牙周炎是細菌感染引起的慢性炎癥性疾病，可激活宿主的免疫反應，破壞牙齒的支持組織，最終導致牙齒脫落

。牙周炎的現有治療方法旨在去除菌斑和控制局部炎癥，然而恢復已經喪失的牙周組織依舊是一個挑戰(zhàn)。基于干細胞的組織工程策略為牙周再生帶來新的希望，人牙周膜干細胞（human periodontal ligament stem cells, hPDLSCs）是形成牙槽骨的理想細胞來源，但局部炎癥微環(huán)境抑制了hPDLSCs 成骨分化能力，因此明確hPDLSCs 的成骨分化機制，尤其是在炎癥環(huán)境下的成骨分化，對牙周炎治療至關重要。含有Src 同源結構域2 的蛋白酪氨酸磷酸酶2（Src homology-2 domain containing protein tyrosine phosphatase-2,SHP2）是一種由非受體型酪氨酸蛋白磷酸酶11（tyrosineprotein phosphatase non-receptor type 11，PTPN11）基因編碼，并廣泛表達的非受體蛋白酪氨酸磷酸酶（protein tyrosine phosphatase，PTP）。越來越多的證據表明，SHP2 在骨骼發(fā)育和形成中起著至關重要的作用，同時SHP2 與骨髓間充質干細胞（bone mesenchymal stem cells, BMSCs）的體外成骨和體內骨形成密切相關

。但目前SHP2 對干細胞的骨形成作用尚有爭議，SHP2 在不同環(huán)境以及不同的細胞可能對成骨有著不同作用

。SHP2 與炎癥反應同樣關系密切。SHP2 與干擾素-β 的產生

以及促炎細胞因子和趨化因子（包括IL-1β）的產生密切相關

。SHP2 也被證實可能在不同的炎癥通路中表現出正或負調節(jié)功能。由于SHP2 同時參與成骨和炎癥過程，筆者猜測SHP2 可能參與調節(jié)hPDLSCs 的成骨分化。SHP2 目前在炎癥條件下是否調節(jié)hPDLSCs 的成骨分化以及通過何種方式調節(jié)，目前尚無報道。本研究通過慢病毒感染敲低hPDLSCs 中的SHP2 基因，旨在探討敲低SHP2 對炎癥環(huán)境下hPDLSCs 增殖和成骨分化的影響，并研究相關機制。

1 材料和方法

1.1 主要材料及儀器

hPDLSCs（Sciencell，美國）；SHP2 shRNA 慢病毒表達載體［pSLenti-U6-shRNA（PTPN11）-CMVEGFP-F2A-Puro-WPRE，和元生物，中國］；胎牛血清（Gibco，美國）；青鏈霉素（Hyclone，美國）；高糖DMEM 培養(yǎng)基（Gibco，美國）；PBS（Gibco，美國）；甲醇（CNW，德國)；蛋白酶抑制劑（碧云天，中國）；RIPA 裂解液（碧云天，中國）；轉膜緩沖液（蘇州新賽美生物科技有限公司，中國）；電泳緩沖液（南京金斯瑞生物科技有限公司，中國）；TBS 緩沖液（上海生物工程有限公司，中國）；蛋白酶抑制劑（碧云天，中國）；CCK-8 試劑盒（Dojindo，日本）；堿性磷酸酶染色試劑盒（碧云天，中國）；茜素紅S（Sigma，美國）；氯化十六烷基吡啶（Sigma，美國）；COL-1 抗體（1∶1 000，Abcam，美國)；RUNX2 抗體（1∶1 000，Abcam，美國)；ALP 抗體（1∶1 000，proteintech，美國）；GAPDH 抗體（1∶5 000，Proteintech，美國)；核因子κB（nuclear factor kappa-B，NF-κB）抗體（p-p65、p65 和IκBα，1∶1 000，Affinity Biosciences，美國）；MAPK 抗體（p-ERK、ERK、p-p38、p-38、p-JNK 和JNK，1∶1 000，Cell Signaling Technology，美國）；兔源及鼠源二抗（1∶5 000, Proteintech，英國）；ECL 試劑盒（蘇州新賽美生物科技有限公司，中國）；總RNA 提取試劑盒（諾唯贊生物，中國）；HiScript ⅢRT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）（諾唯贊生物，中國）；ChamQ Universal SYBR qPCR Master Mix（諾唯贊生物，中國）；多聚甲醛（博士德生物，中國）；地塞米松（Sigma，美國）；β-甘油磷酸鈉（Sigma，美國）；抗敗血酸（Sigma，美國）。

1.2 實驗方法

1.2.1 細胞培養(yǎng) 按照低糖DMEM 培養(yǎng)基+10%胎牛血清+1%雙抗（青霉素/鏈霉素）配置完全培養(yǎng)基用于PDLSCs 的培養(yǎng)。成骨誘導液為完全培養(yǎng)基額外添加成骨誘導成分（50 μM抗壞血酸,10 mM β-磷酸甘油和100 nM 地塞米松）。根據預實驗及既往研究

，使用10 ng/mL 腫瘤壞死因子-α（tumor necrosis factor-α，TNF-α）和10 ng/mL 白細胞介素-1β（interleukin-1β，IL-1β）刺激hPDLSCs 創(chuàng)建炎癥微環(huán)境。

1.2.2 SHP2 shRNA 慢病毒載體的構建 SHP2 shRNA 慢病毒載體由和元生物公司構建，根據Human PTPN11 基因的轉錄本設計siRNA 靶點，安排引物合成。將單鏈的引物退火成雙鏈oligo 序列，連接入雙酶切線性化的RNA 干擾載體，替換原有ccdB 毒性基因。菌落PCR 篩選轉化子，篩選的陽性克隆進行測序驗證。測序驗證正確的克隆，進行高純度質粒抽提。

1.2.3 重組質粒的包裝和滴度測定 將構建的SHP2 shRNA 慢病毒載體和包裝質粒共轉染進人腎上皮細胞系HEK 293T 細胞，換液、培養(yǎng)后，收集細胞上清液，進一步離心獲得病毒濃縮液。使用有限稀釋法稀釋病毒濃縮液，用不同濃度梯度感染HEK 293T 細胞，熒光顯微鏡下觀察各孔熒光細胞數量，結合稀釋倍數計算病毒滴度。

11月28日，歐洲委員會宣布其已根據《歐盟并購制度》就日本電產集團（尼得科）計劃收購美國家電制造商惠而浦旗下壓縮機業(yè)務恩布拉科開展深入調查。尼得科預計將于2019年上半年完成對恩布拉科的收購。

1.2.5 CCK-8 檢測細胞增殖 在96 孔板中加入100 μL 不同處理后的細胞懸液（5×10

個/孔），置于培養(yǎng)箱（37 ℃，5% CO

）中孵育24 h，使細胞貼壁。在培養(yǎng)箱中孵育適當的時間（1、3、5、7 d）后每孔加入10 μL CCK-8 溶液，孵育1 h 后酶標儀測量450 nm 處的吸光度并繪制生長曲線。

學生內在原因一方面體現在其自我防護意識的薄弱，另一方面是由于其心理特點的復雜化和多樣化。自我防護意識受到后天環(huán)境和教育的影響，若在就學期間缺少相應的教育，接觸社會少，思辨能力差，很容易受到外界的影響改變其初心。還有很多學生在宿舍里亂用違章電器，缺少防火意識，一旦出現突發(fā)情況就無法從容應對等。心理特點的復雜和多樣體現為在學習壓力、生活壓力或周邊環(huán)境的影響下，很多學生會存在或輕或重的心理問題，承受能力不強，遇到困難就容易選擇極端的處理方式。這些心理問題若不能及時解決，會嚴重影響學生的身心健康［3］。

1.2.6 堿性磷酸酶（alkaline phosphatase , ALP）染色及ALP 活性檢測 hPDLSCs 成骨誘導3、7 d 后，去除孔板內的培養(yǎng)基，用PBS 洗滌細胞樣品5 次，每次5 min。加入適量染色工作液，將樣品置于室溫下，避光孵育30 min。去除染色工作液，蒸餾水洗滌2 次，終止顯色反應。

慢病毒感染HEK 293T 細胞72 h 后通過倒置熒光顯微鏡觀察到綠色熒光（圖2），測得SHP2 shRNA 重組慢病毒的滴度為2.9×10

TU/mL，表明轉染成功。

ALP 在鈣化過程中作為第一批功能基因，在骨骼發(fā)育早期表達。在骨礦化過程中，ALP 增加局部無機磷的濃度，同時可水解抑制礦化結晶的焦磷酸鹽，最終促進羥基磷灰石的形成。COL-1 是骨骼中有機細胞外基質中最豐富的成分，其主要功能是和其他膠原蛋白一同充當骨細胞的支架，并起著支撐作用。因此ALP、COL-1 在早期成骨中意義重大，也是經典的早期成骨指標

。本實驗證明敲低SHP2 可促進ALP、COL-1 的表達，表明SHP2參與了上述早期礦化過程。

1.2.7 茜素紅染色（alizarin red staining, ARS）及鈣離子濃度分析 hPDLSCs 成骨培養(yǎng)21 d 后，用4%多聚甲醛固定15 min 并用茜素紅S 染色液在室溫下染色30 min，顯微鏡下觀察并拍照。每孔加入1 mL 10%氯化十六烷基吡啶，在室溫下充分溶解。使用酶標儀測量562 nm 處的吸光度作為鈣結節(jié)的半定量分析結果。

成骨誘導3 d 時，與對照組相比，SHP2 敲低組ALP、COL-1 基因表達均有增高（

= 3.628，

=0.022；

= 11.010，

＜0.001），而RUNX2 和OCN 基因表達無明顯差異（圖4a）；在成骨培養(yǎng)3 d 后SHP2 敲低組ALP 活性高于對照組（

= 5.423，

=0.032）（圖4b）。在成骨誘導7 d 時，SHP2 敲低后相較對照組，只有COL-1 基因表達增高（

=4.402，

=0.022），其他基因均無明顯變化（圖4c），而成骨誘導7 d 后的ALP 活性檢測顯示，SHP2 敲低后ALP 活性提高（

= 6.947，

= 0.020）（圖4d）。在成骨誘導14 d 后，SHP2 敲低組的COL-1 表達增高（

=13.32，

＜0.001），但RUNX2，ALP 的表達無明顯變化（圖4e、4f）。ALP 染色結果顯示，與誘導3 d 相比，誘導7 d 的對照組及SHP2 敲低組染色均加深，說明隨著時間增加ALP 在細胞質中進一步積累。此外，在成骨培養(yǎng)3 d 后SHP2 敲低組ALP 染色深于對照組，但成骨誘導7 d 后兩組ALP 的著色深度無明顯差異（圖4g、4h）。經ARS 染色實驗證明SHP2 敲低組的著色及鈣結節(jié)的形成量與對照組無明顯差異（圖4i）。

在培養(yǎng)1 d 后細胞增殖暫無明顯改變，而3、5、7 d 后，SHP2 敲低組細胞活力低于對照組（

＜0.05, 圖3i）。提示SHP2 對hPDLSCs 的增殖有一定的潛在作用。炎癥條件下，SHP2 敲低對hPDLSCs的增殖活力并無明顯影響（

＞0.05）。

1.2.9 蛋白提取以及Western blot 實驗 提取總蛋白并按BCA 蛋白濃度測定試劑盒說明書測定蛋白濃度。根據BCA 所測得蛋白濃度，上樣不同體積的蛋白。蛋白分離后轉移至PVDF 膜，并置入封閉液內，室溫下搖床封閉10 min。隨后4 ℃過夜孵育一抗。TBST 搖床洗滌3 次，10 min/次。按照一抗的源性選擇不同的兔源或鼠源二抗，室溫孵育1 h，通過化學成像發(fā)光儀曝光。用Image J 軟件進行灰度值分析。

1.3 統(tǒng)計學分析

采用GraphPad Prism 9.0 軟件進行統(tǒng)計學分析，采用Shapiro-Wilk 法進行正態(tài)性檢驗，數據用均數±標準差表示，兩樣本比較采用

檢驗。

＜0.05 為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 SHP2 shRNA 慢病毒載體的測序結果

經過比對，重組克隆中插入的片段序列與選用的oligo 序列完全一致（圖1），表明SHP2 shRNA慢病毒載體構建成功。

2.2 慢病毒原液滴度測定結果

hPDLSCs 成骨誘導3、7 d 后，去除孔板內的培養(yǎng)基，用PBS 洗滌細胞樣品3 次，每次5 min。使用細胞裂解液裂解細胞。每毫克蛋白樣品每分鐘生產的對硝基苯酚毫摩爾數作為ALP 活性進行統(tǒng)計分析。

2.3 建立體外炎癥模型

使用10 ng/mL TNF-α、IL-1β 刺激hPDLSCs 24 h后，通過RT-qPCR 檢測炎癥因子IL-6、IL-1β、IL-8和TNF-α 基因轉錄水平表達。如圖3a 所示，TNF-α和IL-1β 刺激hPDLSCs 的炎癥組IL-6（

=14.84，

＜0.001）、IL-1β（

= 130，

＜0.001）、IL-8（

= 26.751，

＜0.001）和TNF-α（

= 6.775，

=0.003）基因表達水平均明顯提高。誘導7 d 后，RT-qPCR 顯示炎癥刺激組成骨相關基因COL-1（

= 68.42，

＜0.001）、RUNX2（

= 5.359，

= 0.006）的表達降低（圖3b）。成骨誘導7 d 后，炎癥組hPDLSCs 的ALP 染色淺于對照組，ALP 活性也更低（

= 22.65，

= 0.002）（圖3c、3d）。成骨誘導21 d 后，ARS 染色同樣顯示相似結果，即炎癥狀態(tài)下hPDLSCs 的鈣結節(jié)礦化形成遠少于對照組（

= 23.42，

＜0.001）（圖3e）。上述結果均證明炎癥微環(huán)境會損傷hPDLSCs 成骨分化潛力。

2.4 SHP2 敲低效率的檢測

SHP2 敲低組和空載病毒組細胞在熒光顯微鏡下均顯示出明顯的綠色熒光（圖3f），提示病毒轉染成功。通過Western blot 及RT-qPCR 檢測發(fā)現，SHP2 敲低組的SHP2 蛋白及基因的表達顯著降低（

= 9.739，

＜0.001；

= 8.474，

＜0.001），并且與空載病毒組相比，SHP2 表達量降低達70%以上（圖3g、3h）。

2.5 敲低SHP2 對hPDLSCs 增殖活力的影響

1.2.8 RT-qPCR 使用Vazyme RNA extraction kit提取總RNA，用HiScript ⅢRT SuperMix for qPCR（+gDNA wiper）反轉錄試劑盒對RNA 進行逆轉錄，獲得cDNA，以cDNA 為模板，用實時熒光定量PCR儀擴增。引物序列見表1。采用2

相對定量法分析目標基因的相對表達水平。

2.6 正常環(huán)境下敲低SHP2 對hPDLSCs 成骨分化的影響

女性盆底支持系統(tǒng)是由盆底肌肉以及韌帶、筋膜共同構成，對于維持女性盆底器官正常功能以及解剖位置存在重要的意義[1]。在女性盆底肌肉群的承重結構當中，恥骨直腸肌是重要部分，恥骨直腸肌出現損傷會導致女性出現盆底器官脫垂[2]。而在女性恥骨直腸肌損傷的誘發(fā)因素當中，經陰道分娩被視為主要原因之一，且在相關研究的數據現實中，表示經陰道分娩的初產婦，出現肛提肌損傷的幾率在10%～35%之間，且損傷部位多位于恥骨直腸肌骨盆內側壁附著部位[3]。我院選擇112例經陰道分娩女性，讓其分別接受經陰道二維腔內超聲與陰道三維超聲檢查，對其恥骨直腸肌損傷情況進行觀察，現作如下報告。

2.7 炎癥環(huán)境下敲低SHP2 對hPDLSCs 成骨分化的影響

成骨誘導3 d 時，相較于對照組，SHP2 敲低組的ALP（

= 6.823，

= 0.006）、COL-1（

= 8.249，

=0.004）、RUNX2（

= 4.589，

= 0.019）基因表達增高，OCN 作為晚期成骨指標在3 d 時并未表現出明顯差異（圖5a）；SHP2 敲低后，hPDLSCs 的ALP 活性升高（

= 5.064，

= 0.037）（圖5b）。成骨誘導7 d后，與對照組相比，SHP2 敲低后ALP（

= 6.987，

＜0.001）、COL-1（

= 8.992，

＜0.001）、RUNX（

=3.751，

= 0.033）、OCN（

= 4.737，

= 0.018）的表達增高（圖5c）。成骨誘導7 d 的ALP 活性升高，與3 d 的結果相同（

= 4.760，

= 0.041）（圖5d）。在成骨誘導14 d 后，與對照組相比，SHP2 敲低組的COL-1（

= 8.767，

＜0.001）、ALP（

= 3.418，

=0.027）、RUNX2（

=8.224，

=0.004）的蛋白表達均增高，這與RT-qPCR 結果保持一致（圖5e、5f）。從ALP 染色結果上可見，成骨誘導3 d 和7 d 的SHP2敲低組著色均深于對照組（圖5g、5h）。SHP2 敲低組經ARS 染色后，著色深度及鈣結節(jié)的形成量高于對照組（

=87.88，

＜0.001）（圖5i）。

愛國主義教育基地資源融入“綱要”課程教學，需要高校教師結合新的教學內容，加大教學改革力度，以豐富多樣的教學方法深化學生對愛國主義教育基地的認識和對中國近現代史的理解。

2.8 炎癥環(huán)境下敲低SHP2 通過抑制MAPK/NF-κB通路促進hPDLSCs 成骨分化

與非炎癥組相比，炎癥組p-p65 的水平增高（

=36.34，

＜0.001），IκBα水平降低（

=12.79，

＜0.001），說明炎癥因子（TNF-α 和IL-1β）刺激30 min時已能夠激活NF-κB 通路；而炎癥環(huán)境下，敲低SHP2 可下調p-p65（

= 12.17，

＜0.001），并且提高IκBα的表達水平（

=8.979，

＜0.001）（圖6a）。如圖6b所示，與非炎癥組相比，炎癥組p-p38和p-JNK 的表達增高（

= 67.30，

＜0.001；

= 9.712，

＜0.001）；而炎癥環(huán)境下，敲低SHP2基因可抑制p-p38和p-JNK的表達（

=25.99，

＜0.001；

=12.79，

=0.002）。

1.2.4 慢病毒轉染 以5×10

個/mL 的密度將hPDLSCs 接種于6 孔培養(yǎng)板中，待細胞融合度達到60%～80%之間時加入慢病毒感染（MOI=20）。培養(yǎng)箱中培養(yǎng)4 h 后觀察細胞狀態(tài)，將無血清培養(yǎng)基更換為完全培養(yǎng)基，繼續(xù)培養(yǎng)。細胞培養(yǎng)72 h 后在熒光顯微鏡下觀察轉染效率。加入嘌呤霉素培養(yǎng)篩選，經增殖傳代后，通過RT-qPCR 、Western blot驗證敲低效率，用于后續(xù)實驗。SHP2 低表達慢病毒（shSHP2）的靶序列為5′-ACACTGGTGATTACTATGA-3′。敲低SHP2 的hPDLSCs 組用shSHP2 表示，空載病毒組用shSHP2-NC 表示。

3 討 論

牙周炎是一種常見的破壞牙周支持組織的慢性炎癥性疾病，在牙周炎期間，促炎細胞因子在牙周組織中大量分泌

，抑制PDLSCs 的成骨能力，進一步造成牙周硬組織再生的困難。由于臨床上大多數牙周組織的愈合階段都發(fā)生在牙周炎癥微環(huán)境下，因此研究炎癥細胞因子對牙周病和干細胞介導的愈合過程的影響，對理解牙周再生機制及臨床上進一步指導和優(yōu)化牙周再生方法至關重要。

國內外許多學者已經對巷道底鼓進行了諸多研究。曼·奧頓哥特等[9]通過相似模擬試驗對巷道底鼓的全過程進行了研究，結果表明巷道圍巖的變形與破壞首先在垂直應力作用下兩幫巖層被壓裂，其次是水平應力的作用巷道頂底板向巷道內移近，其中直接底板圍巖先破壞?？导t普等 [10-11]認為底鼓的原因主要在于失穩(wěn)的底板巖層向巷道內壓曲，偏應力作用下的擴容，巖石自身的遇水膨脹。文獻[5-8]將底鼓分為擠壓流動性底鼓、撓曲褶皺性底鼓、遇水膨脹性底鼓、剪切錯動性底鼓等4種類型。文獻[12-18]也先后在巷道底鼓機理、治理方法、施工機具等方面進行了研究，對巷道底鼓控制技術的發(fā)展起到了積極作用。

在刑事訴訟中，偵查人員進行訊問時錄音錄像制度是司法改革的重要成果，發(fā)揮了規(guī)范偵查人員訊問行為、提升司法人員辦案水平、遏制相關人員刑訊逼供等作用。根據《監(jiān)察法》的規(guī)定，調查人員在訊問、搜查、查封、扣押等取證工作中，應當進行全程錄音錄像，留存?zhèn)洳?。該?guī)定不但對于監(jiān)察機關進行調查取證中嚴格執(zhí)行法律和紀律有重要意義，而且保障了調查人員和被調查人員的合法權利。《監(jiān)察法》中關于調查取證時錄音錄像的規(guī)定比《刑事訴訟法》中要求更嚴苛，發(fā)揮的作用亦更大。

然而，牙周炎修復過程中的骨再生與正常狀況下的不一樣，牙周炎局部具有特殊的炎癥環(huán)境影響了hPDLSCs 再生牙周組織的能力，在炎癥狀態(tài)下hPDLSCs 成骨能力減弱，顯然不利于牙周硬組織的修復。研究表明，來源牙周炎患者的hPDLSCs 成骨能力受損，表現為成骨細胞基因表達降低以及鈣化結節(jié)沉積物和ALP 活性減少

。本實驗也證明相比正常環(huán)境，在TNF-α 和IL-1β 誘導炎癥環(huán)境下，hPDLSCs 成骨能力明顯下降。因此，如何提高hPDLSCs 在牙周炎環(huán)境中的成骨分化能力，使其受損的成骨能力得以恢復，是干細胞治療獲得滿意治療效果的重要因素。于是筆者研究了SHP2 敲低在炎癥條件下對hPDLSCs 增殖及成骨分化的影響，發(fā)現SHP2 敲低在炎癥條件下增加了成骨標志物（ALP、COL-1 和RUNX2）的表達，證實了SHP2 敲低在炎癥環(huán)境下可以促進早期成骨。而在成骨誘導21 d 后，通過ARS 評估鈣沉積水平，以及在14 d 時通過Western Blot 評估成骨相關蛋白水平，證明了SHP2 敲低對晚期成骨指標也有促進作用。相較于正常環(huán)境，SHP2 敲低在炎癥環(huán)境下對hPDLSCs 成骨分化的促進作用更為顯著，這意味著SHP2 對于炎癥下hPDLSCs 的成骨分化起著重要作用。

NF-κB 是一種轉錄因子，在炎癥發(fā)作中起重要作用

。在炎癥狀況下，NF-κB 通路下游產生炎癥因子（如TNF-α）可抑制骨形成

。在牙周炎疾病背景下，炎癥環(huán)境也被證實可通過NF-κB 通路抑制hPDLSCs 的成骨修復效果。據現有研究表明，SHP2 與NF-κB 信號通路關系密切

。因此，筆者認為NF-κB 信號通路可能參與炎癥條件下SHP2 介導的hPDLSCs 成骨分化。本實驗發(fā)現，炎癥刺激能夠激活NF-κB 通路，而SHP2 敲低能夠抑制炎癥狀態(tài)下激活的NF-κB 通路。MAPK 通路位于NF-κB 上游，有3 條主要的分支路線即ERK、JNK、p38

。多項研究證實了在炎癥環(huán)境下，MAPK 通路中的JNK、p38 由炎癥反應激活，而通過各種生物分子或藥物抑制JNK/p38 激活可有效下調促炎細胞因子、抑制炎癥反應，實現多種炎癥疾病的治療

。本實驗同樣發(fā)現SHP2 可以調控MAPK 通路中的p38、JNK 磷酸化。

對于后期二銨的價格走勢，鄭冰表示，二銨后市的價格還是要看成本是否會出現大的波動。目前來看，經銷商普遍都比較擔心高價買入后，到了后期又出現大幅度跌落現象。后期二銨價格或將仍有一定的上升空間，但是目前價格已經漲到一個相對尷尬的高點，未來價格的不確定性還很多，如果說漲價帶來了機遇，相對應的風險也還是很大。但相比較而言，如果前期有提前備肥的經銷商，可操作的利潤空間還是相對可觀的。

基于本實驗，筆者發(fā)現敲低SHP2 基因后，炎癥條件下MAPK-NF-κB 通路部分受到抑制，hPDLSCs 的成骨分化似乎得到恢復。已有研究證明，p38、JNK 及NF-κB 通路在炎癥狀態(tài)下激活，這些通路被抑制后能夠減輕炎癥反應。此外，較低的炎癥水平可促進干細胞的成骨分化，因此筆者推斷高水平炎癥環(huán)境下，敲低SHP2 后，p38、JNK 及NF-κB 通路被抑制，減輕了炎癥反應，從而恢復干細胞的成骨分化能力。有趣的是，與SHP2 對大多數細胞中NF-κB 通路的影響相反，在正常條件下，SHP2 敲低導致hPDLSCs 中NF-κB 通路激活。未來的研究需要進一步探索這種差異的潛在機制。

綜上，本研究證明了在炎癥條件下，敲低SHP2可能通過MAPK/NF-κB 介導的信號傳導，促進炎癥環(huán)境中hPDLSCs 的成骨分化。SHP2 可能是治療炎癥相關骨骼疾?。ㄈ缪乐苎祝┑臐撛诎袠?，并為臨床上牙周再生的干細胞治療提供新的思路。

某供電公司在對一座500 kV變電站500 kV HGIS的5061斷路器I母側電流互感器A相二次絕緣進行檢查時，發(fā)現該電流互感器對地、各互感器線圈之間絕緣為0(交接試驗規(guī)程要求二次絕緣不低于1000 MΩ) [5]。打開外殼后發(fā)現內部有積水，電流互感器線圈受潮、互感器艙室內部發(fā)霉嚴重，如圖1所示。

Zhang Y, Jin YQ and Ji J wrote the article and designed the study. Zhao Q, Lv HD, Wang TC and Dou ZJ collected, processed and analyzed the data. All authors read and approved the final manuscript.

[1] Zhang X, Gu H, Xie S, et al. Periodontitis in patients with psoriasis: a systematic review and meta-analysis[J]. Oral Dis, 2022, 28(1):33-43.doi:10.1111/odi.13617.

[2] Fan D, Liu S, Jiang S, et al. The use of SHP-2 gene transduced bone marrow mesenchymal stem cells to promote osteogenic differentiation and bone defect repair in rat[J]. J Biomed Mater Res A,2016,104(8):1871-1881.doi:10.1002/jbm.a.35718.

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