郝曉娜 辛清武 李 麗 章琳俐 朱志明 繆中緯 鄭嫩珠＊

（1.福建農(nóng)林大學(xué)動物科學(xué)學(xué)院（蜂學(xué)學(xué)院） 福州 350002；2.福建省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧獸醫(yī)研究所 福州 350013）

在世界熱帶國家和地區(qū)， 高溫環(huán)境是制約畜牧生產(chǎn)領(lǐng)域發(fā)展的重要因素之一。 在我國南部地區(qū)，熱應(yīng)激對蛋禽行業(yè)的負(fù)面影響較大， 不僅降低生產(chǎn)性能， 而且嚴(yán)重的高溫易造成畜禽大面積死亡和繼發(fā)性疾病[1]。 熱應(yīng)激較大程度阻礙了養(yǎng)殖行業(yè)經(jīng)濟(jì)發(fā)展，其影響程度大小與家禽品種、日齡以及熱應(yīng)激模式有一定的相關(guān)性[2]。

家禽適宜的生長環(huán)境溫度為15~25 ℃， 高于30 ℃則會出現(xiàn)各種不良機(jī)體反應(yīng)[3]。 熱應(yīng)激對蛋禽腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和完整性產(chǎn)生不利影響[4]。 腸道穩(wěn)態(tài)與機(jī)體健康狀態(tài)密切相關(guān)[5]，腸道的正常結(jié)構(gòu)可以阻擋有害菌的侵襲， 從而保障機(jī)體正常的營養(yǎng)攝入及消化吸收功能，減少其對高溫環(huán)境的敏感度[6]。 熱應(yīng)激對家禽腸道主要有3 大方面的影響：第一，腸道功能和形態(tài)結(jié)構(gòu)方面的影響； 第二， 腸壁通透性增加，阻礙機(jī)體對營養(yǎng)成分的吸收，對生長繁殖產(chǎn)生不利影響；第三，增加腸道疾病的發(fā)生率及衍生風(fēng)險[7]。

通過添加綠色高效安全的抗氧化劑來緩解熱應(yīng)激造成的一系列負(fù)面影響，是當(dāng)前研究的熱點。表沒食子兒茶素沒食子酸酯及茶多酚在國內(nèi)外家禽生產(chǎn)中的應(yīng)用效果好、市場空間大，能夠改善家禽腸道健康[8]。 綠茶中活性最強(qiáng)的物質(zhì)是表沒食子兒茶素沒食子酸酯（EGCG），具有較強(qiáng)的抗氧化、抗菌、抗炎作用[9]。 Song 等[10]研究表明，熱應(yīng)激條件下在肉雞日糧中添加EGCG， 可通過提高機(jī)體的抗氧化能力及抑制炎性反應(yīng)來改善熱應(yīng)激對腸道的損傷。 EGCG在國內(nèi)外蛋鴨方面的生產(chǎn)應(yīng)用研究較少， 本試驗選用400 日齡健康金定鴨，探討EGCG 對熱應(yīng)激蛋鴨腸道結(jié)構(gòu)及十二指腸黏膜IgA 的影響， 為其在家禽實際生產(chǎn)開發(fā)提供合理可靠的依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗動物及材料 試驗選用400 日齡健康金定鴨240 羽，隨機(jī)分為4 組，每組3 個重復(fù)，每個重復(fù)20 羽。 NT 組（溫度22~26 ℃），HS 組（溫度33~37 ℃），NT 和HS0 組 飼 喂 基 礎(chǔ) 日 糧，HS300 和HS600 組在飼喂基礎(chǔ)日糧的基礎(chǔ)上分別添加EGCG 300 mg/kg 和600 mg/kg 。 試驗共計4 周，28 d 結(jié)束后屠宰并采集各段腸道樣本。

1.2 飼養(yǎng)管理 試驗在福建省農(nóng)科院畜牧獸醫(yī)研究所試驗基地開展， 嚴(yán)格按照金定鴨飼養(yǎng)管理標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行統(tǒng)一飼養(yǎng)。 每天早上8:30、晚上18:30 飼喂，自由飲水。 飼糧使用福建省福清華龍飼料有限公司生產(chǎn)的蛋鴨產(chǎn)蛋期配合飼料711 （產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)編號：Q/FQHL 003-2018， 飼料生產(chǎn)許可證編號： 閩飼證(2020)01352，其營養(yǎng)成分見表1。 98%表沒食子兒茶素沒食子酸酯（精細(xì)粉末、類白色、特有氣味，堆積密度0.45~0.65 g/mL）購自陜西某生物科技有限公司。

表1 基礎(chǔ)飼糧營養(yǎng)水平

1.3 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和十二指腸黏膜IgA 含量測定

1.3.1 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)測定 在試期28 d 結(jié)束時，每個重復(fù)隨機(jī)選取2 羽蛋鴨進(jìn)行屠宰，分別取1 cm 十二指腸、空腸、回腸各兩段，使用預(yù)冷的生理鹽水清洗腸段內(nèi)容物，置于多聚甲醛固定液進(jìn)行常溫固定，24 h 后用于HE 染色試驗及腸道形態(tài)測定。

用經(jīng)過高壓消毒的器械將多聚甲醛固定液中的腸段取出并做相應(yīng)修整， 將標(biāo)簽和對應(yīng)的腸段置于脫水盒，隨后對腸段進(jìn)行不同濃度酒精脫水，清洗、浸蠟、包埋、切片，將切片放置載玻片上，隨后采用蘇木素-伊紅（HE）染色方法進(jìn)行染色，最后脫水封片，使用顯微鏡觀察各腸段形態(tài)。

1.3.2 十二指腸黏膜IgA 含量測定 在試驗28 d結(jié)束時，屠宰解剖并取出十二指腸置于無RNA 酶的EP 管中，迅速置于液氮中，用于十二指腸黏膜IgA測定。

1.4 數(shù)據(jù)統(tǒng)計與分析 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)采用HE 染色，顯微鏡鏡檢并采集圖像進(jìn)行分析。十二指腸黏膜IgA 結(jié)果利用SPSS26.0 軟件進(jìn)行統(tǒng)計分析，利用單因素方差分析（ANOVA，LSD）進(jìn)行顯著性檢驗，P＜0.05 表示差異顯著，P＜0.01 表示差異極顯著。 數(shù)據(jù)用平均值±標(biāo)準(zhǔn)誤（SE）表示。

2 結(jié) 果

2.1 EGCG 對熱應(yīng)激條件下蛋鴨腸道形態(tài)的影響由腸道切片圖1 可見，對照組十二指腸、空腸、回腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)較為完整，無明顯的組織損傷，且分布密集，絨毛之間間隔清晰。熱應(yīng)激組十二指腸、空腸、回腸可見上皮脫落、絨毛損傷的現(xiàn)象，其中十二指腸和空腸的損傷較為明顯。 熱應(yīng)激后在日糧中分別添加EGCG 300 mg/kg 和600 mg/kg 的試驗組，可見腸道上皮脫落和絨毛嚴(yán)重?fù)p傷情況得到有效改善， 腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的完整性雖不比對照組好， 卻能夠?qū)釕?yīng)激后十二指腸、空腸的絨毛形態(tài)、排列以及絨毛末端的損傷起到積極作用。

2.2 EGCG 對熱應(yīng)激條件下蛋鴨十二指腸黏膜IgA的影響 由表2、圖2 可以看出，與對照組相比，HS0組十二指腸的黏膜IgA 含量極顯著降低 （P＜0.01），HS300、HS600 組可一定程度提高十二指腸的黏膜IgA 含量，但與對照組、HS0 組相比，差異均不顯著（P＞0.05）。

表2 十二指腸黏膜IgA 含量檢測結(jié)果

3 討 論

3.1 EGCG 對熱應(yīng)激條件下蛋鴨腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)的影響 熱應(yīng)激會造成家禽腸道結(jié)構(gòu)實質(zhì)性損傷[11]。雷昕[12]研究表明，EGCG 在熱應(yīng)激下添加能夠保護(hù)AA 肉雞的空腸形態(tài)結(jié)構(gòu)。 本研究表明，熱應(yīng)激導(dǎo)致小腸絨毛及黏膜結(jié)構(gòu)出現(xiàn)脫落、斷裂的現(xiàn)象，在添加EGCG 后能夠改善蛋鴨的十二指腸、 空腸和回腸的形態(tài)結(jié)構(gòu)。 與雷昕[12]的研究結(jié)果相一致。

圖1 腸道切片

圖2 十二指腸IgA 含量

3.2 EGCG 對熱應(yīng)激條件下蛋鴨十二指腸黏膜IgA的影響 腸道黏膜IgA 所構(gòu)建的免疫屏障在應(yīng)對家禽熱應(yīng)激、 控制毒素及有害菌進(jìn)入腸道起到一定的保護(hù)作用。 Liu 等[13]研究表明，熱應(yīng)激降低了腸道黏膜IgA 表達(dá)，損傷了腸道免疫功能。 林立楠[14]研究表明，十二指腸、輸卵管黏膜的IgA 含量受熱應(yīng)激的影響顯著下降。

本研究表明， 熱應(yīng)激能夠極顯著降低十二指腸IgA 含量，這與Liu 等[13]、林立楠[14]研究相一致；日糧中添加EGCG 對熱應(yīng)激下蛋鴨的十二指腸免疫球蛋白IgA 有一定的改善效果。