吳桐，楊鵬飛，蔣飛榮，聶晶,3，盧素云，謝奎，侯艷梅，鄧友田

（1.海普諾凱營養(yǎng)品有限公司，長沙 410000；2.湖南安生美藥物研究院有限公司，長沙 410000；3.中南大學，長沙 410000）

0 引言

作為一種常見的骨骼性疾病，骨質疏松癥可隨著病情的發(fā)展嚴重影響中老年人的生活質量。根據2018年中國骨質疏松癥流行病學調查的結果顯示，我國50歲及以上的中老年人骨質疏松癥患病率為19.2%。其中，男性的患病率水平為6.0%，女性的患病率水平為32.1%，骨質疏松癥已經成為我國50歲以上人群的重要健康問題，中老年女性骨質疏松問題尤為嚴重[1]。骨折是骨質疏松危害性最直接的結果，也是老年患者致殘和致死的主要原因之一。為了預防和減輕骨質疏松癥帶來的潛在家庭和社會負擔，“健康骨骼”已被國家衛(wèi)生健康委納入《“健康中國2030”規(guī)劃綱要》專項行動[2]，以宣傳和倡導健康的生活方式，實現對骨質疏松癥的預防與管理。在眾多的預防骨質疏松的方式中，合理的營養(yǎng)和飲食是其中重要的一種[3]。

乳制品因其含有豐富營養(yǎng)物質，如多種人體必需氨基酸、豐富的維生素及礦物質，已成為日常生活中必不可少的營養(yǎng)品，研究表明攝入乳制食品有利于成年人骨骼的健康[4]。羊奶中含有豐富的酪蛋白、乳清蛋白、礦物質、維生素等營養(yǎng)物質和生物活性因子，其營養(yǎng)價值總體上優(yōu)于牛奶，且更接近于人奶，被稱為“奶中之王”[5-6]。近年來，隨著人們對營養(yǎng)與健康觀念重視，高營養(yǎng)價值的羊奶及其以羊奶為基礎的羊乳基營養(yǎng)粉受到人們的廣泛關注。相較于牛乳制品，目前關于羊奶粉功效的研究，特別是羊奶粉對骨質疏松影響的研究仍比較缺乏。因此本研究通過構建骨質疏松大鼠模型，初步評價了兩款羊乳基營養(yǎng)粉對去卵巢骨質疏松模型大鼠骨密度的影響，以期為羊奶粉在預防和減輕骨質疏松癥中的應用提供科學依據。

1 材料和方法

1.1 受試物

益生菌益生元（以下簡稱雙益）羊乳基營養(yǎng)粉、高鈣富硒（以下簡稱高鈣）羊乳基營養(yǎng)粉，由海普諾凱營養(yǎng)品有限公司提供。依據產品每日推薦飲用量，按體表面積換算成大鼠等效劑量為6.3 g/kg，給樣劑量設為等效劑量的2倍，用純水配制成0.63 g/mL，給樣體積20 mL/kg。

1.2 實驗動物

SD大鼠90只（SPF級，250～300 g，雌性），湖南斯萊克景達實驗動物有限公司。實驗動物生產許可證號：SCXK（湘）2019-0004，實驗動物使用許可證號：SYXK（湘）2018-0004，實驗動物質量合格證：430727201101056048。

1.3 儀器設備

雙能X射線骨密度儀，HOLOGIC，Discovery ABone。

1.4 試驗方法

1.4.1 造模與給藥

檢疫結束后，動物按體重隨機分為空白對照組和去卵巢組，空白對照組10只大鼠；去卵巢組40只大鼠，用于制備骨質疏松大鼠模型。去卵巢組40只大鼠摘除雙側卵巢后縫合，空白對照組大鼠作為假手術組進行相應的操作，手術技術后進行消毒和慶大霉素干預處理。造模第5天，選取模型動物30只，按體重隨機分為模型對照組、雙益羊乳基營養(yǎng)粉、高鈣羊乳基營養(yǎng)粉，每組各10只動物。卵巢去勢后第30天開始，雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉組動物分別灌胃給予相應劑量的受試物，每天1次，連續(xù)8周，空白對照組和模型組給予純水。試驗期間，各組動物均自由攝食與飲水。

1.4.2 指標檢測

（1）體重變化：每周對大鼠進行稱重1次。

（2）骨密度檢測：給藥結束后，各大鼠取右側股骨，剔除筋膜和肌肉，使用骨密度儀測量骨密度。

（3）鈣吸收率：于給藥第4周記錄大鼠3 d的攝食量，并收集大鼠3 d的糞便，計算鈣吸收率：

鈣的表觀吸收率=（攝入鈣-糞鈣）/攝入鈣×100%

1.5 結果統(tǒng)計

本試驗數據有效數字修約按照四舍五入進行。統(tǒng)計學分析選用SPSS16.0，數據采用均數±標準差（X±s）表示，進行正態(tài)性和方差齊性檢驗。如果滿足正態(tài)性（P＞0.05），用單因素方差分析（ANOVA）進行統(tǒng)計分析，并根據方差齊性情況選用LSD+Dunnet（方差齊）或Tamhane’s T2（方差不齊）進行比較分析。如果不滿足正態(tài)性（P＜0.05），則用Kruskal-Wallis檢驗，并用Mann-Whitney檢驗進行兩兩比較分析。統(tǒng)計結果以α=0.05為檢驗界限，其中P＜0.05表示有統(tǒng)計學意義，P＜0.01表示所檢驗的差別有非常顯著性意義。

2 結果與分析

2.1 羊乳基營養(yǎng)粉對骨質疏松大鼠體重的影響

如表1所示，與空白對照組相比，隨著試驗周期的增長，模型對照組大鼠第1周、第2周、第3周、第5周體重明顯升高（P＜0.05）。

表1 羊乳基營養(yǎng)粉對骨質疏松大鼠體重的影響(X±s,n=10) g

與模型對照組相比，給樣后，雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉組大鼠體重變化未見統(tǒng)計學差異。但與模型對照組相比，雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉組大鼠體重均降低；給樣8周后雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉組大鼠體重增重均低于模型對照組。上述結果表明，去除卵巢后，骨質疏松模型大鼠體重可顯著增加，雙益羊乳基營養(yǎng)粉和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉均可減緩骨質疏松模型大鼠體重增長。

2.2 羊乳基營養(yǎng)粉對骨質疏松大鼠鈣攝入的影響

通過測定給樣第4周各組大鼠鈣的吸收與排泄，發(fā)現與空白對照組相比，模型對照組大鼠攝食量、鈣總攝入量、糞便鈣含量均顯著增加（P＜0.01），雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉組大鼠鈣總攝入量、鈣總吸收量均顯著增加（P＜0.05）。與模型對照組相比，雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉組大鼠攝食量、鈣總攝入量、糞便鈣含 量、鈣總吸收量均極顯著升高（P<0.01）。結果如表2所示。

表2 羊乳基營養(yǎng)粉對骨質疏松大鼠攝食及鈣吸收的影響(X±s,n=10)

與空白對照組相比，模型組大鼠鈣總吸收率極顯著下降（P<0.01），與模型對照組相比，雙益羊乳基營養(yǎng)粉和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉組大鼠鈣總吸收率均極顯著升高（P<0.01），鈣的吸收率分別提高33%和32%。結果見圖1。

圖1 骨質疏松大鼠鈣吸收率

2.3 羊乳基營養(yǎng)粉對骨質疏松大鼠骨密度的影響

給樣8周后，與空白對照組相比，模型對照組大鼠右后肢股骨骨密度極顯著降低（P<0.01）說明造模成功。雙益羊乳基營養(yǎng)粉組大鼠右后肢股骨骨密度極顯著升高（P<0.01），高鈣羊乳基營養(yǎng)粉組大鼠右后肢股骨骨密度顯著升高（P<0.05），兩組骨密度分別提高9%和8%。結果見表3。

表3 羊乳基營養(yǎng)粉對骨質疏松治療組大鼠骨密度的影響（X±s，n=10）

3 結果與討論

骨的重建包括破骨細胞(起吸收骨的作用)與成骨細胞(起成骨作用)的協(xié)調活動。中年以前骨吸收與骨形成處于平衡狀態(tài),但中年開始骨吸收大于骨形成(原因之一是由于老年人血中活性維生素D3水平降低,影響到小腸對鈣的吸收,主要依靠貯存的骨鈣維持足夠的血鈣水平),因此導致骨量進行性丟失。婦女絕經后由于雌激素分泌減少，活性維生素D減少，因此在絕經后頭幾年骨丟失速度較快，骨丟失可發(fā)展以致骨質疏松[7]。骨質疏松癥的危害日益引起了人們的重視。在此背景下，加重點人群防控，積極倡導居民養(yǎng)成均衡膳食、適量運動等健康生活方式成為落實《“健康中國2030”規(guī)劃綱要》對骨骼健康工作的要求的重要途徑之一[8]。

揭良等[9]文章顯示，鈣、維生素D、維生素K等是提高骨量的重要原料。劉曉紅等[10]通過高蛋白食物、鈣等礦物質、維生素D等的搭配方式進行飲食及營養(yǎng)護理，發(fā)現飲食及營養(yǎng)護理對老年性骨質疏松患者具有比較理想的護理效果。羊乳憑借其優(yōu)異的營養(yǎng)價值，可在老年人骨質疏松的防治中發(fā)揮重要的作用。山羊乳是鈣的良好來源，其鈣含量比牛奶高約13%。山羊乳含有豐富的維生素，其中維生素D能調節(jié)骨骼中磷酸鈣的合成，促進鈣在小腸吸收，改善骨骼代謝。維生素D與鈣和磷協(xié)同作用，共同維護骨骼健康[11]。羊乳中的鈣和磷的質量分數均高于奶牛乳、水牛、牦牛乳，近似最佳鈣磷比2∶1，易于消化吸收[12]。

本研究通過卵巢去勢的方式構建骨質疏松模型大鼠，發(fā)現在試驗期間模型組大鼠體重可顯著增加，與文獻研究結果一致[13]，這可能是由于卵巢切除后，雌激素喪失引起脂肪組織堆積[7]。研究表明，卵巢切除后，體內雌激素含量降低是導致大鼠體重增加以及骨質疏松形成的重要因素[10,14]。通過雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉分別干預骨質疏松模型大鼠，發(fā)現兩款羊乳基營養(yǎng)粉均能降低因雌激素含量減少導致的體重增加，雙益羊乳并可促進骨質疏松大鼠對鈣的吸收，鈣總吸收率分別提升33%和32%，這可能與羊乳中含有豐富的鈣和維生D，以及羊乳易消化吸收有關[12,15-16]。

通過進一步的研究發(fā)現，雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉均具有提升骨質疏松模型大鼠骨密度的作用，分別提升9%和8%。雙益羊乳基營養(yǎng)粉對于骨密度的提升略高于高鈣羊乳基營養(yǎng)粉的原因可能是由于雙益羊乳基營養(yǎng)粉中的嗜酸乳桿菌和動物雙岐桿菌在腸道中能生成有機酸，降低腸道pH，增加鈣的可溶性和吸收率。

綜上所述，雙益羊乳基營養(yǎng)粉組和高鈣羊乳基營養(yǎng)粉在輔助骨質疏松的預防和治療中具有良好開發(fā)前景和應用價值。