劉 芳 袁宗勝 柯麗娜 袁 濱 陳國平 謝寶貴*

（1福建農(nóng)林大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，福建福州 350002；2閩江學(xué)院地理與海洋學(xué)院，福建福州 350108；3漳州市農(nóng)業(yè)科學(xué)研究所，福建漳州 363005；4漳州市農(nóng)業(yè)農(nóng)村局經(jīng)濟(jì)作物站，福建漳州 363099）

秀珍菇Pleurotus geesteranus屬真菌門Eumycota，擔(dān)子菌綱Basidiomycete，傘菌目Agarical，側(cè)耳科Pleurotaceae，側(cè)耳屬Pleurotus[1]，因其營養(yǎng)豐富，味道鮮美，深受廣大消費(fèi)者的喜愛。近年來除了傳統(tǒng)季節(jié)性栽培秀珍菇外，工廠化栽培規(guī)模也逐步擴(kuò)大[2]，但隨著栽培面積的擴(kuò)大，生產(chǎn)區(qū)域的病害不斷加重，嚴(yán)重制約秀珍菇產(chǎn)業(yè)的發(fā)展。秀珍菇病害不僅會影響外觀口感，嚴(yán)重時還會導(dǎo)致子實(shí)體徹底死亡[3]。為進(jìn)一步了解秀珍菇病害的發(fā)生情況，筆者于2021 年10—12 月對福建省秀珍菇主要栽培區(qū)（漳州市、福州市等）病害的發(fā)生情況進(jìn)行了調(diào)查，采集病害樣本，并對部分病原菌進(jìn)行分離、純化及分子生物學(xué)鑒定，以期為當(dāng)?shù)匦阏涔讲∠x害防治提供數(shù)據(jù)支撐。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)材料

真菌培養(yǎng)采用PDA 培養(yǎng)基：新鮮馬鈴薯200 g，葡萄糖20 g，瓊脂20 g，水1 000 mL。病原真菌DNA提取試劑、ITS 片段擴(kuò)增所用的引物、Marker、dNTPs、Buffer、溶菌酶，購自生工生物工程（上海）股份有限公司。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 秀珍菇真菌性病害調(diào)查

調(diào)查福建省漳州市、福州市等秀珍菇主要栽培區(qū)秀珍菇病害發(fā)生情況。在病害調(diào)查過程中，咨詢當(dāng)?shù)厥秤镁耘嗉夹g(shù)主管部門，至經(jīng)常有病害發(fā)生的菇棚或車間查看秀珍菇生長情況，發(fā)現(xiàn)病害后，對發(fā)病菌袋進(jìn)行編號，并詳細(xì)記錄采集地點(diǎn)、采集時間、病樣癥狀特點(diǎn)等。

1.2.2 秀珍菇主要病害的分離和病原物鑒定

1.2.2.1 病原物采集

采集點(diǎn)：福建省漳州市、福州市等秀珍菇設(shè)施化栽培主要產(chǎn)區(qū)。采集時期：秀珍菇發(fā)菌期、后熟期和出菇期。采集方法：排查菇棚或栽培車間秀珍菇生長情況，發(fā)現(xiàn)病害后，整袋采集發(fā)病菌袋，并低溫保存運(yùn)輸，保持病原物的原始性。

1.2.2.2 真菌性病原物的分離與ITS序列分析

用接種針直接刮取發(fā)病部位的霉層，并放入PDA 培養(yǎng)基，28 ℃恒溫培養(yǎng)3~7 d 后，用接種針挑取病原菌邊緣菌落至PDA 平板純化培養(yǎng)。觀察病原菌形態(tài)特征及培養(yǎng)基顏色變化，然后將純化的病原菌轉(zhuǎn)接至PDA 斜面培養(yǎng)基備用。采用CTAB法提取病原菌DNA，提取出的DNA 進(jìn)行下一步PCR 擴(kuò)增，PCR擴(kuò)增選用的引物是真菌通用引物ITS1（5’-TCCGTAGGTGAACCTGCGG-3’）和 ITS4（5'-TCCTCCGCTTATTGATATGC-3’）[4]，將 PCR 擴(kuò)增得到的產(chǎn)物經(jīng)過1%（W/V）瓊脂糖凝膠電泳檢測后送至生工生物工程（上海）股份有限公司進(jìn)行專業(yè)測序。將測序結(jié)果在 GenBank（NCBI，http：//www.ncbi.nlm.gov）中進(jìn)行BLAST 同源性分析。用MEGA 5.0 軟件采用最大似然法（maximum likelihood）構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹[5]，Bootstrap檢驗(yàn)的重復(fù)次數(shù)為1 000次。

2 結(jié)果與分析

2.1 福建省秀珍菇病害調(diào)查結(jié)果

在福建省漳州市、福州市等秀珍菇主要栽培區(qū)調(diào)查并采集病害樣本26 份。就病害發(fā)生因素來看：因害蟲傳播等因素引起的病害1 份，主要是菇蠅幼蟲侵染取食；因生產(chǎn)過程控制不當(dāng)，如溫濕度、CO2控制不當(dāng)，光照控制不當(dāng)?shù)纫鸬牟『蚧? 份；因原料帶菌、滅菌不徹底、菇房環(huán)境消毒不徹底、菌袋破損、接種操作不當(dāng)?shù)仍蛞鸬牟『τ?4 份，占總采集樣本的92.31%。

表1 福建省秀珍菇主要病害調(diào)查結(jié)果

2.2 秀珍菇主要真菌性病害鑒定

2.2.1 木霉病及發(fā)生情況

主要為木霉屬的病原菌，感染的主要部位是菌袋，如未滅菌徹底的菌袋，上架發(fā)菌時有輕微破損的菌袋。木霉菌絲開始為淺灰青色，菌絲生長速度快，侵染定殖后能在2~3 d 出現(xiàn)明顯的菌斑，并快速擴(kuò)散，能在7 d 內(nèi)侵染整個菌袋，破壞秀珍菇菌絲（圖1）。病原物經(jīng)鑒定為哈茨木霉Trichoderma harzianum。

圖1 秀珍菇菌袋感染木霉及顯微圖

2.2.2 青霉病及發(fā)生情況

青霉病屬于污染性病害，通常發(fā)生在未滅菌徹底的菌袋上，菌絲生長速度不快，在菌袋上多呈現(xiàn)小塊狀發(fā)病，有時能與秀珍菇菌絲共存。但在時間較長的未接種的菌袋和棄用的菌袋上能見到大量繁殖的青霉（圖2）。病原菌經(jīng)鑒定為指狀青霉菌Penicillium digitatum和圓弧青霉菌Penicillium cyclopium。

圖2 秀珍菇指狀青霉發(fā)病狀態(tài)及顯微圖

2.2.3 鏈孢霉病及發(fā)生情況

鏈孢霉在消殺不徹底的菇房內(nèi)時有發(fā)生，通常是通過棉花塞或破口侵入菌袋。鏈孢霉生長速度極快，通常從入侵至長滿袋時間不超過2 d。被侵染的菌袋內(nèi)出現(xiàn)淡黃色絮團(tuán)狀菌絲，菌絲較密；鏈孢霉長滿菌袋后只要接觸到空氣，立即在棉花塞上或破口處產(chǎn)生塊狀的孢子團(tuán)（圖3）。孢子團(tuán)能迅速擴(kuò)散孢子，對菇房內(nèi)其他菌袋帶來污染隱患，須及時處理。病原菌經(jīng)鑒定為粗糙脈孢菌Neurospora crassa。

圖3 鏈孢霉侵染的秀珍菇菌袋

2.2.4 其他病害及發(fā)生情況

調(diào)查中還發(fā)現(xiàn)生理性病害1種（圖4A）。發(fā)病原因?yàn)榫_袋后該菇房溫度過高，濕度未能及時調(diào)高。有的栽培戶使用加熱油汀對打冷后的菇房快速升溫，容易導(dǎo)致局部溫度過高，菌袋表面失水過快，部分原基失水干死，存活原基集中在部分區(qū)域，但因過密，使得原基發(fā)育不良，過早形成菌蓋長出畸形菇。

圖4 秀珍菇其他病害

其他病害如菌袋滅菌不徹底導(dǎo)致子囊菌污染（圖4B）；菌袋外壁殘余料在裝袋后未清理干凈，栽培后期感染雜菌（圖4C）。

2.3 秀珍菇病害防控策略

目前栽培秀珍菇均采用液體菌種接種，有的小型企業(yè)直接購買大型企業(yè)生產(chǎn)的長滿菌絲的菌袋進(jìn)行出菇。因此，栽培環(huán)境成為秀珍菇是否發(fā)生病害的決定性因素，且直接影響病害的病原菌、發(fā)病過程和發(fā)病程度。不論是設(shè)施化大棚秀珍菇，或是工廠化栽培秀珍菇均應(yīng)充分重視秀珍菇病害的源頭與過程控制。結(jié)合秀珍菇病害發(fā)生情況和調(diào)查過程中所見菇房（棚）管理，衛(wèi)生控制、人員素養(yǎng)等方面，筆者提出秀珍菇栽培者尤其是秀珍菇生產(chǎn)企業(yè)應(yīng)導(dǎo)入危害分析與關(guān)鍵控制點(diǎn)（Hazard Analysis Critical Control Point，HACCP）管理體系[6]，從而達(dá)到預(yù)防或降低病害的發(fā)生，以保證食品安全。具體防控措施：（1）對秀珍菇栽培所用原輔料及整個生產(chǎn)過程進(jìn)行物理、化學(xué)、生物等方面的危害分析，找出關(guān)鍵控制點(diǎn)并進(jìn)行防控；（2）對關(guān)鍵控制點(diǎn)監(jiān)控人員進(jìn)行相關(guān)業(yè)務(wù)培訓(xùn)，熟知超出關(guān)鍵限值時所采取的糾正措施；（3）加強(qiáng)接種操作的規(guī)范化管理；（4）加強(qiáng)菇房（棚）溫濕度及其他各項(xiàng)控制指標(biāo)的管控；（5）嚴(yán)格菇房（棚）、器具的衛(wèi)生及消毒；（6）加強(qiáng)現(xiàn)場及操作人員的個人衛(wèi)生管理；（7）加強(qiáng)菇房（棚）蟲鼠害的防控；（8）加強(qiáng)生產(chǎn)用水的管理[7]。

3 小結(jié)與討論

通過調(diào)查，初步掌握了福建省秀珍菇病害的發(fā)生情況，為秀珍菇病害的有效防控奠定了基礎(chǔ)。導(dǎo)致秀珍菇發(fā)生病害的因素有多種，除生產(chǎn)管理因素、病原物、環(huán)境條件外，菌種退化、菌種老化也是重要因素[8]。低劣的菌種會導(dǎo)致菌絲活力衰弱，接種后易被病原菌侵染而發(fā)生病害。因此，嚴(yán)格遵循菌種生產(chǎn)相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，采用優(yōu)質(zhì)菌種，通常能有效預(yù)防病害發(fā)生。

針對秀珍菇病害的防控，筆者認(rèn)為要充分重視源頭控制與過程控制，貫徹“預(yù)防為主、綜合防治”的理念，切實(shí)做好防控措施[9]。提出導(dǎo)入危害分析與關(guān)鍵控制點(diǎn)（HACCP）管理理念，從而達(dá)到預(yù)防或降低病害的發(fā)生，以保證食用菌產(chǎn)品衛(wèi)生安全[10-11]。