劉彥彥，申 茹

(1.銅仁職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)院，貴州 銅仁 554300；2.惠州衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院藥學(xué)與檢驗(yàn)學(xué)院，廣東 惠州 516000)

達(dá)原飲作為中醫(yī)經(jīng)典方劑，出自吳又可的《瘟疫論》，具有開達(dá)膜原，辟穢化濁的功效[1-2]，是治療瘟疫初起邪伏膜原的代表方，由檳榔、厚樸、草果、知母、白芍、黃芩、甘草7 味藥組成，常用于發(fā)熱、小兒厭食、胃腸病、慢性腎功能衰竭、新型冠狀病毒肺炎等多種疾病[3-8]。

目前關(guān)于達(dá)原飲含量測(cè)定的文獻(xiàn)報(bào)道主要針對(duì)達(dá)原飲中黃芩苷、芍藥苷、芒果苷等有效成分[9-10]，為了有效控制達(dá)原飲的質(zhì)量，本研究采用UPLC法測(cè)定達(dá)原飲臣藥厚樸中和厚樸酚與厚樸酚的含量。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

LC-2040C 3D Plus高效液相色譜儀(日本島津公司)；色譜甲醇、色譜乙腈(美國Tedia公司)。和厚樸酚、厚樸酚對(duì)照品(批號(hào)：20200918)均購自北京北方偉業(yè)計(jì)量技術(shù)研究院，純度大于98%。

達(dá)原飲方劑中7種中藥材均購于民生醫(yī)藥集團(tuán)有限責(zé)任公司，經(jīng)我校中藥教研室梁玉勇教授鑒定為正品，具體見表1。

表1 中藥材信息表

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 提取工藝優(yōu)化

以乙醇為提取溶劑，采用正交試驗(yàn)優(yōu)選達(dá)原飲方劑中藥材提取工藝。根據(jù)前期單因素考察基礎(chǔ)上[11]，按照正交表L9(34)對(duì)提取工藝進(jìn)行優(yōu)選，因素與水平見表2。

表2 因素與水平表

1.2.2 色譜條件

Shim-pack GIST C18色譜柱(50 mm ×2.1 mm，2 μm)，流動(dòng)相：0.1%磷酸水溶液(A)-乙腈(B)(50：50，V/V)等度洗脫，檢測(cè)波長230 nm，體積流速為0.3 ml/min，進(jìn)樣量1 μl；對(duì)照品、達(dá)原飲樣品的色譜圖見圖1。

圖1 混合對(duì)照品溶液(A)和樣品溶液(B)的色譜圖

1.2.3 線性關(guān)系考察

精密吸取不同濃度的混合對(duì)照品溶液，按色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣濃度為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果見表3。

表3 線性關(guān)系考察結(jié)果

1.2.4 溶液的制備

1.2.4.1 對(duì)照品溶液的制備

精密稱定和厚樸酚540 μg、厚樸酚 560 μg，用80%乙醇溶解并定容至10 ml量瓶中，得混合對(duì)照品溶液。

1.2.4.2 供試品溶液的制備

稱取達(dá)原飲中7種中藥材粗粉(檳榔6 g、厚樸3 g、草果仁1.5 g、甘草1.5 g、白芍3 g、黃芩3 g、知母3 g)，加入20倍量80%乙醇加熱回流提取3次，每次1 h，將濾液合并，定容，搖勻，即得。

1.2.5 方法學(xué)考察

依據(jù)《中國藥典》通則9101分析方法驗(yàn)證指導(dǎo)原則中方法進(jìn)行檢測(cè)。

2 結(jié)果

2.1 正交試驗(yàn)結(jié)果與分析

由表4結(jié)果可知，極差影響最大的D因素，最小的是B因素，A因素與C因素中K2和K3、均相差不到5%，考慮到提取成本和提取時(shí)間，最終優(yōu)化出達(dá)原飲藥材提取工藝為A2B3C2D3，即處方量藥材加入20倍量80%乙醇回流提取3次，每次1 h。

表4 正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)及結(jié)果

2.2 驗(yàn)證試驗(yàn)

準(zhǔn)確稱定達(dá)原飲處方量藥材3份，按優(yōu)選出的最佳提取工藝進(jìn)行驗(yàn)證，結(jié)果見表5。

表5 驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果

由表5驗(yàn)證試驗(yàn)結(jié)果表明，和厚樸酚含量均值為0.94 %，厚樸酚含量均值為2.02 %，2種有效成分的RSD值均小于3 %，證明該提取工藝穩(wěn)定可行，重現(xiàn)性好。

2.3 方法學(xué)考察

結(jié)果顯示2種有效成分精密度、重復(fù)性、穩(wěn)定性RSD均小于3 %，平均加樣回收率分別為102.4 %和98.8 %，RSD值分別為2.36 %和1.78 %，符合藥典要求，見表6。

表6 準(zhǔn)確度試驗(yàn)結(jié)果

3 討論與結(jié)論

達(dá)原飲是《瘟疫論》中的治疫名方，治療發(fā)熱、流行性感冒已有確證療效，尤其在新型冠狀病毒肺炎早期患者出現(xiàn)的發(fā)熱，并伴有食欲差、甚至惡心、大便稀溏等消化道癥狀具有很好的療效[12]。厚樸作為方中的臣藥，具有行氣消積、燥濕除滿的功效，發(fā)揮著非常重要的作用。厚樸的主要的活性成分是和厚樸酚與厚樸酚[13]，也是作為《中國藥典》中作為指控成分[14]。本實(shí)驗(yàn)通過UPLC法對(duì)其2種成分進(jìn)行含量測(cè)定，可有效控制達(dá)原飲的質(zhì)量。

UPLC較HPLC法檢測(cè)速度快，靈敏度高。傳統(tǒng)HPLC測(cè)定厚樸中有效成分需要30 min 左右完成[13]，采用 UPLC法測(cè)定，在 6 min內(nèi)完成對(duì)達(dá)原飲中和厚樸酚和厚樸酚的含量測(cè)定。

在預(yù)實(shí)驗(yàn)中考察了三種提取方法，通過對(duì)達(dá)原飲中和厚樸酚與厚樸酚的含量，確定最佳提取方法是回流提取法，該方法操作簡單，工藝可行，并通過單因素及正交試驗(yàn)優(yōu)選出達(dá)原飲中和厚樸酚與厚樸酚的最佳提取工藝。