亚洲免费av电影一区二区三区,日韩爱爱视频,51精品视频一区二区三区,91视频爱爱,日韩欧美在线播放视频,中文字幕少妇AV,亚洲电影中文字幕,久久久久亚洲av成人网址,久久综合视频网站,国产在线不卡免费播放

        ?

        奶牛源G10P[11]型A群輪狀病毒的分離鑒定

        2022-07-30 02:22:00嫻,湯承,岳
        四川畜牧獸醫(yī) 2022年6期
        關(guān)鍵詞:輪狀病毒毒株犢牛

        卜 嫻,湯 承,岳 華

        (西南民族大學(xué)畜牧獸醫(yī)學(xué)院,四川 成都 610041)

        牛A群輪狀病毒(Bovine Rotavirus A,BRVA)在犢牛腹瀉中占有重要地位,是引起犢牛腹瀉的主要病原之一,2 月齡以內(nèi)犢牛最易感,呈世界性流行[1-2]。BRVA 是一種分節(jié)段的雙鏈RNA 病毒,為呼腸弧病毒科輪狀病毒屬成員,病毒子直徑為60~80 nm[3]。BRVA 基因組大小約為18 kb,含有11 個(gè)基因節(jié)段,編碼6 個(gè)結(jié)構(gòu)蛋白(VP1~VP4、VP6、VP7)和6 個(gè)非結(jié)構(gòu)蛋白(NSP1~NSP6)[4]。輪狀病毒有多種基因型,通常用GxP[x]表示,其中G 型和P型分別是由VP7和VP4基因序列決定的[5]。研究顯示,BRVA至少有14種G型和14種P型,我國(guó)發(fā)現(xiàn)的BRVA 基因型有G6、G8、G10 和P[1]、P[5]、P[11],G 型和P 型可組合成不同的基因型,這讓BRVA 基因型變得更為復(fù)雜。不同基因型毒株之間的交叉免疫保護(hù)效果差。因此,了解我國(guó)牛群中BRVA 的流行情況及基因型,對(duì)BRVA感染的防治至關(guān)重要。

        1 材料與方法

        1.1 臨床樣本及材料 7份BRVA陽性犢牛腹瀉糞便樣本來自四川某奶牛場(chǎng),MA-104 傳代細(xì)胞系、兔抗BRVA 陽性血清由西南民族大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)室提供;TrizolTMReagent 購(gòu)于TaKaRa 公司;反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)于成都市蓉為基因生物科技有限公司。

        1.2 病毒的分離 按照文獻(xiàn)[6]報(bào)道的方法,將BRVA 陽性糞便樣本接種到MA-104進(jìn)行病毒的分離培養(yǎng),觀察細(xì)胞病變。

        1.3 病毒的鑒定

        1.3.1 RT-PCR 鑒定 采用周芳等[7]建立的方法對(duì)分離株進(jìn)行BRVA特異性RT-PCR檢測(cè)。采用文獻(xiàn)[8-9]報(bào)道的分型引物分別去擴(kuò)增分離株的VP7、VP4基因片段,PCR產(chǎn)物送北京擎科生物科技有限公司測(cè)序,并用輪狀病毒分型軟件ViPR鑒定分離株的G、P基因型。

        1.3.2 間接免疫熒光鑒定 以兔抗BRVA陽性血清為一抗,按照文獻(xiàn)[6]報(bào)道的方法對(duì)分離株進(jìn)行間接免疫熒光鑒定。

        1.3.3 電鏡觀察 將分離株的培養(yǎng)物在4 ℃條件下以1 000 r∕min 離心10 min,收集上清液,送至成都里來醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)中心進(jìn)行透射電鏡觀察。

        2 結(jié)果

        2.1 病毒培養(yǎng)情況 7 份陽性樣本盲傳至第3代,其中有1份出現(xiàn)細(xì)胞病變,至第6代細(xì)胞病變趨于穩(wěn)定,接種后24 h 開始出現(xiàn)細(xì)胞病變,可見細(xì)胞聚集、脫落、拉網(wǎng)等現(xiàn)象(圖1)。

        圖1 分離株引起的細(xì)胞病變圖(10×40)

        2.2 病毒的鑒定

        2.2.1 RT-PCR 鑒定 對(duì)分離株的1~6 代培養(yǎng)物進(jìn)行BRVA 特異性RT-PCR 檢測(cè),從中擴(kuò)增出約231 bp 的條帶(圖2),測(cè)序結(jié)果經(jīng)BLAST 比對(duì)后證實(shí)為BRVA 的特異片段,說明分離株為BRVA。

        圖2 分離株RT-PCR檢測(cè)結(jié)果

        2.2.2 分離株的基因型 分離株經(jīng)分型鑒定,確定為G10P[11]型。

        2.2.3 間接免疫熒光鑒定結(jié)果 間接免疫熒光鑒定結(jié)果顯示,感染細(xì)胞胞漿中可見明亮的綠色熒光(圖3),說明該分離株可與BRVA 抗體發(fā)生特異性反應(yīng),證明分離株為BRVA。

        圖3 分離株間接免疫熒光鑒定(10×40)

        2.2.4 分離株的形態(tài) 電鏡觀察可見直徑為60~80 nm的圓形病毒顆粒,呈典型的“車輪狀”,符合輪狀病毒的形態(tài)特征(圖4)。

        圖4 分離株病毒子的形態(tài)(透射電鏡,150 000×)

        綜上可見,本研究成功分離出1 株致細(xì)胞病變穩(wěn)定的奶牛源G10P[11]型BRVA。

        3 討論

        本研究分離到1株致細(xì)胞病變穩(wěn)定的奶牛源G10P[11]型BRVA毒株,為其遺傳進(jìn)化和免疫防治等方面的研究提供了材料。我國(guó)牛群中存在G6P[1]、G6P[5]、G6P[5]P[11]、G8P[1]、G10G6P[5]、G10P[11]型等多種基因型BRVA毒株感染,優(yōu)勢(shì)基因型為G6P[1]和G6P[5][10-12]。目前,BRVA 的防控措施主要為疫苗免疫[13-14],而分離得到BRVA毒株對(duì)疫苗的研發(fā)至關(guān)重要。盡管我國(guó)已有關(guān)于G6P[1]、G6P[5]、G6P[11]、G8P[1]和G10P[11]型BRVA 毒株的分離報(bào)道[6,15-20],但是G10P[11]型BRVA作為國(guó)內(nèi)的一個(gè)流行毒株,對(duì)其的分離鑒定報(bào)道并不多。常繼濤等人從11份BRVA陽性犢牛腹瀉樣本中分離出1株致細(xì)胞病變穩(wěn)定的奶牛源G10P[11]型BRVA毒株[18];謝金鑫從10份BRVA陽性犢牛腹瀉樣本中分離出1株致細(xì)胞病變穩(wěn)定的奶牛源G10P[11]型BRVA毒株,并對(duì)其基因組特征進(jìn)行了研究[19]。有關(guān)G10P[11]型BRVA毒株的基本生物學(xué)特性、致病性及與其他基因型毒株的交叉保護(hù)等方面的研究尚未見報(bào)道?!?/p>

        猜你喜歡
        輪狀病毒毒株犢牛
        法國(guó)發(fā)現(xiàn)新冠新變異毒株IHU
        防不勝防的秋季輪狀病毒腹瀉
        揭開“諾如病毒”和“輪狀病毒”的面紗
        一列犢牛消化不良性腹瀉的診治
        犢牛腹瀉的發(fā)生和防治
        犢牛輪狀病毒腹瀉的防治
        廣西鴨圓環(huán)病毒流行毒株遺傳變異分析
        犢牛水中毒的發(fā)生及預(yù)防
        牛傳染性鼻氣管炎IBRV/JZ06-3基礎(chǔ)毒株毒力返強(qiáng)試驗(yàn)
        豬瘟強(qiáng)毒株與兔化弱毒疫苗株的LAMP鑒別檢測(cè)
        国产精品一区二区三区女同| 午夜家庭影院| 天堂一区人妻无码| 在线精品日韩一区二区三区| 亚洲精品色播一区二区| 可以免费看亚洲av的网站| 蜜桃久久精品成人无码av| 香蕉视频一级片| 亚洲公开免费在线视频| 国产一区二区三区av免费观看| 日本一区二区三区四区在线视频| 东京热人妻系列无码专区| 国产精品美女久久久久久久久| 亚洲Va中文字幕无码毛片下载| 激情五月婷婷六月俺也去| 97超碰国产成人在线| 国产精品自在拍在线拍| 中文字幕在线码一区| 538亚洲欧美国产日韩在线精品 | 免费网站国产| 亚洲国产成人精品一区刚刚| 在线视频观看国产色网| 中文字幕在线播放| 中文字幕一区二区三区人妻精品 | 亚洲专区路线一路线二天美 | 毛片内射久久久一区| 波多野结衣免费一区视频| 亚洲无码毛片免费视频在线观看 | 香蕉国产人午夜视频在线观看| 国产成人精品一区二三区在线观看| 久久中文骚妇内射| 国产成人aaaaa级毛片| 欧洲熟妇乱xxxxx大屁股7| 亚洲精品中文字幕乱码二区| 日韩人妻系列在线观看| 久激情内射婷内射蜜桃| 无码精品色午夜| 人妻av在线一区二区三区| 久久国产黄色片太色帅| 手机看片福利一区二区三区| av少妇偷窃癖在线观看|