劉殿雷，龍景培，卜賀啟，林勝璋

冬凌草甲素通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導胰腺癌細胞凋亡的研究

劉殿雷1，龍景培1，卜賀啟2，林勝璋3*

1. 浙江大學醫(yī)學院附屬婦產(chǎn)科醫(yī)院 外科，浙江 杭州 310002 2. 浙江省立同德醫(yī)院肛腸科，浙江 杭州 310011 3. 浙大城市學院臨床醫(yī)學系，浙江 杭州 310012

探討冬凌草甲素通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導胰腺癌細胞凋亡的機制。選取胰腺癌SW1990和Panc-1細胞株作為研究對象。采用細胞計數(shù)試劑-8（cell counting kit-8，CCK-8）和流式細胞術(shù)分別檢測細胞增殖和凋亡情況，蛋白印跡法檢測內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)因子葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78 kD，GRP78）、環(huán)磷酸腺苷反應元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子同源蛋白（C/EBP-homologous protein，CHOP）、裂解的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白水解酶-12（cleaved cystein aspartate specific proteinase-12，cleaved Caspase-12）、活化的（active）Caspase-3、cleaved Caspase-3、cleaved多腺苷二磷酸多聚酶[poly (ADP-ribose) polymerase，PARP] 的蛋白表達水平，實時熒光定量RCR檢測、、的mRNA表達水平。冬凌草甲素濃度和時間相關(guān)性抑制SW1990和Panc-1細胞增殖，冬凌草甲素可誘導SW1990和Panc-1細胞凋亡，可增加SW1990細胞中cleaved Caspase-3和cleaved PARP的蛋白表達水平（＜0.05）；進一步研究發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素能上調(diào)、、mRNA及GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12的蛋白表達水平，與對照組相比差異均有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。且在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑4-PBA的作用下，冬凌草甲素處理后細胞凋亡率和GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、active Caspase-3蛋白表達水平均被逆轉(zhuǎn)，差異有統(tǒng)計學意義（＜0.05）。冬凌草素對SW1990和Panc-1細胞的促凋亡作用依賴于內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激的激活，冬凌草甲素可通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導胰腺癌細胞凋亡，為冬凌草甲素治療胰腺癌中的抗腫瘤活性研究提供了新的思路。

冬凌草甲素；胰腺癌；內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激；凋亡；葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78；環(huán)磷酸腺苷反應元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子同源蛋白；天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白水解酶-12

胰腺癌被認為是消化道最常見惡性腫瘤之一，預后非常差，根據(jù)美國癌癥協(xié)會的最新估計死亡數(shù)據(jù)，胰腺癌排在肺癌和結(jié)腸直腸癌之后，位列第3[1]。胰腺癌被確診時通常已是晚期，患者錯過了接受手術(shù)的機會。目前，化療仍是治療晚期胰腺癌的主要方法之一，而化療藥物長期使用通常又會產(chǎn)生耐藥性和副作用。盡管進行了大量的實驗，但胰腺癌的治療進展甚微。5年生存率仍然低于10%[2]。這些問題凸顯了開發(fā)新型抗癌藥物的迫切要求。

冬凌草甲素是從冬凌草中分離得到的一種具有生物活性的二萜類化合物。已被證實具有抗癌等多種藥理作用[3]。在國內(nèi)冬凌草甲素因其低毒性已被用于多種癌癥的治療。且越來越多的證據(jù)表明冬凌草甲素對胰腺癌、肺癌、結(jié)直腸癌等不同類型的腫瘤細胞具有顯著的抑制活性[4]。在胰腺癌細胞中，研究發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素主要通過誘導細胞凋亡和抑制細胞轉(zhuǎn)移來實現(xiàn)抗癌活性[5-7]。目前有報道稱內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激與細胞凋亡密切相關(guān)，一些抗腫瘤藥物利用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導胰腺癌細胞凋亡[8]，這可能為胰腺癌的治療干預提供新的思路。

本研究探討冬凌草甲素通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激途徑抗胰腺癌的作用機制，為冬凌草甲素開發(fā)為有前景的抗癌藥物提供理論基礎和實驗依據(jù)。

1 材料與儀器

1.1 細胞

胰腺癌SW1990和Panc-1細胞株購自上海ATCC細胞庫。

1.2 藥品和試劑

冬凌草甲素（質(zhì)量分數(shù)99%，批號2020052103）購自上海酶聯(lián)生物科技公司，溶解于0.5%二甲亞砜（dimethyl sulfoxide，DMSO）中，濃度為10 mmol/L，根據(jù)實驗的需要，原液用工作濃度的培養(yǎng)基進行稀釋。含有青霉素/鏈霉素的RPMI-1640培養(yǎng)基（批號8121112）、10%胎牛血清（fetal bovine serum，F(xiàn)BS，批號2158138P）、0.25%胰蛋白酶（批號1234567）和DMSO（批號3131642）均購自Gibco公司；CCK-8試劑盒（批號KN658）購自日本同化公司；Annexin V-FITC/PI凋亡檢測試劑盒（批號20200502）、BCA蛋白檢測試劑盒（批號20200712）均購自北京索萊寶有限公司。小鼠抗磷酸甘油醛脫氫酶（reduced glyceraldehyde-phosphate dehydrogenase，GAPDH，批號210120）、葡萄糖調(diào)節(jié)蛋白78（glucose regulated protein 78 kD，GRP78，批號200912）、環(huán)磷酸腺苷反應元件結(jié)合轉(zhuǎn)錄因子同源蛋白（C/EBP-homologous protein，CHOP，批號200910）、裂解的多腺苷二磷酸多聚酶[cleaved poly (ADP-ribose) polymerase，cleaved PARP，批號200324]、裂解的天冬氨酸特異性半胱氨酸蛋白水解酶-12（cleaved cystein aspartate specific proteinase-12，cleaved Caspase-12，批號201116）和活化的（active）Caspase-3（批號210319）均購買自美國Sigma公司；4-苯基丁酸（4-phenylbutyric acid，4-PBA，批號 B71530）購自上海源葉科技有限公司；辣根過氧化物酶偶連二抗（horseradish peroxidase，HRP，批號176808）購自北京中西華大科技有限公司。

1.3 儀器

SCO10-2型C02細胞培養(yǎng)箱（美國SHELLAB公司）；ST16R型離心機、ABI quantstudio5型實時熒光定量PCR儀（美國Thermo Scientific公司）；FACSAria II型流式細胞儀（美國BD Biosciences公司）；SpectraMax i3x型多功能酶標儀（美國Molecular Devices公司）；PowerPac HC電泳儀（美國BIO-RAD公司）。

2 方法

2.1 細胞培養(yǎng)

細胞復蘇后培養(yǎng)于含有10%胎牛血清的RPMI-1640培養(yǎng)液中，并置于37 ℃、5% CO2和95% O2的濕化環(huán)境中無菌培養(yǎng)。培養(yǎng)3 d后胰蛋白酶進行消化傳代，待細胞鋪滿細胞瓶底部時進行實驗。

2.2 CCK-8法檢測細胞活力

取對數(shù)生長期的SW1990和Panc-1細胞接種至96孔培養(yǎng)板（5×103/孔）進行培養(yǎng)，待細胞貼壁后，更換含有不同終濃度（5、10、20、40、80 μmol/L）冬凌草甲素的新鮮培養(yǎng)液分別培養(yǎng)24、48、72 h。每個濃度組設6個復孔，同時設空白組（加入等量的培養(yǎng)液）和對照組（加入等量含0.1% DMSO的培養(yǎng)液）。給藥結(jié)束前1 h加入10 μL CCK-8工作液，37 ℃孵育1 h。采用自動酶標儀測定450 nm波長處各孔的吸光度（）。計算細胞增殖抑制率。

細胞增殖抑制率＝1－(實驗－空白)/(對照－空白)

2.3 Annexin V-FITC/PI檢測細胞凋亡

將配制好的SW1990和Panc-1細胞懸液接種到6孔培養(yǎng)板中（5×105/孔）過夜培養(yǎng)，然后加入不同濃度（10、20、40 μmol/L）冬凌草甲素處理細胞后培養(yǎng)48 h，同時設對照組（加入等量含0.1% DMSO的培養(yǎng)液）；收集細胞，1500×離心5 min，棄上清，PBS重懸細胞。取5×105個細胞懸液，1500×離心5 min，棄上清，加入500 μL結(jié)合緩沖液懸浮細胞。然后加入5 μL Annexin V-FITC和10 μL PI，輕輕混勻，在常溫避光下培養(yǎng)30 min。采用流式細胞儀進行分析。

2.4 實時熒光定量PCR（real-time quantitative PCR，RT-qPCR）檢測細胞GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA表達

不同濃度（10、20、40 μmol/L）冬凌草甲素處理SW1990和Panc-1細胞48 h后，同時設對照組（加入等量含0.1% DMSO的培養(yǎng)液）；收集細胞，每組加入1 mL TRIzol試劑，然后再加入200 μL氯仿，室溫孵育15 min。4 ℃、12 000×離心10 min。取上清至另一無RNA管中，加入等量的異丙醇。將樣品輕輕倒置后，在?20 ℃冷凍30 min，12 000×離心10 min。隨后，用75%乙醇預冷洗滌2次，加入適量的焦碳酸二乙酯（diethyl pyrocarbonate，DEPC）無菌無酶水，將總RNA溶解至500 ng/μL，進行反轉(zhuǎn)錄RT-qPCR。采用2???Ct法計算基因表達情況。引物序列見表1。

表1 引物序列和產(chǎn)物長度

2.5 蛋白印跡法檢測細胞GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12、cleaved Caspase-3、cleaved PARP蛋白表達

將SW1990和Panc-1細胞接種于6孔培養(yǎng)板，分別用實驗所需不同濃度（10、20、40 μmol/L）的冬凌草甲素處理，同時設對照組（加入等量含0.1% DMSO的培養(yǎng)液）；然后置于無菌培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。收集處理后的細胞，然后用冰PBS洗滌細胞2次，并在冰RIPA緩沖液中輕輕裂解、勻漿30 min。然后4 ℃、12 000×離心15 min。采用BCA法檢測上清液中蛋白的濃度。處理后的樣品用12% SDS-PAGE分離。不同目的片段通過電泳轉(zhuǎn)移至PVDF膜上，室溫下5%脫脂牛奶阻斷TBST中的非特異性結(jié)合位點2 h，膜洗滌后與適當濃度的一抗4 ℃下在封閉緩沖液中孵育過夜。TBST洗滌3次（每次5 min），室溫下用辣根過氧化物酶偶聯(lián)二抗孵育1 h。再用TBST沖洗膜后，采用ECL化學發(fā)光檢測系統(tǒng)檢測膜上的條帶，Image J軟件進行密度測定。

2.6 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)抑制劑4-PBA對冬凌草甲素誘導SW1990細胞凋亡和調(diào)控active Caspase-3、GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12蛋白表達的影響

將SW1990細胞接種于6孔培養(yǎng)板，分別用35 μmol/L的冬凌草甲素、35 μmol/L的冬凌草甲素＋1 mmol/L 4-PBA、1 mmol/L 4-PBA處理細胞，對照組加入等量0.1% DMSO的培養(yǎng)液處理，置于恒溫無菌培養(yǎng)箱培養(yǎng)48 h，按照“2.3”項方法檢測細胞凋亡情況，按“2.5”項方法檢測蛋白表達量。

2.7 數(shù)據(jù)統(tǒng)計分析

3 結(jié)果

3.1 冬凌草甲素對SW1990和Panc-1細胞活力的影響

不同濃度的冬凌草甲素分別處理細胞24、48、72 h，CCK-8法評估細胞活力情況。如圖1所示，結(jié)果表明冬凌草甲素能顯著降低SW1990和Panc-1細胞活力，且呈時間和劑量相關(guān)性。另外，SW1990細胞對冬凌草甲素較為敏感。

3.2 冬凌草甲素對SW1990和Panc-1細胞凋亡的影響

為了確定冬凌草甲素是否具有促胰腺癌細胞凋亡的作用，Annexin-V和PI雙染色后用流式細胞儀檢測。如圖2-A、B所示，與對照組相比，不同濃度冬凌草甲素（10、20、40 μmol/L）處理后的SW1990和Panc-1細胞凋亡率顯著增加（＜0.05），且呈濃度相關(guān)性，其中SW1990細胞的凋亡較為顯著。為進一步探討冬凌草素誘導細胞凋亡的機制，采用蛋白印跡檢測了SW1990細胞中cleaved Caspase-3和cleaved PARP的表達。結(jié)果（圖3）表明，冬凌草甲素可增加SW1990細胞中Caspase-3和PARP的分裂亞基水平（＜0.05），且呈劑量相關(guān)性。

圖1 冬凌草甲素對SW1990和Panc-1細胞增殖的影響()

與對照組比較：*P＜0.05

3.3 冬凌草甲素對SW1990和Panc-1細胞GRP78、CHOP、Caspase-12 mRNA表達的影響

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是化療藥物誘導癌細胞凋亡的常見途徑，能激活細胞凋亡通路，導致細胞凋亡[9]。為了明確冬凌草甲素是否激活了胰腺癌細胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，本研究首先分析了在冬凌草甲素作用下細胞中內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激關(guān)鍵標志物、和基因表達情況。結(jié)果（圖4）顯示，冬凌草甲素能增加SW1990和Panc-1細胞、和mRNA表達水平（＜0.05），且隨著冬凌草甲素濃度的增加，效果越顯著。

3.4 冬凌草甲素對SW1990和Panc-1細胞GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12蛋白表達的影響

研究表明GRP78、CHOP、Caspase-12等在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激發(fā)生過程中起著關(guān)鍵的調(diào)控作用[10]。為了確認冬凌草甲素能激活胰腺癌細胞中的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激，本研究又分析了在冬凌草甲素作用下細胞中GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12蛋白的表達情況。蛋白印跡結(jié)果（圖5）顯示，與對照組相比，冬凌草甲素不同濃度組GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12蛋白的表達量明顯升高（＜0.05），且呈劑量相關(guān)性。

與對照組比較：*P＜0.05

與對照組比較：*P＜0.05

與對照組比較：*P＜0.05

3.5 內(nèi)質(zhì)網(wǎng)抑制劑4-PBA對冬凌草甲素處理的SW1990細胞凋亡率和active Caspase-3、GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12蛋白表達的影響

為了進一步明確冬凌草甲素誘導的細胞凋亡是否通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)的凋亡通路。本研究采用內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激抑制劑4-PBA進行實驗。流式細胞分析（圖6-A、B）及蛋白印跡分析（圖6-C）結(jié)果顯示，與冬凌草甲素單獨處理相比，冬凌草甲素＋4-PBA組SW1990細胞的凋亡率顯著減少（＜0.05），active Caspase-3、GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12蛋白表達量也相應降低（＜0.05）。

4 討論

與傳統(tǒng)的化療藥物相比，天然產(chǎn)物可以發(fā)揮強大的抗腫瘤作用而不會產(chǎn)生許多不良反應。因此，一些天然來源的活性化合物的抗腫瘤活性得到了研究，而冬凌草甲素作為冬凌草的主要成分，是一種具有生物活性的天然萜類化合物，在中藥中起到了廣泛的作用。冬凌草甲素以多靶點的抗腫瘤活性而聞名，抗腫瘤作用機制主要包括阻滯細胞周期、誘導細胞凋亡和自噬、抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移、抑制血管生成等[11]。研究已證實其對20多種人類腫瘤細胞株的增殖具有顯著的抑制作用，如常見肺癌、食管癌、胰腺癌、肝癌、乳腺癌、卵巢癌、骨髓瘤、大腸癌、前列腺癌等，這與其特定的分子結(jié)構(gòu)有關(guān)[12]。其D環(huán)上的α-亞甲基環(huán)戊酮（烯酮）是抗腫瘤活性的基本結(jié)構(gòu)，可被環(huán)分裂或亞甲基飽和破壞；6-羥基和15-羰基之間的氫鍵增加了C的親電性，進一步提高了腫瘤細胞對親電酶的親和力；14-羥基的酯化可增強抗癌活性。盡管冬凌草甲素的藥理作用廣泛，但由于其疏水性，其應用受到限制[12]。

研究已證實冬凌草甲素可通過不同的信號通路誘導胰腺癌細胞的凋亡，然而，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激是否參與了冬凌草甲素誘導胰腺癌細胞的凋亡尚不清楚。本研究旨在探索冬凌草甲素對胰腺癌SW1990和Panc-1細胞的抑制作用，并探討內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激與細胞凋亡的關(guān)系。結(jié)果顯示，冬凌草甲素可誘導胰腺癌SW1990和Panc-1細胞凋亡，抑制細胞增殖。進一步研究發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素可通過增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激相關(guān)蛋白GRP78、CHOP和cleaved Caspase-12的表達激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激。

與冬凌草甲素組比較：*P＜0.05

內(nèi)質(zhì)網(wǎng)是調(diào)節(jié)應激反應最重要的細胞器之一，是細胞中參與蛋白質(zhì)合成、折疊、轉(zhuǎn)運和胞內(nèi)鈣儲存的主要位點[13]。生理和病理刺激可引起鈣穩(wěn)態(tài)擾動，改變蛋白質(zhì)折疊，增加內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中錯誤折疊蛋白質(zhì)的數(shù)量，導致內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激[14]。當內(nèi)質(zhì)網(wǎng)被觸發(fā)，應激信號通過內(nèi)質(zhì)網(wǎng)膜傳遞到細胞核，進而產(chǎn)生一系列維持細胞動態(tài)平衡的信號通路分子，稱為未折疊蛋白反應（unfolded protein response，UPR），其對細胞具有雙重作用，促進體內(nèi)平衡或刺激細胞凋亡[15]。內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激途徑被認為是不同于線粒體途徑和受體途徑的一種新的凋亡途徑，可被3個信號通路激活，即蛋白激酶R樣內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激酶（proteinkinase R like ER kinase，PERK）通路、內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激蛋白（inositol-requiring enzyme 1，IRE1）通路和活化轉(zhuǎn)錄因子6（activating transcription factor 6，ATF6）通路[16]。在正常狀態(tài)下，它們與GRP78相互作用形成復合物在生理條件下處于不活躍狀態(tài)，當內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激發(fā)生時，GRP78與PERK、IRE1和ATF6分離，PERK和IRE1通過自身磷酸化被激活，UPR被啟動并調(diào)控下游轉(zhuǎn)錄因子，從而激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導的細胞凋亡[17-18]。CHOP被認為是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激下游最重要的促凋亡轉(zhuǎn)錄因子，可被內(nèi)質(zhì)網(wǎng)中的3個傳感器激活，其在正常細胞中主要在轉(zhuǎn)錄水平上調(diào)控，當內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導細胞凋亡時，CHOP表達及其在細胞核內(nèi)的積累增加，然后通過控制其下游蛋白的表達來調(diào)節(jié)細胞的死亡[19-21]。Caspase-12是一種內(nèi)質(zhì)網(wǎng)原位半胱天冬酶，也是內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導凋亡的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激過程中特異性地被剪切和激活，而不是通過線粒體介導的凋亡信號；當過量的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激被觸發(fā)時，Caspase-12從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)激活到細胞質(zhì)，然后激活Caspase-3，最終觸發(fā)內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激介導的細胞凋亡[22]。因此，GRP78、CHOP和Caspase-12通常被用作響應內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激水平的生物標志物。研究已證實內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激在胰腺癌細胞的促凋亡中起了重要作用[8]。本研究與之前的報道一致，冬凌草甲素顯著增加了GRP78、CHOP和cleaved Caspase-12表達水平。而內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激特異性抑制劑4-PBA預處理后，細胞凋亡率及相關(guān)蛋白GRP78、CHOP、cleaved Caspase-12的表達水平均相應降低。提示冬凌草甲素可誘導胰腺癌細胞的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激發(fā)生，進而激發(fā)細胞凋亡，抑制細胞的生長。

綜上所述，本研究發(fā)現(xiàn)冬凌草甲素可通過激活內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激誘導胰腺癌細胞凋亡。研究結(jié)果為胰腺癌的預防提供了新的治療方法，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應激可能成為預防和治療癌癥的潛在治療靶點。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Study on apoptosis of pancreatic cancer cells induced by oridonin through endoplasmic reticulum stress

LIU Dian-lei1, LONG Jing-pei1, BU He-qi2, LIN Sheng-zhang3

1. Department of Surgery, Women’s Hospital School of Medicine Zhejiang Univercity, Hangzhou 310002, China 2. Department of Coloproctology Surgery, Tongde Hospital of Zhejiang Province, Hangzhou 310011, China 3. Department of Clinical Medicine, Zhejiang University City College, Hangzhou 310012, China

To investigate the mechanism of oridonin inducing apoptosis of pancreatic cancer cells through endoplasmic reticulum stress.Pancreatic cancer SW1990 and Panc-1 cell line were selected as the research object. Cell proliferation and apoptosis were detected by cell counting kit-8 (CCK-8) and flow cytometry respectively. The protein expression levels of endoplasmic reticulum stress-related factors glucose regulated protein 78 kD (GRP78), C/EBP-homologous protein (CHOP), cleaved cystein aspartate specific proteinase-12 (Caspase-12), active Caspase-3, cleaved Caspase-3, and cleaved poly (ADP-ribose) polymerase (PARP) were analyzed by Western blotting. The mRNA expression levels of,andwere detected by RT-qPCR.The proliferation of SW1990 and PANG-1 cells was inhibited by oridonin concentration and time correlation. The apoptosis of SW1990 and Panc-1 cells was induced and protein expression levels of cleaved caspase-3 and cleaved PARP in SW1990 cells increased by oridonin (< 0.05). Further studies showed that oridonin up-regulated mRNA expression levels of,and, as well as protein expression levels of GRP78, CHOP and cleaved Caspase-12, compared with the control group, the difference was statistically significant (< 0.05). And under the action of endoplasmic reticulum stress inhibitor 4-PBA, apoptosis rate and protein expression levels of GRP78, CHOP, cleaved Caspase-12 and active Caspase-3 were all reversed after treatment with oridonin, the difference was statistically significant (< 0.05).The pro-apoptotic effects of oridonin on SW1990 and Panc-1 cells are dependent on the activation of endoplasmic reticulum stress. Oridonin can mediate the apoptosis of pancreatic cancer cells by activating endoplasmic reticulum stress, which provides a new idea for the anti-tumor activity of oridonin in pancreatic cancer.

oridonin; pancreatic cancer; endoplasmic reticulum stress; apoptosis; glucose regulated protein 78 kD (GRP78); C/EBP-homologous protein (CHOP); cystein aspartate specific proteinase-12 (Caspase-12)

R285

A

0253 - 2670(2022)15 - 4773 - 08

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.15.021

2022-02-09

浙江省基礎公益研究計劃項目（LGD19H160006）；浙江省醫(yī)藥衛(wèi)生科技計劃項目（2018KY614）

劉殿雷，男，碩士研究生，主治醫(yī)師，研究方向為中藥單體抗腫瘤的分子機制。E-mail: ldl0304@163.com

通信作者：林勝璋，男，博士研究生，主任醫(yī)師，研究方向為中藥單體抗腫瘤的分子機制。E-mail: wzf2lsz@163.com

[責任編輯 潘明佳]