膝關(guān)節(jié)骨關(guān)節(jié)炎 ( knee osteoarthritis，KOA ) 是一種會影響整個關(guān)節(jié)結(jié)構(gòu)的退化性慢性疾病，其特征在于軟骨的逐漸退化和軟骨下骨的改變。據(jù)報道，骨關(guān)節(jié)炎 ( osteoarthritis，OA ) 的總體患病率為5%～14%

。在歐洲國家據(jù)預測，到 2022 年，將有超過 6000 萬人受到 OA 的影響，我國男性 OA 的發(fā)病率為 58%，女性更上升至 65%～67%

。KOA主要是由于機械負荷和炎癥使關(guān)節(jié)組織損傷所致，但 KOA 高發(fā)的根本原因仍不清楚，并且相關(guān)研究還不充分，影響其預防和治療

。為了加速 KOA 的研究從被動干預轉(zhuǎn)向主動的早期預防和治療轉(zhuǎn)變過程，需要對發(fā)病機制有透徹的了解，并結(jié)合有效的診斷生物標志物來指示疾病的發(fā)生發(fā)展。近年來，科研工作者在探索 KOA 早期診斷、病情預估的生物標記物中開展了大量科研工作。快速發(fā)展的基因組學、蛋白質(zhì)組學、肽組學、代謝組學等組學平臺為篩選 KOA 生物標記物開拓了新的思路

。

習近平總書記指出：“我們既要綠水青山，也要金山銀山?！薄氨Ｗo生態(tài)環(huán)境就是保護生產(chǎn)力，改善生態(tài)環(huán)境就是發(fā)展生產(chǎn)力。良好生態(tài)環(huán)境是最公平的公共產(chǎn)品，是最普惠的民生福祉?！?/p>

蛋白質(zhì)組學技術(shù)使研究人員能夠快速闡明疾病的發(fā)病機制，并揭示包括血清、關(guān)節(jié)液和尿液在內(nèi)的獨特體液中的生化標志物。因此，蛋白質(zhì)組學研究越來越多地用于測量 OA 患者的體液

。在上述生物流體中，尿液是 OA 蛋白質(zhì)組學研究的理想來源。與血清和關(guān)節(jié)液相比，它易于獲取并且可以無創(chuàng)收集

。但 OA 患者尿液中蛋白水平的變化可能受體內(nèi)其它疾病的影響，并不能完全反應 OA 的變化，但關(guān)節(jié)液中蛋白水平的變化則可以。鑒于關(guān)節(jié)液蛋白組學在 OA 中的獨特優(yōu)勢和應用的可行性，本研究納入 2017 年 8 月至 2018 年 10 月，新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)醫(yī)院骨關(guān)節(jié)科膝關(guān)節(jié)滑膜切除患者為研究對象，采用同位素標記相對和絕對定量( isobaric tags for relative and absolute quantification，iTRAQ ) 的方法篩選 KOA 關(guān)節(jié)液中的差異蛋白，分析其通路并驗證其在體內(nèi)表達。

資料與方法

一、納入標準與排除標準

1.納入標準：( 1 ) 符合《骨關(guān)節(jié)炎診治指南( 2018 年版 ) 》中相關(guān)診斷標準

者；( 2 ) 單膝患病者；( 3 ) 根據(jù) Kellgren-Lawrecne 分期標準診斷分期為 Ⅱ、Ⅲ 期者；( 4 ) 年齡 30～80 歲者。

2.排除標準：( 1 ) 對花粉及其它藥物有過敏反應史者；( 2 ) 并發(fā)嚴重感染疾病、惡性腫瘤、凝血障礙、先天性疾病和其它可能引起并發(fā)癥的疾病者；( 3 ) 存在除 KOA 外其它類型的關(guān)節(jié)炎者；( 4 )有注射透明質(zhì)酸或皮質(zhì)類固醇史情況者；( 5 ) 妊娠婦女或哺乳期婦女。

目前各在運核電廠依據(jù)《核電廠營運單位報告制度》中的建造階段事件的報告準則向國家核安全局上報建造事件，報告準則包含：違反認可的質(zhì)保大綱的要求；最終設(shè)計違反認可的初步安全分析報告中的承諾或違反建造許可證條件；不符合法規(guī)、標準、技術(shù)條件或其他設(shè)計要求的建造活動或物項；建造或施工中的重大偏差、缺陷、故障或損壞、可能導致不滿足預期使用要求和安全功能的物項或者需要重新評價驗證的物項或活動等。

二、一般資料

本組共納入 40 例 ( 試驗組 )，其中男 22 例，年齡 30～75 歲，中位年齡 53 歲；女 18 例，年齡30～76 歲，中位年齡 48 歲，BMI 為 20～28，平均24?；颊呤中g(shù)方式主要包括人工膝關(guān)節(jié)置換手術(shù)及膝關(guān)節(jié)鏡手術(shù)。KOA 的診斷由膝關(guān)節(jié)正側(cè)位 X 線片( Kellgren-Lawrence 放射學診斷標準 ) 和臨床檢查結(jié)果共同判定

。從健康檢查中心招募了 40 名年齡、性別和 BMI 匹配的無 KOA 的個體作為正常對照組。其中男 22 例，年齡 32～73 歲，中位年齡 50 歲；女 18 例，年齡 35～70 歲，中位年齡 45 歲，BMI 為20～28，平均 23。本研究在新疆維吾爾自治區(qū)中醫(yī)藥研究院完成并獲得研究院倫理委員會的同意，所有最終參與研究的對象閱讀后同意并簽署知情同意書。

我小學同學的母親、有一半東歐血統(tǒng)且在蘇聯(lián)多年的亞蘭阿姨，在1982年左右曾專門跟我說過“三種樹比擬三種人”，印象深刻，令人叫絕，但我卻一直沒有替她寫出來，欠疚至今。

三、關(guān)節(jié)液收集

試驗者取仰臥位，試驗膝置于床椅邊保持放松、伴直位。取髖骨上方、股四頭肌外側(cè)為穿刺進針點，75% 酒精棉球消毒皮膚，用無菌 5 ml 注射器取少量 0.5% 利多卡因于穿刺點皮下局部麻醉。選取5 ml 注射器換上 1 ml 注射器的針頭，刺入關(guān)節(jié)腔。將收集的關(guān)節(jié)液注入無菌 Eppendorf 管內(nèi)，以 3000 rpm的速度在 4 ℃ 下離心 30 min。小心吸取上清液后置于 -80 ℃ 冰箱內(nèi)備用。

四、試驗設(shè)計

最終的對數(shù)轉(zhuǎn)換數(shù)據(jù)計算采用 Perseus 1.3.0.4。當滿足

＜ 0.05 和比率 ＞ 1.50 或 ＜ 0.66 時定義為差異表達的蛋白質(zhì)。通過參考實驗中內(nèi)部控制的分布來指定比率截止值。PANTHER 平臺 ( http://www.pantherdb.org/ ) 用于基因本體論 ( gene ontology，GO ) 注釋

，從細胞組分 ( cellular component )、分子功能 ( molecular ftunction ) 和生物過程 ( biological process ) 層次立體化分析差異蛋白的功能網(wǎng)絡。網(wǎng)絡和路徑分析通過路徑分析軟件 IPA 分析完成。層次聚類分析通過 Perseus 軟件完成。

筆者用酶聯(lián)免疫吸附實驗 ( enzyme linked immunosorbent assay，ELISA ) 的方法驗證了炎性細胞因子 IL-1β、IL-6 和 TNF-α 在漢族和維吾爾族對照組和病例組中的表達。結(jié)果表明，試驗組血清中IL-1β、IL-6 和 TNF-α 均顯著高于對照組 (

＜ 0.05 )。

五、胰蛋白酶消化和 iTRAQ 標記

總蛋白質(zhì)含量通過 Bradford 方法測定：通過與標準曲線比較采用 559 nm 處的吸光度來定量總蛋白質(zhì)。取 200 μg 蛋白變性，烷基化，然后在 37 ℃ 的胰蛋白酶消化過夜。按照說明書要求取 100 μg 蛋白質(zhì)與 1 單位 iTRAQ 試劑混合后，制備成為標記蛋白。將標記的蛋白質(zhì)與流動相 A 混合，并在 RIGOL L-3000 系統(tǒng)中以 0.7 ml / min 的流速均勻上樣到色譜柱上。逐步注入流動相 B 以 300 nl / min 洗脫樣品。使用移動設(shè)備 B 的階躍梯度收集最終洗脫液。

原始數(shù)據(jù)通過 ProteoWizard 版本 3.0.8789 提取。根據(jù) SwissProt 數(shù)據(jù)庫搜索了 Mascot。半胱氨酸的氨基甲酰甲基化和賴氨酸的 iTRAQ 8 plex 指定了固定修飾。通過蛋氨酸的氧化，N 末端的乙酰基和酪氨酸的 iTRAQ 8 復合體進行了各種修飾。使用支架 Q + 版本 4.4.8 計算標記的肽和蛋白質(zhì)的豐度。肽的接受閾值為 91% 的概率，錯誤發(fā)現(xiàn)率 ( false discovery rate，F(xiàn)DR ) 設(shè)定為 ＜ 1.0%，而相應的蛋白質(zhì)接受值分別為 99.0% 和 1.0%，使用 median 將所有實驗中獲得的強度標準化。

六、質(zhì)譜儀分析

質(zhì)譜儀分析在 Q-Exactive 質(zhì)譜儀和液相色譜系統(tǒng) ( Thermo，美國 ) 上完成。含 A 相和 B 相二元溶劑系統(tǒng)中加入標記的肽后進入質(zhì)譜分析步驟。洗脫液引入配備有 EASY-Spray 離子源的質(zhì)譜儀，該質(zhì)譜儀的預設(shè)參數(shù)為：噴霧電壓 2.3 kV，毛細管溫度320 ℃，完全質(zhì)譜 ( mass spectrometry，MS ) 模型，離子轉(zhuǎn)移 20 ms，質(zhì)子數(shù) / 電荷數(shù)范圍 300～1800，強度閾值 8.30 E + 03，霧化氣 32%。

七、數(shù)據(jù)庫搜索

“鋼琴過了八級，長笛是我們學校交響樂隊首席，花樣滑冰現(xiàn)在我在做教練助手，壘球我曾代表學校出訪過很多國家?！?/p>

八、蛋白質(zhì)統(tǒng)計分析

選擇 4 例 KOA 患者 ( KOA 1～4 ) 和 8 名正常對照 ( Con 1～8 ) 的關(guān)節(jié)液裂解，并提取蛋白質(zhì)。將兩組中編號 1～4 的樣品混合，用作質(zhì)量控制。通過iTRAQ 標記方法標記所有這 16 個樣品 ( 4 例患者，8 名對照和 4 種混合物 )，然后通過質(zhì)譜分析法進行分析。通過蛋白質(zhì)印跡法鑒定并確認了 KOA 患者中差異豐富的蛋白質(zhì)。

九、血清指標檢測

通過臨床和影像確診為 KOA 的患者入院后，按照醫(yī)囑前夜少食，次日清晨 8 點左右抽取 3 ml 靜脈血。同期選取性別年齡匹配的健康人群為對照組，4 ℃ 條件下靜止過夜，分離血清。分離后的血清在4 ℃ 放置，并采用酶聯(lián)免疫吸附法及時測定腫瘤壞死因子-α ( tumor necrosis factor-α，TNF-α )、白介素-6( interleukin-6，IL-6 ) 和白介素-1β ( IL-1β ) 濃度，比較變化情況。

十、蛋白免疫印跡分析

蛋白免疫印跡 ( Western blot ) 分析目標蛋白表達，包括 Ⅳ 型膠原蛋白 ( type Ⅳ collagen，COL-4，1∶1000；Abcam，USA )，基質(zhì)金屬蛋白酶 9 ( matrix metalloproteinase-9，MMP-9，1∶1000，Abcam，USA )，水通道蛋白 1 ( aquaporin 1，AQP1，1∶1000；碧云天，南京 )，水通道蛋白 3 ( AQP3，1∶1500；碧云天，南京 )，丁甜菜堿雙加氧酶 1 ( butyrobetaine dioxygenase 1，BBOX1，1∶2000；Abcam，USA )，纖維介素蛋白 2 ( fibrin 2，F(xiàn)GL2，1∶1000；碧云天，南京 )。步驟如下：用含 0.1% PMSF 的 RIPA 裂解液消化 30 μg 蛋白關(guān)節(jié)液蛋白，聚氰基丙烯酸正丁酯 ( polybutylcyanoacrylate，PBCA ) 法測定蛋白濃度。取等量蛋白在制備好的 12% 的聚丙烯酰胺凝( polyacrylamide gel electrophoresis，SDS-PAGE ) 膠中電泳后將蛋白轉(zhuǎn)印至聚偏氟乙烯 ( polyvinylidene fluoride，PVDF ) 膜上 ( 電壓為 60 V )。5% 脫脂奶粉封閉 1 h 后用磷酸緩沖鹽溶液 ( phosphate buffer saline，PBS ) 洗凈，添加相應一抗孵育過夜 ( 置于 4 ℃ 冰箱中 )。用 PBS 清洗后，用二抗 ( 辣根過氧化物酶，1∶2500；Abcam，USA ) 耦聯(lián)在室溫下孵育 40 min。在膜上滴加化學發(fā)光試劑后成像，電泳凝膠成像分析系統(tǒng)分析灰度值。

結(jié) 果

一、關(guān)節(jié)液蛋白測序患者的一般資料

在試驗組隨機選擇 4 例，按照年齡和性別匹配的原則在對照組中選擇 8 人收集關(guān)節(jié)液。結(jié)果兩組BMI 差異無統(tǒng)計學意義 ( 56.8±1.0

57.3±1.3，

=0.86 )，KOA 患者的 K-L 等級均為 4 級 ( 表1 )。

二、KOA 關(guān)節(jié)液蛋白組圖譜

在試驗組和對照組之間總共定量了 1412 種蛋白質(zhì)。其中

＜ 0.05 的蛋白質(zhì) 178 個。對于差異豐富的蛋白質(zhì)的分配，進一步篩選了同時滿足以下兩個條件的蛋白質(zhì)

：( 1 ) Student

檢驗

＜ 0.05；( 2 ) 與對照組相比，其比值 ＞ 1.50 或 ＜ 0.66。共產(chǎn)生 102 種差異表達的蛋白質(zhì) ( differentially expressed protein，DEP )，包括 56 種下調(diào)的蛋白質(zhì) ( 比值 ＜0.66 ) 和 46 種上調(diào)的蛋白質(zhì) ( 比值 ＞ 1.50 )，上調(diào)前10 和下調(diào)前 10 的蛋白見表2。差異蛋白的分層聚類結(jié)果表明 102 種蛋白質(zhì)在列上分為兩組，在行上也分為兩組。在列方向上疾病或?qū)φ諣顟B(tài)正確一致，沒有一個樣本作為 outsider，證明了該試驗的有效性( 圖 1 )。

三、基因本體注釋分析

花鳥畫作為我國傳統(tǒng)繪畫題材的重要組成部分，憑借其獨特的藝術(shù)魅力俘虜了眾多畫者與欣賞者的心。在傳承與發(fā)展的過程中，通過不斷地發(fā)展和創(chuàng)新形成了三種各具魅力的花鳥繪畫方式，工筆花鳥畫，寫意花鳥畫，兼工帶筆花鳥畫，都各有特色，各有美感。

四、路徑和網(wǎng)絡注釋分析

在這項研究中，筆者應用了尖端的 iTRAQ 方法探索 KOA 和正常對照組關(guān)節(jié)液中的總蛋白質(zhì)和差異表達的蛋白質(zhì)。質(zhì)譜檢測到總共 1412 種蛋白質(zhì)，其中 102 種蛋白質(zhì)的豐度差異顯著 (

＜ 0.05 和比值 ＞1.50 或 ＜ 0.66 )。發(fā)現(xiàn)的蛋白質(zhì)可能在蛋白質(zhì)水平上為KOA 的發(fā)病機制及其潛在的生物標志物提供了依據(jù)。

五、炎癥反應信號通路相關(guān)因子的驗證

智慧管理主要是實現(xiàn)對學校人、財、物的智能化管理，并在數(shù)據(jù)完善和業(yè)務流暢的基礎(chǔ)上實現(xiàn)校務平臺和數(shù)據(jù)分析、輔助決策，需要新建或完善的系統(tǒng)有學生數(shù)據(jù)一體化系統(tǒng)、教師數(shù)據(jù)一體化系統(tǒng)、資產(chǎn)管理系統(tǒng)、新數(shù)據(jù)中心機房、個性收費平臺、輔助決策系統(tǒng)、綜合服務中心等。在智慧校園環(huán)境下，充分利用大數(shù)據(jù)創(chuàng)新服務管理的方式，優(yōu)化管理決策。利用數(shù)據(jù)挖掘，為學校、各業(yè)務部門和院系提供分級、分類授權(quán)的統(tǒng)計信息報表，從而為各種科學決策提供基礎(chǔ)的數(shù)據(jù)支持。

六、差異關(guān)鍵蛋白在兩組中的表達驗證

為了確定新的潛在標記，通過 PubMed 文獻分析了差異豐富的蛋白質(zhì)的功能。最后，通過蛋白質(zhì)印跡分析進一步檢測了 6 種與 KOA 發(fā)生發(fā)展可能相關(guān)的蛋白質(zhì) ( COL-4、MMP-9、AQP1、AQP3、BBOX1 和 FGL2 )。結(jié)果顯示，與對照組相比，KOA患者血液中 COL-4、MMP-9、AQP1 和 AQP3 均顯著增加，BBOX1 和 FGL2 顯著減少 ( 圖 4 )。

GO 分析結(jié)果表明，蛋白質(zhì)涉及細胞膜 - 細胞膜物質(zhì)交換 ( 30.4% )，細胞外區(qū)域 ( 25.0% )，細胞部分( 16.1% )，細胞連接 ( 8.9% )，細胞外基質(zhì) ( 8.9% )，大分子復合物 ( 7.1% ) 和細胞器 ( 3.6% )。此外，對生物學過程的分析區(qū)分為以下 13 類：細胞過程( 22.7% )，代謝過程 ( 20.5% )，發(fā)育過程 ( 10.9% )，對刺激的反應 ( 8.7% )，多細胞生物過程 ( 7.9% )，生物調(diào)節(jié) ( 7.0% )，生物黏附 ( 7.0% )，定位 ( 6.1% )，免疫系統(tǒng)過程 ( 5.2% )，細胞生物發(fā)生 ( 2.6% )，生殖 ( 0.4% )，機體 ( 0.4% ) 和細胞殺傷 ( 0.4% )。此外，通過分子功能分析將蛋白質(zhì)分為 6 類，分別為催化活性 ( 35.3% )，結(jié)合活性 ( 34.6% )，受體活性 ( 15.8% )，轉(zhuǎn)運蛋白活性 ( 6.8% )，信號轉(zhuǎn)導活性( 4.5% ) 以及結(jié)構(gòu)分子活性 ( 3.0% ) ( 圖 2 )。

討 論

將鑒定出的 102 種差異豐富的蛋白質(zhì)提交給IPA 軟件，以分析途徑和網(wǎng)絡功能。路徑分析表明，肝纖維化 / 肝星狀細胞活化是涉及的最主要途徑。其它隨后的途徑是 TNF-α 信號通路，細胞外信號調(diào)節(jié)激酶 5 ( extracellular signal regulated kinase 5，ERK5 ) 信號轉(zhuǎn)導，信號轉(zhuǎn)導及轉(zhuǎn)錄活化因子 3 ( signal transducer and activator of transcription 3，STAT 3 )途徑，核因子 κB ( nuclear factor kappa B，NF-κB )信號轉(zhuǎn)導，X 受體 / 類視黃醇 X 受體 ( X receptor /retinoid X receptor，LXR / RXR ) 活化和神經(jīng)膠質(zhì)瘤入侵信號等 ( 圖 3a )。差異豐富的蛋白質(zhì)的網(wǎng)絡分析由 16 個蛋白組成。排名第一的蛋白得分最高，為43，其與“心血管系統(tǒng)發(fā)育和功能，細胞運動，結(jié)締組織疾病”等有關(guān) ( 圖 3b )。

OA 的病因是多方面的，涉及許多風險因素，包括年齡、性別、體重、創(chuàng)傷和炎癥。本研究中，筆者設(shè)定了嚴格的入組標準，以匹配兩組之間的這些因素。在智能路徑分析中，第 1 個分配的網(wǎng)絡包括結(jié)締組織疾病。對于像 KOA 這樣的“磨損”疾病，結(jié)締組織存在降解

。在關(guān)節(jié)軟骨中，很少有人關(guān)注諸如 COL-4。本研究中，COL-4 ( 最早發(fā)現(xiàn)于關(guān)節(jié)軟骨的細胞間質(zhì) ) 蛋白在 KOA 患者中表達較低。膠原蛋白的研究表明，它們與多種結(jié)締組織疾病有關(guān)，尤其是退化性關(guān)節(jié)疾病。

MMP-9 是另一種值得注意的蛋白質(zhì)，與 OA 的退化機制有關(guān)。MMP 家族可能影響關(guān)節(jié)炎的疾病過程中層粘連蛋白和膠原蛋白分解

。本研究中，MMP-9 在 KOA 關(guān)節(jié)液中明顯被抑制，這可能提示KOA 軟骨中破壞性的細胞外基質(zhì)形成。MMP-9 是一種明膠酶，是 MMP 家族中最復雜的成員，具有針對Ⅳ 型膠原的蛋白水解活性。與 KOA 早期關(guān)節(jié)軟骨退變有關(guān)的生物標記物包括多種基質(zhì)降解酶，例如MMP 家族具有血小板反應蛋白 1 型基序的雙整合素和金屬蛋白酶、軟骨聚集蛋白聚糖酶等

。

商務辦公功能是商務酒店的重要組成部分，保利濱湖廣場配置了會議室和宴會廳，大型會議和普通業(yè)務洽談均可兼顧。在裙樓西側(cè)設(shè)有單獨的宴會廳主入口，可便捷到達宴會廳和會議區(qū)，會議區(qū)在大堂右側(cè)，既相對獨立又可便捷聯(lián)系。健身房、泳池等康體設(shè)施集中設(shè)計在三層，滿足旅客的休閑娛樂需求，為旅客創(chuàng)造一個輕松、舒暢、愉悅的社交環(huán)境。

此外發(fā)現(xiàn)水通道蛋白家族的兩個成員 AQP1 和AQP3 在 KOA 組中上調(diào)。Mobasheri 等

在馬關(guān)節(jié)軟骨細胞中發(fā)現(xiàn) AQP1 和 AQP3 除了參與運輸水之外，還在小分子溶質(zhì)和活性代謝產(chǎn)物等一些物質(zhì)通過軟骨細胞的漿膜中發(fā)揮重要作用。研究還表明，當發(fā)生關(guān)節(jié)病變時，關(guān)節(jié)內(nèi)的軟骨細胞內(nèi)外滲透壓環(huán)境改變，軟骨間質(zhì)遭到破壞，導致 AQPs 家族蛋白在體內(nèi)表達變化，增加細胞膜水通透性

。

蛋白質(zhì)組學的途徑分析表明，肝纖維化 / 肝星狀細胞活化是差異蛋白發(fā)揮作用最主要的途徑。其中，排名前 10 的蛋白中 FGL2 在調(diào)節(jié)肝脂質(zhì)代謝中起關(guān)鍵作用

。此外，已有研究證實，與對照組相比，F(xiàn)GL2 在 OA 患者的血漿中高表達，而在肥胖人群中低表達

。BBOX1 是負責左旋肉堿生物合成的酶，在 OA 患者中較低。據(jù)報道，血脂異常在 OA中起關(guān)鍵作用，可能是一個危險因素

。因此，GO 生物學過程證實了代謝過程在 OA 病理過程中很重要。本研究證實，F(xiàn)GL2 和 BBOX1 的關(guān)節(jié)液中的濃度差異可以作為判斷 KOA 的一種方式。然而，F(xiàn)GL2 和 BBOX1 在 KOA 病理生理中的確切機制仍然未知。

通過組學篩選的差異蛋白質(zhì)應能代表 KOA 這種復雜疾病發(fā)生發(fā)展的多個方面。因此，筆者提出了差異蛋白列表中的 6 種蛋白作為 KOA 生物標志物的潛在候選物。為了闡明這些蛋白質(zhì)在 KOA 發(fā)病中的機制和作為生物標志物及靶向藥物開發(fā)的可能性，需要對這些蛋白質(zhì)的生物化學機制進行進一步研究。

綜上所述，通過分析 KOA 關(guān)節(jié)液中的蛋白質(zhì)表達譜，確定 COL-4、MMP-9、AQP1、AQP3、BBOX1和 FGL2 作為 KOA 中的候選生物標志物。對這些新型生物標記物的進一步研究將有助于了解 KOA 的病理狀況、藥物開發(fā)或干細胞研究，并改善早期診斷和治療。

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