蔡琳 岳林 邢少姬 穆永平 戈娜 張智燕 池敏

(1包頭醫(yī)學(xué)院醫(yī)學(xué)技術(shù)與麻醉學(xué)院醫(yī)學(xué)檢驗實驗中心，內(nèi)蒙古 包頭 014060；2包頭市腫瘤醫(yī)院病理科；包頭醫(yī)學(xué)院 3臨床生物化學(xué)檢驗與分子診斷教研室；4營養(yǎng)與食品健康研究所；5內(nèi)蒙古腫瘤醫(yī)院檢驗科；6包頭醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院檢驗科；7內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院核醫(yī)學(xué)科)

與非小細(xì)胞肺癌(NSCLC)發(fā)生有關(guān)的驅(qū)動基因很多，其中表皮生長因子受體(EGFR)基因突變和由棘皮動物微管相關(guān)蛋白樣(EML)4和間變性淋巴瘤激酶(ALK)兩種基因的特定部分發(fā)生融合而成的EML4-ALK融合基因也是NSCLC細(xì)胞靶向治療中最重要的靶點和療效預(yù)測指標(biāo)之一。

由于我國地域廣闊，在國內(nèi)惡性腫瘤的發(fā)生與靶向治療等和相關(guān)驅(qū)動基因突變發(fā)生的相關(guān)研究中，會受到不同地域、飲食習(xí)慣、檢測技術(shù)和樣本量等因素的影響，進而使研究結(jié)果出現(xiàn)差異〔1～5〕。

目前尚未見關(guān)于內(nèi)蒙古地區(qū)NSCLC患者上述兩種驅(qū)動基因的異常情況的研究報道數(shù)據(jù)。本研究旨在了解內(nèi)蒙古地區(qū)NSCLC患者EGFR與EML4-ALK基因異常突變情況。

1 資料與方法

1.1研究對象 選取收集來自內(nèi)蒙古地區(qū)多家醫(yī)院2016年12月至2019年12月就診且經(jīng)分子病理基因診斷室組織病理學(xué)確診為NSCLC，且針對其兩種驅(qū)動基因EML4-ALK融合基因和EGFR基因突變進行檢測的263例患者(包括腺癌214例和非腺癌49例)腫瘤組織活檢樣本作為研究對象。入選對象均未在檢測前接受過任何形式的放化療或抗腫瘤的靶向治療。年齡33～88歲，平均(60.8±14.6)歲。男161例，女102例，民族均為漢族，且在內(nèi)蒙古地區(qū)居住有10年以上，彼此無血緣關(guān)系。

1.2檢測方法

1.2.1腫瘤細(xì)胞DNA和RNA的提取 嚴(yán)格遵循試劑盒(天根生化科技有限公司生產(chǎn))提取說明步驟規(guī)范操作提取出腫瘤活檢組織標(biāo)本中可用于下一步基因突變檢測的基因組DNA和總RNA。

1.2.2EGFR基因突變和EML4-ALK基因融合檢測 嚴(yán)格按照試劑盒(鑫諾美迪基因檢測技術(shù)科技公司生產(chǎn))說明要求在ABI 7300 PIUS熒光定量檢測儀上完成EGFR基因突變(PCR熒光探針法)和EML4-ALK融合基因(RT-PCR熒光探針法)的檢測與結(jié)果判定。

1.3統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS17.0軟件進行χ2檢驗。

2 結(jié) 果

2.1EGFR基因突變和EML4-ALK基因融合陽性結(jié)果一般情況 發(fā)現(xiàn)有EML4-ALK融合基因陽性者15例(5.70%)，EGFR基因的18、19、20和21號共4個外顯子上7種常見突變位點類型均存在，共計突變陽性者92例(34.98%)，EGFR基因突變形式有單一位點和雙位點，前者占總突變的93.48%(86/92)，后者占總突變的6.52%(6/92)；單一位點包括19del 34例、L858R 43例、G719X 1例、T790M 1例、20ins 1例、S768I 2例、L861Q 4例；雙位點突變包括G719X/L861Q和19del/L858R各1例，L858R/T790M和G719X/S786I各2例。

2.2EGFR基因突變和EML4-ALK基因融合與患者臨床相關(guān)參數(shù) 不同性別、病理類型患者EGFR突變率差異顯著(均P<0.01)；不同性別、年齡EML4-ALK融合基因陽性表達(dá)率差異顯著(P<0.05，P<0.01)；無同時發(fā)生EGFR基因突變和EML4-ALK融合基因陽性的患者。見表1。

表1 EGFR基因突變和EML4-ALK基因融合與患者臨床相關(guān)參數(shù)〔n(%)〕

3 討 論

人類體細(xì)胞中EGFR基因發(fā)生突變后可導(dǎo)致其信號傳導(dǎo)通路持續(xù)性激活，并與包括NSCLC在內(nèi)的多種惡性腫瘤的發(fā)生與轉(zhuǎn)移相關(guān)〔6〕。同時，EGFR基因酪氨酸激酶功能區(qū)的18～21號外顯子上的多種突變與針對以其為靶點設(shè)計的EGFR-酪氨酸激酶抑制劑(TKI)靶向藥物對NSCLC患者治療的敏感性與有效性相關(guān)。

研究表明，EML4-ALK基因融合后激發(fā)NSCLC發(fā)生的機制與EGFR突變引發(fā)惡性腫瘤的機制相似，均具有酪氨酸激酶的持續(xù)激活及對癌基因的特殊依賴性〔7〕。同時，EML4-ALK融合基因和EGFR基因一樣，目前已成為NSCLC靶向治療的新型分子靶標(biāo)，克唑替尼等EML4-ALK靶向藥物對其融合基因陽性者有效。

本研究EGFR基因突變率與陜西南部(35.19%)〔8〕的較為接近，高于云南(25.55%)〔9〕和青海(31.33%)〔10〕，低于四川(47.78%)〔11〕、遼寧沈陽(53.7%)〔12〕、上海(47.34%)〔13〕等地區(qū)。本研究中EGFR基因4個外顯子上7種常見突變位點類型中檢出最多的突變位點類型，也與上述地區(qū)基本一致。同時，本研究人群中發(fā)現(xiàn)除以單一位點為主要突變外，還有雙位點突變個體，這與上述四川地區(qū)的結(jié)果較為一致。本研究結(jié)果也與上述報道的云南、四川、遼寧沈陽、上海的結(jié)果一致。

在EGFR基因突變熱點中已經(jīng)公認(rèn)：19-del、21-L858R和18-G719X 3種突變屬于敏感性突變，即均對EGFR-TKI靶向藥物治療敏感有效，而另兩種突變20-T790M和20-Ins為耐藥性突變，均對EGFR-TKI靶向藥物耐藥無效。本研究結(jié)果提示絕大多數(shù)EGFR基因突變NSCLC患者個體能夠從EGFR-TKI靶向藥物中受益。

本研究中EML4-ALK融合基因的陽性率低于報道的中山市(9.09)〔14〕和華南地區(qū)(17.1%)〔4〕，高于浙江省(4.70%)地區(qū)〔5〕。同時，本研究與上述中山市、浙江省的結(jié)果一致，而華南地區(qū)的研究結(jié)果存在差異，該研究沒有發(fā)現(xiàn)該融合基因的發(fā)生與性別和年齡有關(guān)。

EML4-ALK融合基因的表達(dá)與NSCLC的發(fā)生發(fā)展過程有關(guān)，V1、V3為常見的融合〔15〕。EML4-ALK融合基因的耐藥機制主要是：激酶域的突變從而影響ALK活性位點對藥物的敏感性，基因拷貝數(shù)目的增加，抑制信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路從而激活信號旁路。臨床研究表明，當(dāng)EML4-ALK陽性患者出現(xiàn)耐藥的情況后，檢測發(fā)現(xiàn)其EGFR基因易發(fā)生敏感性突變〔16〕。因此，EML4-ALK融合基因陽性患者在使用ALK-TKI靶向藥物治療過程中即使出現(xiàn)耐藥現(xiàn)象，其也可從EGFR-TKI靶向藥物中受益。

此外，有文獻報道發(fā)現(xiàn)，有少數(shù)患者同時發(fā)生EGFR基因突變和EML4-ALK融合基因陽性〔17〕。本研究未發(fā)現(xiàn)EGFR基因突變和EML4-ALK融合基因陽性兩者共存者。這可能與本研究所涉樣本數(shù)不足夠多有關(guān)。隨著靶向治療由單靶點向多靶點的發(fā)展，對于上述EGFR基因突變和EML4-ALK融合基因陽性同時并存患者能否從中受益，還需要大量的臨床試驗研究來進一步發(fā)現(xiàn)。同時，還需要在后續(xù)的研究中增加樣本數(shù)，并進一步深入研究探討其他的NSCLC驅(qū)動基因如ROS融合基因等與患者臨床相關(guān)參數(shù)及其飲食生活習(xí)慣等的相關(guān)性，以便更好地為NSCLC的早期預(yù)防和晚期靶向治療提供幫助。