鄒武文

(張掖市甘州區(qū)九龍江林場，甘肅 張掖 734000)

1 引言

金葉復(fù)葉槭為槭樹科槭樹屬落葉高大喬木，是復(fù)葉槭的栽培變種，春季葉片金黃色，漸變?yōu)辄S綠色，樹皮暗灰色，秋后變紫色。金葉復(fù)葉槭具有耐干旱瘠薄、適應(yīng)性強(qiáng)的特點(diǎn)，發(fā)展成為園林綠化普遍應(yīng)用的樹種[1]。

組織培養(yǎng)是植物規(guī)?；a(chǎn)的主要繁殖方式，組織培養(yǎng)是用金葉復(fù)葉槭的莖、葉、芽等器官進(jìn)行立體培養(yǎng)，得到愈傷組織進(jìn)行分化最終得到組培幼苗，這種方法和有性繁殖相比能夠迅速得到無病菌侵染的幼苗，且具有成本低、繁殖系數(shù)高的特點(diǎn)[2]，但是在組織培養(yǎng)中也常遇到苗木生根數(shù)量少，移栽后長勢弱的現(xiàn)象，影響苗木的存活率[3]，因此，在組織培養(yǎng)過程中要采取相應(yīng)的配套措施，以得到長勢健壯的苗木[4]。植物生長調(diào)節(jié)劑對組培苗具有調(diào)控作用[5]，調(diào)節(jié)劑能夠促進(jìn)組培苗誘導(dǎo)分化過程中細(xì)胞的分裂，促進(jìn)不定根的分化[6]。調(diào)控幼苗的生長發(fā)育，有利于縮短快繁周期，但是不同類型調(diào)節(jié)劑間存在明顯差異[7]。研究認(rèn)為，生長素NAA能夠促進(jìn)壯苗，提高組培苗的成活率[8]。2，4-D是植物組織培養(yǎng)中一種有效的生長素類激素，可誘導(dǎo)各種外植體細(xì)胞的脫分化，形成愈傷組織。6-BA能夠莖增粗，抑制莖的伸長[9]。植物生長調(diào)節(jié)劑種類和濃度配比也是影響組培苗生長的關(guān)進(jìn)因素，因此植物生長調(diào)節(jié)劑類型和配比對組織培養(yǎng)有重要的意義。目前關(guān)于植物生長調(diào)節(jié)劑在植物組織培養(yǎng)上的研究較多，但是有關(guān)植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭再生系統(tǒng)建立以及組織培養(yǎng)的研究較少，因此，本試驗(yàn)以復(fù)葉槭的帶芽莖段誘導(dǎo)的不定芽為外植體，比較不同種類植物生長調(diào)節(jié)物質(zhì)對頂芽組培苗分化的影響，篩選最佳培養(yǎng)基配方，為復(fù)葉槭的離體快繁提供參考。

2 材料與方法

2.1 試驗(yàn)材料

試驗(yàn)選取當(dāng)年生生長健壯、未木質(zhì)化或半木質(zhì)化的外植體。組培苗生根材料選用金葉復(fù)葉槭帶芽莖段誘導(dǎo)的不定芽。

2.2 試驗(yàn)方法

取0.3～0.5 cm無菌莖段為外植體，置于誘導(dǎo)愈傷培養(yǎng)基中，培養(yǎng)為MS鹽添加3%的蔗糖和6.5 g/L瓊脂，pH值5.8,添加2 mg/L 6-BA和0.4mg/L 2，4-D。置于玻璃方瓶中培養(yǎng)，培養(yǎng)條件為(24±2)℃，光照度為2000 lx、光照周期為光16 h/暗8 h。培養(yǎng)的無菌苗長到2～3 cm 時(shí)，將其轉(zhuǎn)入生根培養(yǎng)基。

取飽滿、致密的愈傷組織置于生根培養(yǎng)基中進(jìn)行生根培養(yǎng)，生根培養(yǎng)基為：MS培養(yǎng)基中添加6-BA和NAA，調(diào)節(jié)劑濃度和配比見表1，每個(gè)水平設(shè)3次重復(fù)，每個(gè)重復(fù)接入20個(gè)外植體，培養(yǎng)條件同愈傷誘導(dǎo)，每隔10 d觀察一次分化情況，28 d統(tǒng)計(jì)分化率，并進(jìn)行指標(biāo)測定。

2.3 測定項(xiàng)目及方法

2.3.1 生長指標(biāo)的測定

取出組培苗，清洗干凈附著的培養(yǎng)基，用干凈濾紙吸干植株表面水分，統(tǒng)計(jì)生根率、根的長度以及生根狀況。

表1 試驗(yàn)各處理生長調(diào)節(jié)劑類型及濃度

2.3.2 葉綠素含量和根系活力的測定

將試管苗取出，用蒸餾水清洗干凈培養(yǎng)基，將地上部分和地下部分分開，將葉片用剪刀剪成小塊，稱取0.5 g，參考李合生[8]的方法，采用乙醇-丙酮浸提法測定葉綠素含量。將根系取下，采用氯化三苯基四氮唑法測定根系活力。

3 結(jié)果分析

3.1 植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭組培苗生長特性的影響

由表2可知，植物生長調(diào)節(jié)劑顯著影響組培苗的生根特性，其中生根率隨6-BA濃度的增加呈先升高后降低的趨勢，1.5 mg/L的6-BA對生根跟產(chǎn)生抑制作用，隨著NAA含量的增加，生根率呈先升高后降低的趨勢，在濃度為0.3 mg/L時(shí)最高。其中T5處理的生根率最高，為93.21%，T1、T2、T4和T5處理的生根率均顯著高于CK，分別比CK高出17.05%、35.38%、23.51%和36.91%。平均根長隨6-BA濃度的增加呈先升高后降低的趨勢，在1.0 mg/L時(shí)達(dá)到最大值，隨著NAA含量的增加呈先升高后降低的趨勢，在濃度為0.3 mg/L時(shí)最高，各處理除了T3和T7處理外，其他處理均顯著高于CK。根條數(shù)隨6-BA濃度的增加呈先升高后降低的趨勢，在1.0 mg/L時(shí)達(dá)到最大值，隨NAA含量的增加呈逐漸升高的趨勢，在0.5 mg/L時(shí)最高，除了T7和T8處理，其他處理的跟條數(shù)均顯著高于CK。

3.2 植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭組培苗葉綠素的影響

由圖1可知，植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭組培苗葉綠素有顯著的影響。隨6-BA濃度的增加，葉綠素含量呈先升高后降低的趨勢，1.5 mg/L的6-BA對葉綠素含量產(chǎn)生抑制作用，在6-BA濃度為0.5 mg/L和1.0 mg/L時(shí)，隨著NAA含量的增加，葉綠素含量呈先升高后降低的趨勢，在6-BA濃度為1.5 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度增加呈逐漸增加的趨勢，在濃度為0.3 mg/L時(shí)最高。其中T5處理的葉綠素含量最高顯著高于其他處理，T2、T3和T5處理的生根率均顯著高于CK，分別比CK高出47.30%、12.84%和38.51%。

表2 植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭組培苗生長特性的影響

圖1 植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭組培苗葉綠素的影響

3.3 植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭組培苗鮮重的影響

由圖2可知，植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭組培苗鮮重有顯著的影響。隨6-BA濃度的增加，組培苗鮮重呈先升高后降低的趨勢，1.5 mg/L的6-BA對組培苗鮮重的增加產(chǎn)生抑制作用，在6-BA濃度為0.5 mg/L和1.0 mg/L時(shí)，隨著NAA含量的增加，組培苗鮮重呈先升高后降低的趨勢，在6-BA濃度為1.5 mg/L時(shí)，隨著NAA濃度增加呈逐漸增加的趨勢，在濃度為0.3mg/L時(shí)最高。其中T5處理的葉綠素含量最高顯著高于其他處理，T2、T4和T5處理的生根率均顯著高于CK，分別比CK高出47.12%、23.51%和50.79%。

圖2 植物生長調(diào)節(jié)劑對金葉復(fù)葉槭組培苗鮮重的影響

4 討論

不定根的形成是組培苗形成的關(guān)鍵，直接影響幼苗成活率，而生根受到濕度、溫度、激素的多方面的影響[10]，進(jìn)而決定種苗培育的成本，因此，探索外植體的誘導(dǎo)分化，可以優(yōu)化再生途徑[11]，在一定條件下，外植體經(jīng)脫分化后形成的薄壁細(xì)胞團(tuán)，即愈傷組織[12]。愈傷組織通過分化后形成組培幼苗，它的誘導(dǎo)受外植體類型、激素配伍、培養(yǎng)環(huán)境等多因素的影響[13]。激素的種類和濃度是影響其形成的關(guān)鍵因素[14]，研究表明，組織培養(yǎng)愈傷組織形成只有在合適配比的細(xì)胞分裂素和生長素類激素的組合中才可以取得較好的誘導(dǎo)效果[15]。本研究結(jié)果表明，添加6-BA，生根率、根長和生根條數(shù)隨濃度的增加呈先升高后降低的趨勢，添加NAA，隨濃度的增加，呈先升高后降低的趨勢，在6-BA濃度為1.0 mg/L，NAA濃度為0.3 mg/L時(shí)，生根率最高，根長最長，生根條數(shù)最多。因此，較高質(zhì)量濃度的6-BA 和NAA會(huì)對組培苗生根起抑制作用，使生根率降低。本研究結(jié)果表明，在6-BA濃度為1.0 mg/L，NAA濃度為0.3 mg/L時(shí)，組培苗的葉綠素含量最高，鮮重最大。綜合比較，組培苗生根最佳培養(yǎng)基為濃度為1.0 mg/L的6-BA和濃度為0.3 mg/L的NAA時(shí)，生長狀況最好，根系活力較高，葉色濃綠，光合能力強(qiáng)，根系繁密，有須根，根長較長，適合金葉復(fù)葉槭的生根培養(yǎng)。