計(jì)慧姝，朱 慶，四郎巴姆，張俊杰，陳和強(qiáng)，楊懷珍，澤仁擁忠

（1.四川省甘孜藏族自治州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心，四川 康定 626000；2.四川省得榮縣太陽谷鎮(zhèn)綜合服務(wù)站，四川 得榮 627950）

本研究對2017 年以來甘孜州開展牦牛包蟲病防治的效果進(jìn)行再次評估與分析，為今后制定防控措施提供參考。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 選擇四川甘孜州三個(gè)縣共1 244頭健康成年牦牛作為疫苗免疫及血清采集的對象。其中，德格縣509 頭，色達(dá)縣532 頭，道孚縣203頭。

1.2 試劑及疫苗 牛棘球蚴（Eg95）ELISA 抗體檢測試劑盒（批號：20210804），由重慶澳龍生物制品有限公司提供；羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗Eg95（批號：2021002-2），由甘孜州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心提供。

1.3 疫苗免疫注射 用羊棘球蚴（包蟲）病基因亞工程亞單位疫苗免疫牦牛時(shí)，按照每只羊劑量的5倍量進(jìn)行注射。免疫程序?yàn)榈谝会樢呙缱⑸浜?8 d再次注射同等劑量，加強(qiáng)免疫。頸部皮下注射5頭份，其中含Eg95蛋白250 μg。

1.4 免疫抗體檢測 所有牦牛在首免后間隔28 d 二免，二免后15 d 統(tǒng)一采血并在現(xiàn)場用離心機(jī)及時(shí)分離血清，使用冷藏箱存儲，并運(yùn)送至縣上，冰箱冷凍存儲，次日由專人專車運(yùn)送至甘孜州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心。應(yīng)用牛包蟲病ELISA抗體檢測試劑盒按說明書檢測Eg95 特異性免疫抗體，統(tǒng)計(jì)全部樣品免疫抗體總數(shù)及陽性數(shù)，計(jì)算群體抗體陽性率。

1.5 免疫安全性觀察 仔細(xì)觀察并記錄試驗(yàn)牦牛在免疫后有無免疫應(yīng)激情況。

2 結(jié)果

2.1 三個(gè)縣牦牛免疫抗體的比較 由甘孜州動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室人員和重慶澳龍生物制品有限公司實(shí)驗(yàn)室人員同時(shí)對試驗(yàn)牦牛血清進(jìn)行檢測。兩組實(shí)驗(yàn)室人員均按照規(guī)范操作，試驗(yàn)結(jié)果均成立、無誤，檢測結(jié)果見表1，兩者無顯著差異（P＞0.05）。從表1可見，德格縣的陽性率均高于其他兩個(gè)縣。

表1 三個(gè)縣的檢測結(jié)果比較

2.2 與2017 年甘孜州同種疫苗免疫效果的比較 就28 d陽性率而言，2021年高于2017年。

表2 2017年與2021年包蟲病疫苗免疫效果比較

2.3 免疫應(yīng)激情況 接種疫苗后，只有極少數(shù)牦牛出現(xiàn)精神沉郁，數(shù)日后即消失；注射部位出現(xiàn)局部腫脹，面積局限，數(shù)日后即消失。

3 討論

免疫操作過程中，實(shí)驗(yàn)人員、設(shè)備、環(huán)境等因素對試驗(yàn)結(jié)果的影響非常小，只要是經(jīng)過相關(guān)實(shí)驗(yàn)操作訓(xùn)練的人員均可完成，對總體結(jié)果的影響可以忽略不計(jì)。但是甘孜州地處偏遠(yuǎn)，實(shí)驗(yàn)條件非常有限，全部縣級單位均沒有獨(dú)立、可正常運(yùn)行的實(shí)驗(yàn)室，縣級單位沒有專職的實(shí)驗(yàn)室操作人員，設(shè)備缺失嚴(yán)重等，這些都是甘孜州以后面臨的實(shí)際問題。有研究者等［1-2］用基因工程方法克隆并表達(dá)了羊源六鉤蚴Eg95抗原基因，用其表達(dá)產(chǎn)物制成的疫苗免疫羊，其保護(hù)率達(dá)96%～100%。重組Eg95蛋白可誘導(dǎo)中間宿主（羊）產(chǎn)生較強(qiáng)的保護(hù)力，是最具發(fā)展前途的棘球蚴病候選疫苗，受到國內(nèi)外學(xué)者的廣泛關(guān)注［3］。

4 結(jié)論

本次試驗(yàn)使用羊棘球蚴（包蟲）病基因工程亞單位疫苗，按照每只羊劑量的5倍量進(jìn)行免疫，對比2017年免疫試驗(yàn)結(jié)果，評估得出包蟲病基因工程亞單位疫苗Eg95的免疫效果相對穩(wěn)定，免疫效果好，值得推廣。■