole)原藥，江蘇常隆化工有限公司；95%阿維菌素B1a (Avermectin B1a) 原藥，湖北中隆康盛精細化工有限公司。

Bruker Avance DPX400 型核磁共振儀 (以TMS 作內(nèi)標物，CDCl3和DMSO-d6作溶劑，德國-瑞士布魯克光譜公司)；WRR 熔點測定儀 (上海精密科學儀器有限公司)；Themo scientific QExactive 型高分辨質(zhì)譜儀 (ESI-MS，賽默飛世爾科技 (中國) 有限公司)。

1.2 供試真菌及螨源

水稻紋枯病菌Rhizoctonia solani、小麥赤霉病菌Fusarium graminearum、番茄早疫病菌Altemaria solani、油菜菌核病菌Sclerotinia scleotiorum、棉花枯萎病菌Fusarium oxysporium和辣椒疫病病菌Phytophthora capsici，由長江大學農(nóng)學院植物病理實驗室提供。

朱砂葉螨Tetranychus cinnabarinus，為齡期一致、行動活躍的雌成螨，由長江大學昆蟲研究所提供。

1.3 化合物的合成

1.3.1 2,4-二氟-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 苯乙酮(2)的合成 參考文獻[14]的方法合成，得到白色固體(2)，收率70%，熔點 103～105 ℃ (文獻[13]值：收率75%，m.p. 103～105 ℃)。

1.3.2 1-(2,4-二氟苯基)-1-羥基-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)-乙醇 (3)的合成 參考文獻[15]的方法略為改進。將化合物2 (0.01 mol，2.23 g) 溶于50 mL甲醇中，在冰浴下 (-5～0 ℃) 緩慢加入硼氫化鈉(0.015 mol，0.56 g)，再室溫反應(yīng)1 h 后再加熱回流1 h。反應(yīng)液冷卻至室溫后減壓旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分溶劑，加水50 mL，析出大量白色固體，抽濾、水洗、烘干，得到白色固體2 g，收率90%，熔點 118～120 ℃ (文獻[14]值：收率85%，m.p.118～120 ℃)。

1.3.3 不同取代基的苯基異氰酸酯 (5)的合成通法

參考文獻[16-17] 的方法合成。將固體光氣(0.005 mol, 1.48 g) 充分溶于30 mL 1,2-二氯乙烷溶液中，在冰浴條件 (-5～0 ℃) 下，將溶于20 mL 1,2-二氯乙烷的不同取代基苯胺 (0.01 mol)溶液通過恒壓滴定漏斗緩慢滴加至含固體光氣的混合液中并攪拌。滴畢室溫攪拌1 h，加熱至回流4 h，先常壓蒸餾出溶劑和雜質(zhì)，再減壓蒸餾出含不同取代基的苯基異氰酸酯5a～5r，收率65%～83%。

1.3.4 目標化合物 (6a～6r)合成 將化合物3 (0.01 mol, 2.25 g) 溶解于40 mL 乙酸乙酯中，加入叔丁醇鈉 (0.01 mol, 0.96 g)，室溫下攪拌10 min，用恒壓滴定漏斗緩慢滴加含化合物5a～5r (0.011 mol)的20 mL 乙酸乙酯溶液，室溫反應(yīng)3 h，薄層色譜 (展開劑為V(乙酸乙酯) :V(石油醚)=2 : 1)監(jiān)測至反應(yīng)完畢。除去溶劑后，殘余物用層析柱分離，洗脫液為V(乙酸乙酯) :V(石油醚)=1 : 1，得到目標化合物6a～6r。

N-鄰硝基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基氨基甲酸酯(6a)：淡黃色固體，收率78%，m.p. 139.9～142.1 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：10.00 (s，1H)，8.39 (dd，J= 8.4，1.2Hz，1H)，8.20 (dd，J= 8.4，1.6 Hz，1H)，8.08 (s，1H)，7.94 (s，1H)，7.63～7.57 (m，1H)，7.38～7.31 (m，1H)，7.17～7.12 (m，1H)，6.92 (dd，J=8.0，2.4 Hz，1H)，6.87 (dd，J= 9.6，3.2 Hz，1H)，6.38(dd，J= 8.0，4.4 Hz，1H)，4.70 (dd，J= 14.4，8.0 Hz，1H)，4.61 (dd，J= 14.4，4.4 Hz，1H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.52 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 13.1 Hz)，159.73 (dd，JC-F= 250.5，JC-F= 12.1 Hz )，152.25，151.65，144.99，141.59，134.31，131.65，129.63(dd，J= 9.1，J=5.1 Hz )，125.31，125.05，124.72，120.51 (dd，J= 14.1J= 4.0 Hz)，112.07 (dd，J= 21.2，J=2.0 Hz)，104.31 (t，J= 26.3 Hz)，68.79，51.53； HRMS，計算值C17H13F2N5O4([M + H]+)：390.100 8，實測值390.101 8.

N-對硝基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6b)：白色固體，收率69%，m.p.203.5～205.2 ℃；1H NMR (400 MHz，DMSO)，δ：10.61(s，1H)，8.52 (s，1H)，8.21～8.18 (m，1H)，8.18～8.16(m，1H)，7.97 (s，1H)，7.66～7.64 (m，1H)，7.64～7.61(m，1H)，7.46 (td，J= 8.4，6.8 Hz，1H)，7.37～7.29 (m，1H)，7.15 (td，J= 8.4，2.0 Hz，1H)，6.28 (dd，J= 7.6，4.8 Hz，1H)，4.82 (dd，J= 14.4，7.6 Hz，1H)，4.73 (dd，J= 14.4，4.8 Hz，1H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.51 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.79 (dd，JC-F=249.5，JC-F= 13.1 Hz)，151.90，151.62，145.29，145.05，142.00，129.69 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，125.07，120.5(dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，118.06，112.09 (dd，J= 21.2，J=3.0 Hz)，104.34 (t，J= 26.3 Hz)，68.55，51.48；HRMS，計算值C17H13F2N5O4([M + H]+)； 390.100 8，實測值390.100 4.

N-鄰甲基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6c)：白色固體，收率77%，m.p.103.4～105.7 ℃；1H NMR (400 MHz，DMSO),δ：9.09 (s，1H)，8.49 (s，1H)，7.96 (s，1H)，7.45 (s，1H)，7.36～7.26 (m，1H)，7.17 (dd，J= 15.6，7.6 Hz，3H)，7.11 (d，J= 7.6 Hz，1H)，7.06 (t，J= 7.2 Hz，1H)，6.21 (dd，J=7.6，4.4 Hz，1H)，4.73 (dd，J= 14.0，7.6 Hz，1H)，4.65(dd，J= 14.0，4.0 Hz，1H)，2.12 (s，3H).13C NMR (101 MHz，DMSO),δ：162.41 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.69 (dd，JC-F= 249.5，JC-F= 12.1 Hz)，152.96，151.56，145.00，135.84，130.40，129.45 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，126.17，125.43，121.11 (dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，112.03(dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz)，104.27 (t，J= 25.3 Hz )，67.86，51.86，17.68； HRMS，計算值C18H16F2N4O2([M + H]+)：359.131 4，實測值359.132 2.

N-間甲基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6d)：白色固體，收率78%，m.p.137.5～139.2 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.02(s，1H)，7.93 (s，1H)，7.19 (dt，J= 23.2，8.0 Hz，3H)，7.08 (d，J= 8.0 Hz，1H)，6.98 (s，1H)，6.89 (d，J= 2.4 Hz，1H)，6.87 (dd，J= 4.0，2.0 Hz，1H)，6.86～6.82 (m，1H)，6.32 (dd，J= 6.8，4.8 Hz，1H)，4.70～4.58 (m，2H)，2.31 (s，3H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.41 (dd，JC-F= 247.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.98 (dd，JC-F=249.5，JC-F= 12.1 Hz)，151.97，151.62，138.54，138.10，129.53 (dd，J= 10.1，J=5.1 Hz)，128.71，123.61，121.02(dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，118.91，115.64，112.06 (dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz)，104.31 (t，J= 26.3 Hz)，67.82，51.67，21.24； HRMS，計算值C18H16F2N4O2([M + H]+)：359.131 4，實測值359.131 5.

N-對甲基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6e)：白色固體，收率75%，m.p.165.6～167.4 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.02(s，1H)，7.92 (s，1H)，7.26～7.16 (m，3H)，7.09 (d，J=8.0 Hz，2H)，6.90～6.82 (m，2H)，6.80 (s，1H)，6.32(dd，J= 6.8，4.8 Hz，1H)，4.69～4.58 (m，2H)，2.29 (s，3H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.40 (dd，JC-F=248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.72 (dd，JC-F= 250.5，JC-F=13.1 Hz)，151.99，151.58，145.01，136.06，131.77，129.54 (dd，J= 10.1，J=5.1 Hz)，129.26，121.05 (dd，J=14.1，J= 4.0 Hz)，118.29，114.12，112.06 (dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz)，104.31 (t，J= 26.3 Hz)，67.76，51.69，20.40； HRMS，計算值C18H16F2N4O2([M + H]+)：359.131 4，實測值359.132 0.

N-鄰氯苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6f)：白色固體，收率72%，m.p.102.7～104.1 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.08(s，1H)，8.00 (d，J= 8.0 Hz，1H)，7.94 (s，1H)，7.34(dd，J= 8.0，1.2 Hz，1H)，7.33～7.27 (m，1H)，7.25～7.19(m，2H)，7.05～6.97 (m，1H)，6.92～6.85 (m，2H)，6.36(dd，J= 7.6，4.4 Hz，1H)，4.69 (dd，J= 14.4，7.6 Hz，1H)，4.62 (dd，J= 14.4，4.4 Hz，1H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.43 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 13.1 Hz)，159.65 (dd，JC-F= 249.5，JC-F= 12.1 Hz)，152.71，151.57，145.07，134.55，129.66，129.26 (dd，J= 10.1，J=5.1 Hz)，127.67，126.79，126.46，120.87 (dd，J= 13.1，J=3.0 Hz)，112.07 (dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz)，104.29 (t，J=25.3 Hz)，68.21，51.79； HRMS，計算值C17H13ClF2N4O2([M + H]+)：379.076 8，實測值379.077 6.

N-間氯苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6g)：白色固體，收率73%，m.p.140.5～142.2 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.03(s，1H)，7.95 (s，1H)，7.54 (s，1H)，7.46 (s，1H)，7.24～7.13 (m，3H)，7.06～7.01 (m，1H)，6.91～6.86 (m，1H)，6.84 (dd，J= 8.0，2.4 Hz，1H)，6.33 (dd，J= 6.8，4.4 Hz，1H)，4.67 (dd，J= 14.8，7.2 Hz，1H)，4.62 (dd，J=14.8，4.4 Hz，1H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.46 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.77 (dd，JC-F=250.5，JC-F=13.1 Hz)，151.92，151.61，144.99，140.18，133.29，130.55，129.63 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，122.58，120.71 (dd，J= 14.1 ，J= 4.0 Hz)，117.78，116.84，112.06 (dd，J= 22.2，J= 4.0 Hz)，104.33 (t，J= 25.3 Hz)，68.21，51.54； HRMS，計算值C17H13ClF2N4O2([M +H]+)：379.076 8，實測值379.076 7.

N-間氟苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6h)：白色固體，收率75%，m.p.143.8～145.1 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.01(s，1H)，7.94 (s，1H)，7.26 (d，J= 4.8Hz，1H)，7.22(ddd，J= 10.8，6.0，3.2 Hz，2H)，7.09 (s，1H)，6.98(dd，J= 8.0，1.2 Hz，1H)，6.87 (ddt，J= 14.0，5.6，2.8 Hz，2H)，6.77 (td，J= 8.4，2.0 Hz，1H)，6.33 (dd，J=6.8，4.4 Hz，1H)，4.67 (dd，J= 15.2，7.6 Hz，1H)，4.62(dd，J= 14.4，4.4 Hz，1H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.48 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 13.1 Hz)，162.37 (d，JC-F= 242.4 Hz)，159.78 (dd，JC-F= 250.5，JC-F=13.1 Hz)，151.93，151.64，145.02，140.51 (d，J= 11.1 Hz)，130.57 (d，J= 10.1 Hz)，129.65 (dd，J= 10.1，J= 6.1 Hz)，120.76 (dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，114.21，112.1 (dd，J= 21.2,J= 3.0 Hz)，109.34 (d，J= 21.2 Hz)，105.11 (d，J= 27.3 Hz)，104.37 (t，J= 25.3 Hz)，68.17，51.56； HRMS，計算值C17H13F3N4O2([M + H]+)：363.106 3，實測值363.106 8.

N-對氟苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6i)：白色固體，收率78%，m.p.140.4～142.3；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.02 (s，1H)，7.93 (s，1H)，7.33～7.26 (m，2H)，7.24～7.17 (m，1H)，6.98 (t，J= 8.8 Hz，3H)，6.91～6.82 (m，2H)，6.32(dd，J= 6.8，4.8 Hz，1H)，4.66 (dd,J=16.0,8.0 HZ1H)，4.61 (dd，J= 14.4，4.4 Hz，1H).13C NMR (101 MHz ，DMSO )，δ：162.42 (dd，JC-F= 248.5 ，JC-F= 12.1 Hz )，159.73 (dd，JC-F= 250.5 ，JC-F= 13.1 Hz )，157.9 (d，JC-F=240.4 Hz )，152.10，151.59，144.99，134.975 (d，J=1.0 Hz)，129.57 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，120.90 (dd，J= 13.1，J= 3.0 Hz)，120.10 (d，J= 2.0 Hz)，115.43 (d，J= 23.2 Hz)，112.05 (dd，J= 21.2 ，J= 3.0 Hz)，104.30(t，J= 25.3 Hz)，67.94，51.63； HRMS，計算值C17H13F3N4O2([M + H]+)； 363.106 3，實測值363.106 8.

N-間溴苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6j)：白色固體，收率79%，m.p.145.7～147.2 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.01(s，1H)，7.94 (s，1H)，7.61 (s，1H)，7.27 (s，1H)，7.25～7.17 (m，3H)，7.16～7.10 (m，1H)，6.92～6.82 (m，2H)，6.32 (dd，J= 6.8，4.4 Hz，1H)，4.67 (dd，J= 14.8，7.2 Hz，1H)，4.62 (dd，J= 14.8，4.4Hz，1H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.45 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.76 (dd，JC-F= 250.5，JC-F= 12.1 Hz)，151.89，151.60，144.98，140.30，130.85，129.62 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，125.49，121.72，120.70 (dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，117.22，112.06 (dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz)，104.32 (t，J= 26.3 Hz)，68.20，51.52； HRMS，計算值C17H13BrF2N4O2([M + H]+)：423.026 3，實測值423.026 8.

N-對溴苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6k)：白色固體，收率76%，m.p.152.7～154.6 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.18(s，1H)，7.97 (s，1H)，7.38 (d，J= 8.4 Hz，2H)，7.30(s，1H)，7.22 (d，J= 12.0 Hz，2H)，6.87 (dd，J= 16.0，8.0 Hz，2H)，6.32 (s，1H)，4.72～4.65 (m，1H)，4.65～4.58 (m，1H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.44 (dd，JC-F= 248.5,JC-F= 12.1 Hz)，159.75 (dd，JC-F=250.5，JC-F= 13.1 Hz)，151.92，151.62，145.00，138.07，131.67，129.61 (dd，J= 10.1，J= 5.1Hz)，120.79 (dd，J=14.1，J= 4.0 Hz)，120.32，114.52，112.07 (dd，J= 22.2，J= 4.0 Hz)，104.33 (t，J= 26.3 Hz)，68.08，51.57；HRMS，計算值C17H13BrF2N4O2([M + H]+)：423.026 3，實測值423.026 3.

N-間異丙基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6l)：白色固體，收率73%，m.p.134.6～136.3 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.03(s，1H)，7.93 (s，1H)，7.21 (q，J= 7.6 Hz，3H)，7.13(d，J= 8.0 Hz，1H)，7.04 (s，1H)，6.95 (d，J= 7.6 Hz，1H)，6.91～6.81 (m，2H)，6.33 (dd，J= 6.8，4.8 Hz，1H)，4.66 (dd，J= 13.6，6.0 Hz，1H)，4.61 (dd，J= 13.6，4.0 Hz，1H)，2.92～2.79 (m，1H)，1.21 (d，J= 6.8 Hz，6H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.43 (dd，JC-F=248.5，JC-F= 12.1Hz)，159.72 (dd，JC-F= 249.5，JC-F=12.1Hz)，152.00，151.59，149.20，145.06，138.59，129.51 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，128.80，121.05 (dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，121.03，116.34，115.97，112.09(dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz)，104.33 (t，J= 26.3 Hz)，67.81，51.73，33.58，23.92，23.90； HRMS，計算值C20H20F2N4O2([M + H]+)：387.162 7，實測值387.162 6.

N-對異丙基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6m)：白色固體，收率74%，m.p.152.6～154.7 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.03(s，1H)，7.92 (s，1H)，7.21 (dd，J= 20.0，8.4 Hz，3H)，7.14 (d，J= 8.4 Hz，2H)，7.08 (s，1H)，6.89～6.81 (m，2H)，6.32 (dd，J= 6.4，4.8 Hz，1H)，4.66 (dd，J=13.6，5.6 Hz，1H)，4.61 (dd，J= 13.2，3.6 Hz，1H)，2.92～2.76 (m，1H)，1.21 (d，J= 6.8 Hz，6H).13C NMR(101 MHz，DMSO)，δ：162.42 (dd，JC-F= 248.5，JC-F=12.1 Hz)，159.73 (dd，JC-F= 249.5，JC-F= 12.1 Hz)，152.04，151.60，145.04，142.99，136.34，129.53 (dd，J=10.1，J= 5.1 Hz )，126.61，121.06 (dd，J= 13.1，J= 3.0 Hz)，118.50，112.07 (dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz)，104.33 (t，J=25.3 Hz)，67.77，51.74，32.87，24.04； HRMS，計算值C20H20F2N4O2([M + H]+)：387.162 7，實測值387.163 5.

N-間甲氧基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6n)：白色固體，收率75%，m.p.153.7～155.3 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.02(s，1H)，7.93 (s，1H)，7.25～7.13 (m，3H)，7.04 (s，1H)，6.85 (dt，J= 9.6，2.0 Hz，3H)，6.62 (dd，J= 8.0，1.6 Hz，1H)，6.33 (dd，J= 6.4，4.8 Hz，1H)，4.66 (dd，J= 13.6，6.4 Hz，1H)，4.62 (t，J= 6.4 Hz，1H)，3.76(s，3H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.46 (dd ，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.75 (dd，JC-F= 250.5，JC-F= 13.1 Hz)，159.74，151.93，151.62，145.06，139.86，129.74，129.57 (dd ，J= 10.1，J=5.1 Hz)，120.97(dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，112.10 (dd，J= 21.2，J=3.0 Hz)，110.69，108.37，104.36 (t，J= 25.3 Hz)，67.91，55.05，51.69； HRMS，計算值C18H16F2N4O3([M + H]+)：375.126 3，實測值375.126 0.

N-對甲氧基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基氨基甲酸酯(6o)：白色固體，收率79%. m.p. 137.8～139.5 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.03 (s，1H)，7.92 (s，1H)，7.25～7.17 (m，2H)，6.90～6.86 (m，1H)，6.86～6.75 (m，4H)，6.34～6.28 (m，1H)，4.71～4.55(m，2H)，3.77 (s，3H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.42 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.73 (dd，JC-F= 250.5，JC-F= 13.1 Hz)，155.12，152.15，151.61，145.04，131.64，129.55 (dd，J= 10.1，J= 6.1 Hz)，121.12(dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，119.98，114.08，112.08 (dd，J=21.2，J= 4.0 Hz)，104.33 (t，J= 25.3 Hz)，67.73，55.25，51.76； HRMS，計算值C18H16F2N4O3([M + H]+)：375.126 3，實測值375.126 3.

N-對乙基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6p)：白色固體，收率73%，m.p.140.5～142.8 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.02(s，1H)，7.92 (s，1H)，7.21 (t，J= 10.4 Hz，3H)，7.12(d，J= 8.4 Hz，2H)，6.94～6.88 (m，1H)，6.86 (t，J=2.0 Hz，1H)，6.86～6.82 (m，1H)，6.32 (dd，J= 6.4，4.8 Hz，1H)，4.66 (dd，J= 13.6，6.0 Hz，1H)，4.61 (dd，J= 14.4，4.4 Hz，1H)，2.59 (q，J= 7.6 Hz，2H)，1.19(t，J= 7.6 Hz，3H).13C NMR (101 MHz，DMSO),δ：162.42 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.74 (dd，JC-F=249.5，JC-F= 12.1 Hz)，152.04，151.60，145.04，138.32，136.27，129.55 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，128.10,121.06(dd，J= 13.1，J= 3.0 Hz)，118.48,112.08 (dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz)，104.32 (t，J= 26.3 Hz)，67.78，51.73，27.59，15.81； HRMS，計算值C19H18F2N4O2([M + H]+)：373.147 1，實測值373.147 2.

N-對叔丁基苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基) 乙基氨基甲酸酯(6q)：白色固體，收率73%，m.p.181.9～183.7 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.03(s，1H)，7.92 (s，1H)，7.28 (t，J= 11.6 Hz，3H)，7.26～7.21 (m，2H)，7.21～7.17 (m，1H)，7.16 (d，J= 8.4 Hz，1H)，6.89～6.85 (m，1H)，6.82 (dd，J= 7.6，2.4 Hz，1H)，6.33 (dd，J= 6.4，4.8 Hz，1H)，4.66 (dd，J=13.2，5.2 Hz，1H)，4.61 (dd，J= 13.2，3.2 Hz，1H)，1.28 (s，9H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.42(dd，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.73 (dd，JC-F=249.5，JC-F= 12.1 Hz)，152.04，151.59，145.25，145.04，136.02，129.52 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，125.51，121.06(dd，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，118.19，112.07 (dd，J=22.2，J= 4.0 Hz )，104.32 (t ，J= 26.3 Hz )，67.77，51.75，34.01，31.27 ； HRMS，計算值C21H22F2N4O2([M + H]+)：401.178 4，實測值401.178 6.

N-苯基-1-(2,4-二氟苯基)-2-(1H-1,2,4-三唑-1-基)乙基氨基甲酸酯(6r)：白色固體，收率77%，m.p. 106.1～107.4 ℃；1H NMR (400 MHz，CDCl3)，δ：8.03 (s，1H)，7.93 (s，1H)，7.31 (dd，J= 14.4，7.6 Hz，4H)，7.21 (dd，J=14.8，8.4 Hz，2H)，7.07 (t，J= 7.2 Hz，1H)，6.90～6.86(m，1H)，6.83 (dd，J= 7.2，2.8 Hz，1H)，6.33 (dd，J=6.8，4.4 Hz，1H)，4.66 (dd，J= 14.0，6.4 Hz，1H)，4.62(dd，J= 14.4，4.4 Hz，1H).13C NMR (101 MHz，DMSO)，δ：162.39 (dd，JC-F= 248.5，JC-F= 12.1 Hz)，159.71 (dd，JC-F= 250.5，JC-F= 13.1 Hz)，151.96，151.56，144.98，138.59，129.53 (dd，J= 10.1，J= 5.1 Hz)，128.84，122.87，120.95 (dd ，J= 14.1，J= 4.0 Hz)，118.39，112.03(dd，J= 21.2，J= 3.0 Hz )，104.28 (t，J= 26.3 Hz)，67.84，51.65； HRMS，計算值C17H14F2N4O2([M + H]+)：345.115 8，實測值345.116 3.

1.4 生物活性測定

1.4.1 殺菌活性的測定 采用菌絲生長速率法[18]測定化合物6a～6r 對6 種植物病原真菌的殺菌活性?；衔餄舛?00 μmol/L，以烯唑醇為對照藥劑，每處理設(shè)3 個重復。菌餅直徑7 mm。按 (1)式計算抑制率。

(1)式中：I為抑制率，%；Dck為空白對照菌落直徑，mm；Dt為藥劑處理菌落直徑，mm。

選擇活性好的化合物測定EC50值：根據(jù)上述方法，采用等倍稀釋，以烯唑醇為對照藥劑，計算化合物在100、50、25、12.5 和6.25 μmol/L 時的抑制率，采用軟件DPS18.10 計算EC50值和95%置信限。

1.4.2 殺螨活性的測定 參考文獻[19]的瓊脂保濕浸葉法，略加改進。配制質(zhì)量分數(shù)為0.1%的瓊脂水溶液，將待測化合物用1mL 丙酮溶解，加入質(zhì)量分數(shù)為0.1%的吐溫80 水溶液配制成濃度為150 μmol/L 供試藥液。選取大小一致的豇豆葉片，浸入藥液中10 s 后取出晾干。將晾干的帶藥葉片葉背朝上貼在瓊脂表面。用細毛筆將雌成螨挑入葉片，每片30 頭。每組處理3 次重復，以阿維菌素B1a 為對照藥劑。將處理后的雌成螨轉(zhuǎn)移至恒溫箱[ (25±1) ℃，相對濕度65%，光周期12L：12D]內(nèi)分別飼養(yǎng)24 h 和48 h 后，觀察結(jié)果并計算死亡率。以小毛筆輕觸蟲體，以蟲體不動無反應(yīng)判斷為死亡。按 (2) 式計算校正死亡率。采用軟件DPS18.10 計算死亡率。

(2)式中：Mc為校正死亡率，%；Mt為施藥組死亡率，%；Mck為空白對照組死亡率，%

2 結(jié)果與討論

2.1 化合物的合成

在化合物6a～6r 合成中，發(fā)現(xiàn)苯基異氰酸酯未能與中間體3 反應(yīng)，參考相關(guān)反應(yīng)機理[20]，加入催化劑叔丁醇鈉，叔丁醇鈉可與中間體3 形成醇鈉結(jié)構(gòu)，其親核能力強于醇羥基，中間體3 便可與苯基異氰酸酯反應(yīng)。

2.2 化合物的生物活性

2.2.1 殺菌活性 離體殺菌活性測試結(jié)果 (表1)表明：在100 μmol/L 時，目標化合物6m 對于供試的6 種病原真菌的生長均有良好的抑制作用；化合物6m、6o 和6p 對油菜菌核病菌的抑制率分別為66.6%、67.4 %和67.6%，與對照藥劑烯唑醇抑菌效果相當；化合物6k 對水稻紋枯病菌也有良好的抑菌活性；但大多數(shù)化合物對這6 種真菌的抑菌活性較弱。根據(jù)初篩結(jié)果，測定了高活性化合物對油菜菌核病菌的EC50值，結(jié)果 (表2) 表明，化合物6m 和6p 對油菜菌核病菌的抑菌活性較好，其EC50值分別為9.7 和7.1 μmol/L，其中化合物6p 的EC50值低于對照藥劑烯唑醇 (EC50值9.1 μmol/L)。

表1 目標化合物對6 種植物病原真菌的抑制作用Table 1 Inhibition of target compounds against six pathogenic fungi in vitro

表2 部分化合物對油菜菌核病菌的EC50 值Table 2 The EC50 value of some compounds against S. sclerotiorum

由抑菌活性結(jié)果可以看出，當與氨基相連的苯環(huán)上的取代基為給電子基時，對位取代的化合物的活性均高于鄰位和間位取代；當苯環(huán)上取代基為吸電子基硝基時，鄰位取代的化合物活性強于對位取代。當對位取代基為烷烴時，給電子能力為叔丁基 ＞ 異丙基 ＞ 乙基 ＞ 甲基，但發(fā)現(xiàn)當對位取代基為異丙基時，化合物對6 種供試病原菌的抑菌活性較好，而當對位取代基為叔丁基時活性遠差于異丙基取代。這些發(fā)現(xiàn)對后期以該化合物為母體設(shè)計新的三唑類化合物提供了思路。

2.2.2 殺螨活性 殺螨活性測定結(jié)果表明：在150 μmol/L 下，用化合物處理朱砂葉螨24 h 的致死效果一般；48 h 時6h、6k 和6o 對朱砂葉螨的致死率分別為67.7%、74.9%和57.5%，但遠低于對照藥劑阿維菌素B1a (表3)。

表3 目標化合物對朱砂葉螨的殺螨活性Table 3 Insecticidal activities of target compounds against T. cinnabarinu

3 結(jié)論

抑菌活性結(jié)果表明：在100 μmol/L 時，目標化合物6m 對6 種供試真菌表現(xiàn)出中等的抑制活性，化合物6m 和6p 對油菜菌核病菌表現(xiàn)出良好的抑菌活性，EC50值分別為為9.7 和7.1 μmol/L,其中6p 抑菌活性高于對照藥劑烯唑醇 (EC50值9.1 μmol/L)。殺螨活性測定結(jié)果表明，化合物6h、 6k 和6o 在150 μmol/L 濃度下對朱砂葉螨表現(xiàn)出良好的殺螨活性，48 h 時致死率均大于50%，但低于對照藥劑阿維菌素B1a?；衔?m 抑菌活性較好但無殺螨活性，化合物6k 殺螨活性較好但抑菌活性一般，而6o 具有一定的殺菌、殺螨活性，可為后期設(shè)計新型三唑類殺菌殺螨化合物提供思路。