丁美云，劉麗杰，于夢迪，王璐瑤，孫玉婷，金忠民，李珊珊，張東向

(齊齊哈爾大學生命科學與農(nóng)林學院，黑龍江 齊齊哈爾 161006)

小麥是中國重要的糧食作物之一，小麥產(chǎn)業(yè)的發(fā)展與國家的糧食安全和社會穩(wěn)定息息相關。冬小麥具有產(chǎn)量高、品質(zhì)好的優(yōu)點，因此長期以來一直得到人們的認可。但由于溫度的影響，我國高寒地區(qū)冬小麥的種植受到限制，東農(nóng)冬麥1號是我國首例能在黑龍江省高寒地區(qū)越冬的冬小麥品種，返青率可達85%。但如遇冬天雪少，或者田間存雪困難，部分麥苗裸漏在田間時，冬小麥次年的返青也會有所下降。因此，如何有效地提高冬小麥的耐寒能力，是進一步在高寒地區(qū)廣泛推廣種植冬小麥的關鍵環(huán)節(jié)，對解決實際生產(chǎn)問題有重要的應用價值。

油菜素內(nèi)酯(brassinosteroids，BR)又稱蕓苔素，是一類存在于油菜花粉中的新型植物激素，油菜素內(nèi)酯既能調(diào)控植物的生長發(fā)育，又能提高植物的抗逆性。低溫脅迫時，油菜素內(nèi)酯能夠降低低溫對辣椒、華山松和水稻幼苗的膜質(zhì)損傷程度，促進植株的生長，提高蔬菜甘薯、華山松和水稻幼苗的抗氧化酶(CAT、POD和SOD)活性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)(可溶性糖、可溶性蛋白和游離脯氨酸)含量，增加香椿幼苗和華山松葉綠素含量和光化學活性，從而增強植物抵抗低溫的能力。4 ℃低溫脅迫下，適當濃度的表油菜素內(nèi)酯處理48 h和處理7 d均能降低小麥幼苗的電導率和MDA含量，促進脯氨酸的積累，提高 SOD和CAT的活性，表油菜素內(nèi)酯處理7 d還可增加小麥的可溶性糖和可溶性蛋白含量，提高POD的活性。目前關于油菜素內(nèi)酯對小麥低溫脅迫的影響均是在零上溫度進行，對油菜素內(nèi)酯在冬小麥越冬期持續(xù)低溫下的影響尚不清楚。本研究以冬小麥強抗寒性品種東農(nóng)冬麥1號和弱抗寒品種濟麥22(在黑龍江省不能越冬)為試驗材料，在三葉期時噴灑不同濃度的油菜素內(nèi)酯溶液(0.01 mg·L、0.1 mg·L和1 mg·L)，在越冬期不同溫度時取樣，探究在越冬期不同低溫下，油菜素內(nèi)酯對冬小麥生理代謝的影響，以期為油菜素內(nèi)酯在冬小麥抗寒栽培中的應用提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 試驗材料

供試材料為冬小麥品種冬小麥東農(nóng)冬麥 1 號和濟麥22，種子由齊齊哈爾大學生命學院植物代謝生理研究室提供。

1.2 試驗設計

挑選出粒大飽滿的東農(nóng)冬麥1號和濟麥22種子，于2020年9月8日播種在試驗田中，完全區(qū)組排列，3次重復，10行區(qū)，行長2.0 m，行距 0.5 m，每行播種200粒，播深5 cm，基施二銨23 g·m和硫酸鉀7.5 g·m，常規(guī)田間管理。在冬小麥三葉期時噴施不同濃度的BR(0.01 mg·L、0.1 mg·L和1 mg·L)，對照組噴灑蒸餾水。在越冬期溫度(連續(xù)10 d最低溫度的平均值)達到5 ℃、0 ℃、-10 ℃和-25 ℃時進行分蘗節(jié)取樣，將冬小麥分蘗節(jié)剪成1 cm長小段混勻，用液氮進行速凍，標記清楚，放入-80 ℃冰箱進行保存。

1.3 測定指標與方法

丙二醛(MDA)含量和可溶性糖含量利用TBA比色法測定，可溶性蛋白含量利用考馬斯亮藍法測定，游離脯氨酸含量利用磺基水楊酸法測定，過氧化物酶(POD)活性利用比色法測定，超氧化物歧化酶(SOD)活性利用NBT顯色法測定，過氧化氫酶(CAT)活性利用高錳酸鉀滴定法測定。

1.4 數(shù)據(jù)分析

每個處理包括3個生物學重復。數(shù)據(jù)用 SPSS 20.0 軟件按單因素進行方差分析，在=0.05顯著性水平上對不同處理間差異顯著性進行分析。

2 結果與分析

2.1 越冬期不同低溫下油菜素內(nèi)酯對冬小麥分蘗節(jié)膜質(zhì)損傷的影響

在對照組和BR處理組，隨著溫度的降低，東農(nóng)冬麥1號和濟麥22分蘗節(jié)的 MDA含量均逐漸上升；隨著BR濃度的提高，MDA含量整體呈現(xiàn)先降后升的趨勢，并且處理組始終低于對照組。當 BR濃度為0.1 mg·L時，東農(nóng)冬麥1號和濟麥22膜質(zhì)損傷程度達到最低，東農(nóng)冬麥1號與對照組相比，不同溫度(5、0、-10和25 ℃)下MDA含量分別降低了19.2%、38.8%、20.2%、 37.3%，在0 ℃、 -10 ℃和-25 ℃時與對照組差異均達到顯著水平(<0.05)；濟麥22與對照組相比，不同溫度下MDA含量分別降低了 18.2%、8.2%、 1.9%、37.0%，在-25 ℃時與對照組差異達到顯著水平；東農(nóng)冬麥1號比濟麥22的膜質(zhì)損傷程度低(圖1)。

CK：對照； D：東農(nóng)冬麥1號； J：濟麥22； 1～3分別代表0.01、0.1和1 mg·L-1三種BR濃度；圖柱上不同字母表示同一品種不同處理間差異顯著(P<0.05)。下圖同。

2.2 越冬期不同低溫下油菜素內(nèi)酯對冬小麥分蘗節(jié)抗氧化酶活性的影響

在對照組和BR處理組，隨著溫度的降低東農(nóng)冬麥1號和濟麥22的SOD活性均呈現(xiàn)上升的趨勢，CAT活性呈現(xiàn)先降后升的趨勢；隨著BR濃度的提高，SOD活性整體呈現(xiàn)先降后升的趨勢，CAT活性整體呈現(xiàn)先升后降的趨勢，并且處理組始終高于對照組。當BR濃度為0.1 mg·L時東農(nóng)冬麥1號和濟麥22的SOD和CAT活性均達到最高，其中東農(nóng)冬麥1號SOD活性在5、0、-10和-25 ℃下較對照組分別上升了 61.4%、44.1%、48.4%、41.3%，CAT活性分別上升了36.6%、70.1%、73.6%、31.6%，差異均達到顯著水平；濟麥22的SOD活性在5、0、 -10和-25 ℃較對照組分別上升了 62.6%、 54.0%、45.4%、45.8%，CAT活性分別上升了 37.0%、55.2%、66.6%、52.7%，差異均達到顯著水平。東農(nóng)冬麥1號分蘗節(jié)中CAT活性顯著高于濟麥22(圖2、圖3)。

圖2 油菜素內(nèi)酯對小麥分蘗節(jié)SOD活性的影響

圖3 油菜素內(nèi)酯對冬小麥分蘗節(jié)CAT活性的影響

隨著溫度的降低，東農(nóng)冬麥1號和濟麥22 的POD活性均呈現(xiàn)先降后升的趨勢；BR處理后，隨著BR濃度的升高，POD活性整體呈現(xiàn)先升后降的趨勢，并且處理組始終高于對照組。當BR濃度為0.1 mg·L時，POD活性達到最高值，其中東農(nóng)冬麥1號的POD活性較對照組分別升高了30.9%、32.2%、 39.0%、14.1%；濟麥22的POD活性分別降低了9.4%、50.4%、27.8%、23.4%，除濟麥22在5和-10 ℃下外，兩個品種的BR處理與對照組在各溫度下差異均顯著(圖4)。

圖4 油菜素內(nèi)酯對小麥分蘗節(jié)POD活性的影響

2.3 越冬期不同低溫下油菜素內(nèi)酯對冬小麥分蘗節(jié)滲透調(diào)節(jié)能力的影響

在對照組和BR處理組中，隨著溫度的降低，東農(nóng)冬麥1號和濟麥22可溶性糖含量均呈現(xiàn)先升后降的趨勢，但不同溫度間差異不顯著。不同濃度的BR處理后，可溶性糖含量與對照組相比差異也均不顯著(圖5)。

圖5 油菜素內(nèi)酯對冬小麥分蘗節(jié)可溶性糖含量的影響

在對照組和BR處理組中，隨著溫度的降低，東農(nóng)冬麥1號和濟麥22可溶性蛋白含量均呈現(xiàn)先上升后降的趨勢，當BR濃度為0.1 mg·L時可溶性蛋白含量最高，并且處理組始終高于對照組。其中，東農(nóng)冬麥1號的可溶性蛋白含量在5、0、-10和-25 ℃下與對照組相比分別增加了17.8%、23.7%、20.5%、45.9%，濟麥22的可溶性蛋白含量分別增加了 27.9%、31.9%、27.6%、35.0%，除濟麥22的5 ℃外，各溫度下兩個品種的BR處理組與對照組差異均顯著(圖6)。

圖6 油菜素內(nèi)酯對小麥分蘗節(jié)可溶性蛋白含量的影響

在對照組和BR處理組中，隨著溫度的降低，東農(nóng)冬麥1號和濟麥22脯氨酸含量均呈現(xiàn)上升的趨勢。當BR濃度為0.1 mg·L時脯氨酸含量達到峰值，并且處理組始終高于對照組。其中，東農(nóng)冬麥1號的脯氨酸含量在5、0、-10和 -25 ℃下較對照組分別增加了66.2%、 50.0%、 59.17%、38.05%；濟麥22的脯氨酸含量分別增加25.9%、50.3%、15.9%、36.3%，除濟麥22的5 ℃，兩個品種BR處理組在各溫度下與對照組差異均達到顯著水平(圖7)。

圖7 油菜素內(nèi)酯對冬小麥分蘗節(jié)脯氨酸含量的影響

2.4 越冬期不同低溫下油菜素內(nèi)酯對冬小麥分蘗節(jié)光合色素含量的影響

在對照組和BR處理組中，隨著溫度的降低，東農(nóng)冬麥1號和濟麥22的葉綠素含量均呈現(xiàn)先升后降的趨勢。當BR濃度為0.1 mg·L時葉綠素含量達到最高值，并且處理組始終高于對照組。其中，東農(nóng)冬麥1號的葉綠素含量在5、0、 -10和-25 ℃下較對照組分別提高27.4%、 31.0%、 54.0%、37.2%，濟麥22的葉綠素含量分別提高 40.1%、40.9%、40.5%、49.1%，除東農(nóng)冬麥1號的-25 ℃處，各溫度下兩個品種的BR處理組與對照組差異均顯著(圖8)。

圖8 油菜素內(nèi)酯對冬小麥分蘗節(jié)葉綠素含量的影響

2.5 越冬期不同濃度下油菜素內(nèi)酯對冬小麥越冬率的影響

濟麥22在黑龍江省種植時不能返青。BR處理后，東農(nóng)冬麥1號的返青率高于對照組，當BR濃度為0.1 mg·L返青率達到最高，并且與對照組差異顯著，其余濃度的BR處理與對照組差異不顯著。對照組和BR處理組中東農(nóng)冬麥1號的返青率均在86%以上(表1)。

表1 油菜素內(nèi)酯對東農(nóng)冬麥1號返青率的影響

3 討 論

在自然環(huán)境條件下，溫度是非生物因素中變化最為頻繁的因素。溫度影響植物的生長發(fā)育、器官形成等過程，同時也是最敏感的環(huán)境限制因素。低溫下細胞膜從液晶相轉變成凝膠相，細胞膜出現(xiàn)裂縫和透性增大，可溶性物質(zhì)從細胞內(nèi)滲透出來，使細胞內(nèi)的離子失衡。MDA含量可以反映逆境脅迫對植物的損害程度。本研究表明，隨著溫度的降低，冬小麥的MDA含量升高，說明溫度使膜質(zhì)受到傷害；噴灑BR能夠降低小麥分蘗節(jié)膜質(zhì)損傷程度，兩個冬小麥品種的MDA含量在BR濃度為0.1 mg·L時最小(圖1)，并且對強抗寒品種東農(nóng)冬麥1號的影響大于濟麥22，說明此濃度的BR能有效緩解低溫對東農(nóng)冬麥1號小麥細胞膜的損害，這與張煜星和劉麗杰等在4 ℃低溫脅迫下對油菜素內(nèi)酯效應的研究結果一致。

低溫脅迫會使植物體內(nèi)的活性氧產(chǎn)生和清除失衡，從而使活性氧大量積累，破壞生物大分子，植物可以利用抗氧化防御系統(tǒng)來保護自己免受氧化應激損傷。本研究結果表明，在越冬期不同低溫下，BR處理后，兩個冬小麥品種的SOD、POD和CAT活性較對照組都有所提高，并在BR濃度為0.1 mg·L時抗氧化酶活性達到最強(圖2-4)，且BR使東農(nóng)冬麥1號的抗氧化酶活性增加更多，此結果與前人的研究結果相似。這說明在越冬期低溫下，BR能通過提高抗氧化酶的活性而降低氧自由基含量，清除過多的活性氧，從而減輕膜脂過氧化程度，進而增強小麥幼苗的抗寒性。

植物受到低溫脅迫時會使細胞的滲透壓改變，植物體通過產(chǎn)生有機或無機小分子物質(zhì)作為滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)來緩解由于低溫引起的滲透壓的變化。脯氨酸、可溶性蛋白及可溶性糖是植物體內(nèi)主要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。本研究表明，不同濃度的BR噴灑后，小麥分蘗節(jié)的脯氨酸和可溶性蛋白增加，并在BR濃度為0.1 mg·L時脯氨酸和可溶性蛋白含量最高，此時小麥的滲透調(diào)節(jié)能力最強，這與Kang等對苦瓜滲透調(diào)節(jié)能力的研究結果相似；BR處理后可溶性糖的含量與對照組差異不顯著，與劉麗杰等關于4 ℃低溫脅迫下得出表油菜素內(nèi)酯能提高冬小麥幼苗可溶性糖含量的結果并不一致，可見不同低溫以及低溫處理的持續(xù)時間會影響冬小麥滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)的積累，在越冬期BR主要通過脯氨酸和蛋白質(zhì)的積累來調(diào)節(jié)冬小麥細胞的滲透調(diào)節(jié)能力，從而提高其抗寒性。

光合作用是植物的主要生命活動，低溫會抑制葉綠素的合成，使葉綠素降解加快，因低溫會使光系統(tǒng)Ⅰ和光系統(tǒng)Ⅱ的結構和功能破壞，阻礙電子傳遞鏈(ETC)的傳遞功能，從而使植物發(fā)生光氧化現(xiàn)象。植物可通過將過度吸收的光轉換成熱能來降低電子傳輸?shù)乃俾剩嘤嗟募ぐl(fā)能作為熱量被耗散，它可以激活散熱通道降低光系統(tǒng)Ⅱ中葉綠素激發(fā)態(tài)的濃度，進而使植物適應低溫環(huán)境。本研究結果表明，在低溫脅迫下，BR可使兩個品種冬小麥分蘗節(jié)中的葉綠素含量顯著提高，減少低溫對葉綠素的破壞，從而維持光合作用的進行，在BR濃度為0.1 mg·L時葉綠素的含量達到峰值，這與前人在黃瓜和玉米上的研究結果相似。

總之，油菜素內(nèi)酯能夠有效緩解低溫對冬小麥的脅迫，提高抗氧化酶活性和滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)含量，降低低溫對細胞膜的傷害，提高返青率，最適油菜素內(nèi)酯濃度為0.1 mg·L，對強抗寒品種東農(nóng)冬麥1號的效果好于弱抗寒品種濟麥22。