郝佳夢(mèng)，常麗萍，王 璐，劉 煥，陳 檬，侯 斌, 4，周璐恒，侯云龍, *

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證探究芪藶強(qiáng)心膠囊治療射血分?jǐn)?shù)保留型心衰的作用機(jī)制

郝佳夢(mèng)1, 2，常麗萍4, 5，王 璐3, 5，劉 煥3，陳 檬3, 5，侯 斌3, 4，周璐恒3，侯云龍1, 2, 3*

1. 河北醫(yī)科大學(xué)，河北 石家莊 050017 2. 河北以嶺醫(yī)院 國(guó)家中醫(yī)藥管理局重點(diǎn)研究室（心腦血管絡(luò)病），河北 石家莊 050023 3. 石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，河北 石家莊 050023 4. 絡(luò)病研究與創(chuàng)新中藥國(guó)家重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050023 5. 河北省絡(luò)病重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 石家莊 050023

基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)及實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證探討芪藶強(qiáng)心膠囊治療射血分?jǐn)?shù)保留型心衰（heart failure with preserved ejection fraction，HFpEF）的作用機(jī)制。將44個(gè)明確鑒定的芪藶強(qiáng)心膠囊體內(nèi)代謝物檢識(shí)有效成分，利用Swisstargetprediction、pharmmapper平臺(tái)預(yù)測(cè)化合物靶點(diǎn)，OMIM、DisGenet、GenCard數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索HFpEF疾病靶點(diǎn)；取交集靶點(diǎn)，利用String數(shù)據(jù)庫(kù)和Cytoscape 3.7.2軟件進(jìn)行蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）和拓?fù)浞治?；Metescape平臺(tái)對(duì)共同靶點(diǎn)進(jìn)行基因本體（gene ontology，GO）功能富集分析及京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析。構(gòu)建醋酸脫氧皮質(zhì)酮（deoxycorticosterone acetate，DOCA）鹽敏感型HFpEF大鼠模型，給予沙庫(kù)巴曲纈沙坦或芪藶強(qiáng)心膠囊進(jìn)行干預(yù)，給藥8周后，利用小動(dòng)物超聲成像系統(tǒng)、ELISA、免疫熒光、Western blotting、qRT-PCR方法進(jìn)行藥效學(xué)評(píng)估和環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cyclic guanosinc monophosphate，cGMP）-蛋白激酶G1（protein kinase G1，PKG1）信號(hào)通路相關(guān)靶點(diǎn)驗(yàn)證。芪藶強(qiáng)心膠囊有效成分和HFpEF分別篩選出38個(gè)相同作用靶點(diǎn)；GO功能及KEGG通路富集分析得出其在血液循環(huán)、循環(huán)系統(tǒng)、心臟收縮等生物過(guò)程，膜筏、軸突、細(xì)胞質(zhì)區(qū)等細(xì)胞成分，α-葡萄糖苷酶活性、內(nèi)肽酶活性、水解酶活性等分子功能上起作用，涉及cGMP-PKG信號(hào)通路、腎素分泌、鈣信號(hào)通路等。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí)芪藶強(qiáng)心能夠提高HFpEF大鼠射血分?jǐn)?shù)，降低室壁肥厚程度，縮短等容舒張時(shí)間（isovolumic relaxation time，IVRT），提升左室舒張期充盈速度比值（＜0.05）；提高血清一氧化氮（nitric oxide，NO）、cGMP水平（＜0.05）；增強(qiáng)心肌組織內(nèi)皮型一氧化氮合成酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）熒光表達(dá)（＜0.05、0.01）；增加eNOS、PKG1、心肌肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶（sarco/endoplasmic reticulum Ca2+-ATPase，SERCA）、可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶α（soluble guanylate cyclase α，sGCα）蛋白表達(dá)水平（＜0.05、0.01），降低cGMP特異性磷酸二酯酶5A（cGMP-specific phosphodiesterase 5A，PDE5A）蛋白表達(dá)水平（＜0.05）；減少心肌組織B型腦鈉肽（B-type brain natriuretic peptide，）、β-肌球蛋白重鏈（myosin heavy chain β，）的mRNA表達(dá)（＜0.05）。芪藶強(qiáng)心膠囊可通過(guò)成分-多靶點(diǎn)-多環(huán)節(jié)發(fā)揮HFpEF的治療作用，其機(jī)制與調(diào)節(jié)cGMP-PKG信號(hào)通路有關(guān)。

網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)；芪藶強(qiáng)心膠囊；射血分?jǐn)?shù)保留型心衰；內(nèi)皮功能；脈絡(luò)學(xué)說(shuō)；環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷-蛋白激酶G1通路

射血分?jǐn)?shù)保留型心衰（heart failure with preserved ejection fraction，HFpEF）是指左室射血分?jǐn)?shù)≥50%的心力衰竭，特征是左室等容舒張延長(zhǎng)、左室僵硬度增加、左室舒張末壓增加和左室充盈緩慢[1]。HFpEF是一個(gè)具有高發(fā)病率和高死亡率的緊迫臨床事件[2]，已經(jīng)成為一個(gè)主要的公共健康問(wèn)題，其患病率現(xiàn)在已經(jīng)超過(guò)了射血分?jǐn)?shù)降低型心衰（heart failure with reduced ejection fraction，HFrEF）[3]。HFpEF患者的預(yù)后較差[4]，到目前為止，沒(méi)有任何治療顯示可以有效降低其發(fā)病率或死亡率[5]，成為國(guó)際醫(yī)學(xué)研究的難點(diǎn)和熱點(diǎn)。

內(nèi)皮型一氧化氮合酶（endothelial nitric oxide synthase，eNOS）/一氧化氮（nitric oxide，NO）/環(huán)磷酸鳥(niǎo)苷（cyclic guanosinc monophosphate，cGMP）/蛋白激酶G1（protein kinase G1，PKG1）通路在防止心肌損傷、心室重塑和心腎綜合征方面起著重要作用[6]，該通路的損傷是HFpEF的病理生理學(xué)基礎(chǔ)。cGMP及其主要靶激酶PKG是公認(rèn)的心臟功能和慢性應(yīng)激反應(yīng)的調(diào)節(jié)劑，介導(dǎo)NO和利鈉肽的生理功能，在心血管系統(tǒng)的維持中發(fā)揮重要功能：它們的增強(qiáng)能夠引起心肌制動(dòng)，減少不適應(yīng)性肥大，增強(qiáng)細(xì)胞存活信號(hào)和線粒體功能，防止缺血/再灌注損傷，并減弱兒茶酚胺的刺激作用[7-8]。激活cGMP/PKG信號(hào)通路已成為治療心力衰竭的有效治療策略[9]，可能成為HFpEF治療的一個(gè)新靶點(diǎn)[10]。

中醫(yī)脈絡(luò)學(xué)說(shuō)理論指導(dǎo)下研制的芪藶強(qiáng)心膠囊是治療慢性心衰的代表中成藥，循證醫(yī)學(xué)研究證實(shí)其治療慢性心力衰竭的安全性及有效性[11-12]。前期臨床研究報(bào)道芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)HFpEF患者臨床癥狀和中醫(yī)證候評(píng)分、明尼蘇達(dá)心力衰竭生活質(zhì)量量表（MLHFQ）評(píng)分、6 min步行試驗(yàn)（6WMT），E/E’值、左房容積指數(shù)（LAVI）、左室舒張期充盈速度比值（E/A）均有明顯改善，提高患者的生活質(zhì)量[13]。芪藶強(qiáng)心膠囊是首個(gè)進(jìn)入《舒張性心力衰竭診斷和治療專家共識(shí)》的中成藥[14]，然而其治療HFpEF的基礎(chǔ)研究及機(jī)制探討尚未完全開(kāi)展。本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法[15]對(duì)芪藶強(qiáng)心治療HFpEF的關(guān)鍵靶點(diǎn)和信號(hào)通路預(yù)測(cè)，采用醋酸脫氧皮質(zhì)酮（deoxycorticosterone acetate，DOCA）-鹽敏感性高血壓大鼠建立HFpEF模型，通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測(cè)結(jié)果，以探索芪藶強(qiáng)心膠囊治療HFpEF可能的作用機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SPF級(jí)雄性SD大鼠50只，6周齡，體質(zhì)量（200±10）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，合格證號(hào)SCXK2016-0006。飼養(yǎng)于屏障環(huán)境內(nèi)，12 h明暗循環(huán)光照，濕度（50±10）%，溫度（23±2）℃，自由進(jìn)食飲水，適應(yīng)性喂養(yǎng)1周。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)由河北以嶺醫(yī)藥研究院動(dòng)物倫理委員會(huì)負(fù)責(zé)批準(zhǔn)（批準(zhǔn)號(hào)2021024）。

1.2 藥品與試劑

芪藶強(qiáng)心膠囊（批號(hào)S-130901）購(gòu)自石家莊以嶺藥業(yè)股份有限公司，利用UPLC-Q-TOF/MSE技術(shù)[16]從芪藶強(qiáng)心膠囊中鑒定了40個(gè)化合物，其中黃酮類化合物3種，人參皂苷類化合物19種，C21甾糖苷類化合物7種，黃芪皂苷類化合物7種，以及丹酚酸類2種，二萜醌類2種；沙庫(kù)巴曲纈沙坦鈉片（批號(hào)J20190001，50 mg/片）購(gòu)自北京諾華制藥有限公司；醋酸去氧皮質(zhì)酮（批號(hào)D129628）、氯化鈉（批號(hào)WXBD3635V）購(gòu)自上海阿拉丁生化科技股份有限公司；NO測(cè)定試劑盒（A013-2-1）購(gòu)自南京建成；cGMP ELISA試劑盒（E-EL-0083c）購(gòu)自Elabscience；eNOS、CD31、cGMP特異性磷酸二酯酶5A（cGMP-specific phosphodiesterase 5A，PDE5A）兔抗（批號(hào)分別為GB12086、GB11063-2、GB111522）購(gòu)自武漢賽維爾生物科技有限公司；可溶性鳥(niǎo)苷酸環(huán)化酶α（soluble guanylate cyclase α，sGCα）抗體（批號(hào)bs-13544R）購(gòu)自Bioss公司；肌漿網(wǎng)Ca2+-ATP酶（sarco/endoplasmic reticulum calcium ATPase，SERCA2）抗體（批號(hào)ab150435）、甘油醛-3-磷酸脫氫酶（glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase，GAPDH）抗體（批號(hào)ab181602）、羊抗兔二抗IgG-H&L Alexa Fluor?488（批號(hào)ab150077）、羊抗兔二抗IgG-H&L Alexa Fluor?594（批號(hào)ab150080）、羊抗兔二抗IgG-H&L IRDye?800CW（批號(hào)ab216773）、羊抗兔二抗IgG-H&L IRDye?680RD（批號(hào)ab216777）購(gòu)自英國(guó)Abcam公司；總RNA提取試劑盒、反轉(zhuǎn)錄試劑盒購(gòu)自日本Takara公司。

1.3 儀器

Vevo 3100LT型小動(dòng)物超聲（加拿大FUJIFILM公司）；RM2235型組織切片染色機(jī)（日本Sakura公司）；SynergyH4型多功能酶標(biāo)儀（美國(guó)Bio Tek公司）；Trans-Blot SD型半干電轉(zhuǎn)膜儀、C1000型反轉(zhuǎn)錄熱循環(huán)儀（美國(guó)Bio-Rad公司）；Oddessy型雙色紅外激光掃膜儀（美國(guó)LI-COR公司）；LSM710型激光共聚焦顯微鏡（德國(guó)ZEISS公司）；7900HT型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀（美國(guó)ABI公司）。

2 方法

2.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)預(yù)測(cè)芪藶強(qiáng)心膠囊治療HFpEF的作用機(jī)制

2.1.1 芪藶強(qiáng)心膠囊主要活性成分靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 本課題組前期對(duì)芪藶強(qiáng)心膠囊11味藥材通過(guò)自建化合物數(shù)據(jù)庫(kù)完成對(duì)其化學(xué)成分的全面檢識(shí)，共發(fā)現(xiàn)包括黃酮、生物堿、皂苷等在內(nèi)的多種化合物，通過(guò)大鼠體內(nèi)代謝物檢識(shí)，其中44個(gè)化合物利用對(duì)照品進(jìn)行了確認(rèn)[17]。將這44個(gè)活性成分，分別輸入PubChem平臺(tái)（https://pubchem.ncbi.nlm.nih.gov）保存化合物的mol2結(jié)構(gòu)，未查詢到的根據(jù)文獻(xiàn)檢索確定其化合物結(jié)構(gòu)，在Swisstargetprediction（http://www.swisstargetprediction.ch）和Pharmmapper（http://www.lilab-ecust.cn/pharmmapper）平臺(tái)中上傳化合物結(jié)構(gòu)圖，搜索的輸入格式為Homo sapiens[organism]，得到相應(yīng)預(yù)測(cè)靶點(diǎn)。

2.1.2 HFpEF疾病相關(guān)靶點(diǎn)信息 在OMIM（https://omim.org/）、DisGeNET（https://www. disgenet.org/）、GenCard（https://www.genecards.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索“射血分?jǐn)?shù)保留型心衰”“HFpEF”“射血分?jǐn)?shù)保留型心衰”“舒張性心衰”的疾病相關(guān)靶點(diǎn)，去除重復(fù)值。應(yīng)用R軟件將得到的疾病靶點(diǎn)和篩選出的藥物活性成分及潛在靶點(diǎn)進(jìn)行比較，得到二者共同靶點(diǎn)并制作韋恩圖，得到藥物和疾病共同靶點(diǎn)。

2.1.3 芪藶強(qiáng)心膠囊-HFpEF蛋白質(zhì)-蛋白質(zhì)相互作用（protein-protein interaction，PPI）網(wǎng)絡(luò)的構(gòu)建 在String（https://string-db.org/）數(shù)據(jù)庫(kù)導(dǎo)入共同基因數(shù)據(jù)，選擇“homo sapiens”物種，將medium confidence（0.7）設(shè)置為最低相互作用分?jǐn)?shù)，其余參數(shù)默認(rèn)，導(dǎo)出PPI網(wǎng)絡(luò)圖和TSV文件。利用Cytoscape 3.7.2軟件構(gòu)建PPI拓?fù)渚W(wǎng)絡(luò)。

2.1.4 基因本體（gene ontology，GO）功能富集分析及京都基因與基因組百科全書(shū)（Kyoto encyclopedia of genes and genomes，KEGG）通路富集分析 運(yùn)用Metescape（https://metascape.org）平臺(tái)對(duì)38個(gè)活性成分和疾病的共同靶點(diǎn)進(jìn)行GO功能和KEGG通路富集分析，分析類型為H.sapiens（38），設(shè)置＜0.01，取排名前10和前20的結(jié)果分別繪制GO柱狀圖和KEGG氣泡通路圖，運(yùn)用R軟件進(jìn)行結(jié)果可視化。

2.2 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

2.2.1 造模、分組及給藥 HFpEF采用DOCA-鹽敏感大鼠模型：大鼠麻醉后右側(cè)臥位固定，消毒后沿脊柱左側(cè)十二肋游離緣做2 cm縱形切口，手術(shù)縫合線結(jié)扎整個(gè)腎動(dòng)靜脈及輸尿管，剪去腎臟，ip 10 000 U青霉素以抗感染。生命體征穩(wěn)定后放回鼠籠中飼養(yǎng)，1%鹽水飲水，同時(shí)sc DOCA（25 mg/kg，每4天1次），自由飲食。4周后使用小動(dòng)物超聲儀檢測(cè)大鼠心功能，射血分?jǐn)?shù)（ejection fractions，EF）大于50%且E/A值降低視為HFpEF模型建立成功。

芪藶強(qiáng)心膠囊劑量選擇參考國(guó)家973計(jì)劃“基于微血管病變性疾病的營(yíng)衛(wèi)‘由絡(luò)以通、交會(huì)生化’研究”實(shí)驗(yàn)用藥推薦劑量，其中0.5 g/kg劑量為臨床等效劑量，本研究選擇該劑量為低劑量組，4倍臨床劑量2 g/kg為高劑量組，以觀察量效關(guān)系。沙庫(kù)巴曲纈沙坦劑量參考藥品說(shuō)明書(shū)，換算為大鼠每日給藥劑量20 mg/kg進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。

設(shè)10只未行手術(shù)大鼠為對(duì)照組，選擇40只成模大鼠分為模型組、沙庫(kù)巴曲纈沙坦（20 mg/kg）組和芪藶強(qiáng)心膠囊低、高（0.5、1.0 g/kg）劑量組，每組10只，各給藥組ig相應(yīng)藥物，對(duì)照組和模型組ig等體積羧甲基纖維素鈉，1次/d，連續(xù)8周。

2.2.2 超聲心動(dòng)圖檢測(cè)各組大鼠心功能 大鼠在1%異氟醚氧氣混合物中麻醉，在胸骨旁長(zhǎng)軸切面獲得標(biāo)準(zhǔn)M型成像，獲得獲得心率（heart rate，HR）、EF、左心室前/后壁厚度（left ventricular anterior/posterior wall thickness，LVAW/LVPW）、左室舒張末期內(nèi)徑/收縮末期內(nèi)徑（end-diastolic left ventricular internal dimension/end-systolic left ventricular internal dimension，LVIDd/LVIDs）。四腔心切面的二尖瓣多普勒血流圖像中獲得等容舒張時(shí)間（isovolumic relaxation time，IVRT）、等容收縮時(shí)間（isovolumic contraction time，LVCT）、被動(dòng)左室充盈峰值速度（E）和心房收縮期峰值流速（A）。M型和多普勒研究的掃描速度為100 mm/s，心率保持在250～350次/min。

2.2.3 血清NO、cGMP水平的檢測(cè) 在12周實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)，從腹主動(dòng)脈采集血樣，輕輕翻轉(zhuǎn)10次以上置于在冰上。1800×離心10 min，獲得上層血清，轉(zhuǎn)移至1.5 mL離心管中；再以13 000×離心2 min，取血清，按試劑盒操作說(shuō)明檢測(cè)NO、cGMP含量。

2.2.4 免疫熒光染色觀測(cè)心肌組織eNOS、CD31蛋白表達(dá)情況 動(dòng)物處死后，將心臟固定在10%福爾馬林溶液，乙醇脫水后進(jìn)行石蠟包埋。組織切片（4 μm）平行于根尖-基底軸進(jìn)行。脫蠟和復(fù)水后，免疫熒光法測(cè)量eNOS和CD31評(píng)估心肌細(xì)胞內(nèi)皮功能及密度。盲法評(píng)估隨機(jī)選擇的5個(gè)視野，并選擇1個(gè)代表性圖像。

2.2.5 Western blotting檢測(cè)心肌組織eNOS、PKG1、PDE5A、SERCA、sGCα蛋白表達(dá) 各組大鼠心臟組織加入裂解液，提取蛋白并進(jìn)行BCA定量。蛋白樣品經(jīng)十二烷基硫酸鈉-聚丙烯酰胺凝膠電泳，轉(zhuǎn)至PVDF膜，用5%牛血清白蛋白封閉1 h，加入一抗，4 ℃孵育過(guò)夜，洗滌后孵育二抗結(jié)合。用Bio-Rad校準(zhǔn)密度計(jì)掃描薄膜，將免疫印跡條帶的灰度值強(qiáng)度與內(nèi)參對(duì)照。

2.2.6 qRT-PCR檢測(cè)心肌組織B型腦鈉肽（B-type brain natriuretic peptide，）和β-肌球蛋白重鏈（β-myosin heavy chain，）mRNA表達(dá) 參照RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)獲得大鼠心臟組織中總RNA并合成cDNA，擴(kuò)增后完成qRT-PCR分析。引物序列：上游引物5’-ACCTGGGCAAGTCCAACAAC-3’，下游引物5’-CGGACACGGTCTGAAAGGAT；上游引物5’-AGCCAGTCTCTCCAGAACAATCCA-3’，下游引物5’-CCGGTCTATCTTCTGCCCAAA-3’；上游引物5’-CTGGAGAAACCTGCCAAGTATG-3’，下游引物5’-GGTGGAAGAATGGGAGTTGCT-3’。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

3 結(jié)果

3.1 網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)分析

3.1.1 芪藶強(qiáng)心膠囊治療HFpEF的網(wǎng)絡(luò)分析結(jié)果及靶點(diǎn)預(yù)測(cè) 44個(gè)活性成分（表1）在Swisstargetprediction和Pharmmapper平臺(tái)上共得到（去除重復(fù)值）530個(gè)潛在作用靶點(diǎn)；在OMIM、DisGenet、GenCard數(shù)據(jù)庫(kù)中檢索“射血分?jǐn)?shù)保留型心衰”“HFpEF”“舒張性心衰”，3者取并集，去除重復(fù)值共得到672個(gè)作用靶點(diǎn)。利用Venn圖在線平臺(tái)得到藥物和疾病共同作用靶點(diǎn)38個(gè)，見(jiàn)圖1。

將38個(gè)共同靶點(diǎn)輸入STRING 11.0在線平臺(tái)得到的藥物-疾病靶點(diǎn)PPI網(wǎng)絡(luò)，共得到51條邊，平均節(jié)點(diǎn)度2.68。通過(guò)Cytoscape 3.7.2內(nèi)置Network Analyzer插件進(jìn)行PPI網(wǎng)絡(luò)拓?fù)浞治?。其中，發(fā)現(xiàn)網(wǎng)絡(luò)中較為重要的靶基因與G蛋白偶聯(lián)受體、內(nèi)皮素受體、β腎上腺能受體相關(guān)。

表1 芪藶強(qiáng)心膠囊中明確鑒定的活性成分

Table 1 Active components identified in Qili Qiangxin Capsule

活性成分CAS號(hào)活性成分CAS號(hào) 丹參酮IIA568-72-9 杠柳毒苷13137-64-9 talatizamine20501-56-8川陳皮素478-01-3 宋果靈509-24-0 尼奧寧466-26-2 丹參素鈉67920-52-9柚皮苷10236-47-2 sinapine thiocyanate7431-77-8新烏頭堿2752-64-9 丹酚酸B115939-25-8丹酚酸A96574-01-5 isorhamnetin-3-O-β-D-glucopyranoside5041-82-7異鼠李素-3,7-二-O-β-D-葡萄糖苷6758-51-6 蘆丁153-18-4 hesperidin520-26-3 迷迭香酸20283-92-5次烏頭堿6900-87-4 quercetin-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-β-gentiobioside1309067-39-7kaempferol-3-O-β-D-glucopyranosyl-7-O-β-gentiobioside16290-07-6 quercetin-3-O-β-D-glucopyranoside491-50-9 毛蕊異黃酮-7-O-β-D-葡萄糖苷20633-67-4 人參皂苷Re51542-56-4 毛蕊異黃酮20575-57-9 人參皂苷Rd52705-93-8 苯甲酰烏頭原堿63238-67-5 人參皂苷Rc11021-14-0 黃芪甲苷IV84687-43-4 人參皂苷Rb211021-13-9 黃芪甲苷II84676-89-1 人參皂苷Rb141753-43-9 黃芪甲苷I84680-75-1 附子靈80665-72-1 澤瀉醇F155521-45-2 刺芒柄花素485-72-3 澤瀉醇B18649-93-9 隱丹參酮35825-57-1澤瀉醇B 23-乙酸酯26575-95-1 肉桂酸621-82-9 澤瀉醇A19885-10-0 chlorogenic acid1049703-62-9 20(S)-人參皂苷Rg267400-17-3 人參皂苷Rg122427-39-020(S)-人參皂苷F262025-49-4

圖1 芪藶強(qiáng)心膠囊與HFpEF靶點(diǎn)Venn圖

3.1.2 GO功能及KEGG通路富集分析 借助Metescape分析平臺(tái)，共得到芪藶強(qiáng)心膠囊作用于HFpEF治療的499個(gè)生物過(guò)程，30個(gè)細(xì)胞成分，31個(gè)分子功能。篩選＜0.01排名前10的GO注釋結(jié)果做柱形圖展示如圖2。根據(jù)分析結(jié)果，芪藶強(qiáng)心膠囊可能參與調(diào)控了血液循環(huán)、循環(huán)系統(tǒng)、心臟收縮等生物過(guò)程；在膜筏、軸突、細(xì)胞質(zhì)區(qū)等細(xì)胞組分中起作用；激活了α-葡萄糖苷酶活性、內(nèi)肽酶活性、水解酶活性等分子功能。

KEGG共富集到52條通路，按照＜0.01，富集值≥1.5篩選前20條通路結(jié)果如圖2所示，芪藶強(qiáng)心膠囊治療HFpEF的潛在途徑可能為cGMP-PKG信號(hào)通路、心肌細(xì)胞中的腎上腺素能信號(hào)傳導(dǎo)、神經(jīng)活性配體受體相互作用、cAMP信號(hào)通路、腎素分泌、鈣信號(hào)通路等。其中富集度最高的cGMP-PKG信號(hào)通路是HFpEF治療的重要靶點(diǎn)[18]，本研究選用該通路進(jìn)行體內(nèi)實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證探討芪藶強(qiáng)心膠囊治療HFpEF的作用機(jī)制。

3.1.3 網(wǎng)絡(luò)可視化分析 應(yīng)用Cytoscape 3.7.2軟件對(duì)QLQX有效成分，疾病-藥物共有的38個(gè)潛在靶基因、生物過(guò)程、KEGG通路進(jìn)行可視化網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，如圖3所示。該網(wǎng)絡(luò)說(shuō)明芪藶強(qiáng)心膠囊通過(guò)多組分、多靶點(diǎn)、多環(huán)節(jié)發(fā)揮對(duì)HFpEF的治療作用。

3.2 實(shí)驗(yàn)驗(yàn)證

3.2.1 各組大鼠一般狀態(tài)變化情況 對(duì)照組大鼠一般狀態(tài)良好，毛色光澤、行動(dòng)敏捷、飲食及飲水量正常，尿量正常；模型組精神狀態(tài)欠佳，毛色粗糙，無(wú)光澤，行動(dòng)遲緩，飲水量增多，尿量增多；各給藥組大鼠精神狀態(tài)及一般狀況有所改善。如表2所示，經(jīng)藥物干預(yù)8周后，與對(duì)照組相比，模型組心臟質(zhì)量和心臟指數(shù)均明顯提升（＜0.01）；與模型組相比，各給藥組心臟質(zhì)量和心臟指數(shù)均顯著降低（＜0.01）；各組大鼠體質(zhì)量無(wú)明顯差異。

菱形節(jié)點(diǎn)為活性成分，圓形節(jié)點(diǎn)為作用靶點(diǎn)，四邊形節(jié)點(diǎn)為生物過(guò)程，三角形節(jié)點(diǎn)為信號(hào)通路

表2 各組大鼠體質(zhì)量和心臟指數(shù)比較(, n = 10)

Table 2 Comparison of body weight and cardiac index of rats in each group (, n = 10)

組別劑量/(g·kg?1)體質(zhì)量/g心臟質(zhì)量/g心臟指數(shù) 對(duì)照—508.00±14.901.44±0.122.78±0.26 模型—509.86±53.491.86±0.37##3.64±0.49## 沙庫(kù)巴曲纈沙坦0.02494.69±42.431.54±0.20*3.11±0.32** 芪藶強(qiáng)心膠囊0.5496.42±62.451.53±0.30**3.07±0.39** 2.0496.73±66.451.52±0.28**3.05±0.27**

與對(duì)照組比較：#＜0.05##＜0.01；與模型組比較：*＜0.05**＜0.01，下表同

#< 0.05##< 0.01control group;*< 0.05**< 0.01model group, same as below tables

3.2.2 芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)DOCA鹽敏感型HFpEF大鼠心功能影響 如圖4和表3所示，與對(duì)照組比較，模型組大鼠EF顯著降低（＜0.05），LVAW、LVPW顯著升高（＜0.05），提示心室壁肥厚，心功能下降；IVRT時(shí)間延長(zhǎng)、E/A值下降（＜0.05），提示舒張功能障礙，EF尚處于正常范圍，IVCT無(wú)明顯差異，表明收縮功能未明顯損傷。沙庫(kù)巴曲纈沙坦組EF較對(duì)照組明顯降低（＜0.05），也處于正常范圍；LVAW較模型組降低（＜0.05），E/A比值顯著提升（＜0.01）；各組LVIDs、LVIDd無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異，提示心室未增大。芪藶強(qiáng)心膠囊低劑量組EF、E/A值較模型組升高（＜0.05），未能降低室壁厚度。芪藶強(qiáng)心膠囊高劑量組較模型組明顯提高EF，IVRT時(shí)間縮短，E/A值提升（＜0.05），提示心室舒張功能明顯恢復(fù)，同時(shí)LVAW、LVPW降低（＜0.05），減輕了室壁肥厚程度。

3.2.3 芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)DOCA鹽敏感型HFpEF大鼠血清NO、cGMP水平的影響 如圖5所示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠血清NO和cGMP水平均顯著下降（＜0.05、0.01）；與模型組相比，沙庫(kù)巴曲纈沙坦組血清NO水平顯著升高（＜0.05），芪藶強(qiáng)心膠囊低、高劑量組血清NO和cGMP水平均顯著升高（＜0.05）。

圖4 各組大鼠超聲心動(dòng)圖典型圖像對(duì)比

表3 各組大鼠超聲心動(dòng)圖參數(shù)比較(, n = 10)

Table 3 Comparison of echocardiographic parameters of rats in each group (, n = 10)

組別劑量/(g·kg?1)HREF/%LVAW/mmLVPW/mmIVRT/msIVCT/msE/ALVIDs/mmLVIDd/mm 對(duì)照—366.57±25.0578.68±9.733.19±0.603.39±0.7318.17±3.6918.39±6.311.15±0.224.74±0.618.49±0.64 模型—359.31±15.9767.28±6.04#3.66±0.44#3.81±0.50#20.86±2.98#18.49±3.841.02±0.26#4.68±0.538.21±0.67 沙庫(kù)巴曲纈沙坦0.02350.11±33.3168.86±2.983.32±0.31*3.63±0.3219.44±2.8719.69±3.081.18±0.15**4.66±0.578.32±0.49 芪藶強(qiáng)心膠囊0.5355.69±15.7872.34±5.36*3.52±0.373.63±0.3318.97±2.9719.55±4.031.15±0.18*4.70±0.778.55±0.79 2.0360.55±30.6273.85±6.91*3.39±0.28*3.60±0.39*18.23±2.14*19.05±4.351.10±0.17*4.85±0.668.56±0.53

與對(duì)照組比較：#P＜0.05 ##P＜0.01；與模型組比較：*P＜0.05 **P＜0.01，下圖同

3.2.4 大鼠心肌組織eNOS和CD31免疫熒光染色 內(nèi)皮功能障礙被認(rèn)為是HFpEF病理生理學(xué)的中心機(jī)制[19]。如圖6所示，綠色熒光為eNOS，紅色為CD31，二者均為內(nèi)皮細(xì)胞標(biāo)志物，共表達(dá)處呈現(xiàn)黃色。如圖7所示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠心肌組織血管周?chē)鷈NOS熒光表達(dá)量顯著降低（＜0.01），而各給藥組均能明顯恢復(fù)大鼠心肌組織內(nèi)皮功能（＜0.05），芪藶強(qiáng)心膠囊高劑量組效果更為明顯（＜0.01）。

圖6 各組大鼠心肌組織eNOS(綠色)、CD31 (紅色)、DAPI (藍(lán)色) 定位的免疫熒光圖像(×400)

圖7 各組大鼠心肌組織eNOS熒光強(qiáng)度比較

3.2.5 芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)心肌組織eNOS、PKG1、PDE5A、SERCA和sGCα蛋白表達(dá)的影響 如圖8和表4所示，與對(duì)照組相比，模型組大鼠心肌組織eNOS、PKG1和SERCA蛋白表達(dá)水平均顯著降低（＜0.05、0.01），PDE5A蛋白表達(dá)水平顯著升高（＜0.05），sGCα蛋白表達(dá)水平降低但無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異；與模型組相比，沙庫(kù)巴曲纈沙坦組eNOS、SERCA、sGCα蛋白表達(dá)水平均顯著升高（＜0.05），PDE5A蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05）；芪藶強(qiáng)心膠囊低劑量組eNOS、PKG1、sGCα蛋白表達(dá)水平均顯著升高（＜0.05、0.01），PDE5A蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05）；芪藶強(qiáng)心膠囊高劑量組eNOS、PKG1、SERCA和sGCα蛋白表達(dá)水平均顯著升高（＜0.05、0.01），PDE5A蛋白表達(dá)水平顯著降低（＜0.05）。

圖8 各組大鼠心肌組織eNOS、PKG1、PDE5A、SERCA和sGCα蛋白的WB圖

表4 各組大鼠心肌組織eNOS、PKG1、PDE5A、SERCA和sGCα的蛋白表達(dá)(, n = 3)

Table 4 eNOS,PKG1,PDE5A,SERCA and sGCα proteins in myocardium of rats in each group(, n = 3)

組別劑量/(g·kg?1)蛋白相對(duì)表達(dá)量 eNOSPKG1PDE5ASERCAsGCα 對(duì)照—1.00±0.001.00±0.001.00±0.001.00±0.001.00±0.00 模型—0.88±0.08#0.77±0.27#1.60±0.41#0.61±0.05##0.88±0.07 沙庫(kù)巴曲纈沙坦0.021.32±0.17*0.99±0.231.25±0.29*0.94±0.25*1.31±0.59* 芪藶強(qiáng)心膠囊0.51.35±0.09*1.56±0.30**1.24±0.40*0.76±0.111.53±0.63* 2.01.39±0.30**1.44±0.19*1.30±0.17*1.02±0.21**1.53±0.46*

3.2.6 芪藶強(qiáng)心膠囊對(duì)心肌組織和mRNA表達(dá)的影響 如圖9所示，與對(duì)照組相比，模型組心肌組織和mRNA表達(dá)水平均顯著升高（＜0.05、0.01）；與模型組相比，各給藥組心肌組織和mRNA表達(dá)水平均顯著降低（＜0.05）。

圖9 各組大鼠心肌組織BNP和β-MHC mRNA表達(dá)(, n = 4)

4 討論

HFpEF與左室舒張功能障礙密切相關(guān)，舒張功能障礙可由肥厚和間質(zhì)纖維化導(dǎo)致的左室僵硬度增加以及鈣循環(huán)受損導(dǎo)致的左室舒張異常引起[20]。內(nèi)皮炎癥及其繼發(fā)的內(nèi)皮功能障礙被認(rèn)為是HFpEF其重要病理機(jī)制[21]。肥胖、糖尿病、高脂血癥等全身促炎狀態(tài)可導(dǎo)致冠狀動(dòng)脈微血管內(nèi)皮炎癥，其級(jí)聯(lián)反應(yīng)始于內(nèi)皮細(xì)胞，通過(guò)抑制eNOS使內(nèi)源性NO生物利用度降低，繼而影響cGMP含量及其下游PKG活性。這種低活性造成肌漿網(wǎng)上受磷蛋白和SERCA-2a活性降低，使Ca2+在肌漿網(wǎng)中積累，心肌無(wú)法正常松弛，繼發(fā)心肌細(xì)胞僵硬，舒張功能障礙。

中醫(yī)將心衰歸于“心積”“心水”等范疇，脈絡(luò)學(xué)說(shuō)提出，心積、心水病機(jī)多為宗氣虧虛，心氣虛乏，營(yíng)衛(wèi)交匯生化障礙為本，營(yíng)衛(wèi)氣化失常瘀血阻滯脈絡(luò)津聚為水為主要病理過(guò)程[22]。宗氣虧虛，心臟氣陽(yáng)虛乏、脈道無(wú)力，血無(wú)以運(yùn)而形成脈絡(luò)瘀阻，同時(shí)營(yíng)衛(wèi)交匯生化失司，陽(yáng)虛不能化水，致使水飲停滯，氣、血、水三分合而發(fā)病，痰瘀互結(jié)，阻滯脈絡(luò)，導(dǎo)致絡(luò)息成積的的病理變化，可引起心臟組織腫大變形，室壁肥厚、纖維增生，致使心臟擴(kuò)大和重塑，心功能惡化。脈絡(luò)學(xué)說(shuō)將HFpEF病機(jī)歸納為“氣陽(yáng)虛乏、絡(luò)瘀水停、絡(luò)息心積”，在“絡(luò)以通為用”治療原則指導(dǎo)下，進(jìn)一步提出了“益氣溫陽(yáng)、活血通絡(luò)、利水消腫”治法并研制了芪藶強(qiáng)心膠囊。本藥以黃芪、附子、人參、陳皮益氣溫陽(yáng)，丹參、紅花活血通絡(luò)，葶藶子、香加皮、澤瀉、玉竹利水消腫，桂枝佐使以辛溫通絡(luò)，溫陽(yáng)化氣，諸藥配伍使心慌氣短、不能平臥、尿少水腫諸癥自消，抑制心室重構(gòu)，改善心臟功能，對(duì)HFpEF有較好的療效[23]。

本研究采用網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法，通過(guò)公共數(shù)據(jù)庫(kù)對(duì)芪藶強(qiáng)心膠囊明確鑒定的成分及HFpEF的共同作用靶點(diǎn)，利用生物信息學(xué)技術(shù)進(jìn)行網(wǎng)絡(luò)構(gòu)建，尋找芪藶強(qiáng)心治療HFpEF的可能作用靶點(diǎn)。既往亦有研究[24-26]通過(guò)網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)方法探究芪藶強(qiáng)心膠囊的作用機(jī)制，而所探討的疾病多為慢性心衰（HFrEF）、糖尿病性心肌病、充血性心力衰竭等，尚無(wú)HFpEF的網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)研究；同時(shí)，這些研究多通過(guò)TCMSP、BAT-MAN TCM等平臺(tái)直接檢索芪藶強(qiáng)心膠囊中11味藥物所有成分的各自靶點(diǎn)，未通過(guò)藥物代謝研究探索其在體內(nèi)真正發(fā)揮藥效的物質(zhì)成分，缺乏針對(duì)性，本研究彌補(bǔ)了這一缺陷。本課題組前期對(duì)芪藶強(qiáng)心膠囊11味藥材通過(guò)自建化合物數(shù)據(jù)庫(kù)完成對(duì)其化學(xué)成分的全面檢識(shí)，共發(fā)現(xiàn)包括黃酮類22種、二萜生物堿33種、三萜皂苷類44種，苯丙素類21種，其他類化合物11種，其中44個(gè)化合物利用對(duì)照品進(jìn)行了確認(rèn)[17]，又確認(rèn)了毛蕊異黃酮-7--β--葡萄糖苷、人參皂苷Re、人參皂苷Rg1、杠柳苷G等成分為芪藶強(qiáng)心膠囊強(qiáng)心、利尿及擴(kuò)血管的重要活性成分[27]。芪藶強(qiáng)心膠囊組方中黃芪、附子、人參、陳皮益氣溫陽(yáng)，助陽(yáng)化氣，針對(duì)氣陽(yáng)虛乏的基本病機(jī)，本研究中鑒定的主要有效成分包括黃芪甲苷、異鼠李素、新烏寧堿、次烏頭堿、人參皂苷、橙皮苷等，具有非正性肌力洋地黃類作用，能改善心肌收縮、擴(kuò)血管、增加細(xì)胞搏動(dòng)頻率和幅度、改善心功能[28]；丹參、紅花活血化瘀以通脈絡(luò)，主要有效成分包括丹酚酸、丹參素鈉、丹參酮、毛蕊異黃酮、槲皮素等，可擴(kuò)張冠狀動(dòng)脈、減少紅細(xì)胞聚集、改善血黏度和血液流變等[29]；澤瀉、葶藶子、香加皮、玉竹養(yǎng)陰利水消腫以緩其癥，主要有效成分包括澤瀉醇、異鼠李素、杠柳毒苷、槲皮素-吡喃葡萄糖等，具有強(qiáng)心、利尿、抗炎、免疫調(diào)節(jié)等多種生物功能[30]。這些藥理作用為芪藶強(qiáng)心膠囊治療HFpEF奠定了基礎(chǔ)。

KEGG通路富集結(jié)果顯示，cGMP-PKG信號(hào)通路為芪藶強(qiáng)心膠囊治療HFpEF的高敏感通路，對(duì)此本研究進(jìn)行了深入探討。NO-sGC-cGMP-PKG軸被描述為心臟舒縮的重要調(diào)節(jié)器[31]。在生理?xiàng)l件下，內(nèi)皮細(xì)胞在一級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的關(guān)鍵作用是通過(guò)eNOS的活性生成NO，并激活sGC作為其靶細(xì)胞（如心肌細(xì)胞和血管平滑肌細(xì)胞）中的氣體遞質(zhì)。作為回應(yīng)，sGC產(chǎn)生cGMP，這是下游效應(yīng)器PKG酶的關(guān)鍵調(diào)節(jié)因子，能夠調(diào)節(jié)血管緊張、松弛和收縮[32]。該系統(tǒng)的4個(gè)基本調(diào)節(jié)因子是磷酸二酯酶（GMP-binding cGMP-specific phosphodiesterase，PDE），PDE5A對(duì)cGMP分子具有特異性能夠?qū)GMP降解為5′-GMP，如果PDE上調(diào)加上增強(qiáng)的硝基氧化應(yīng)激，可能顯著導(dǎo)致HFpEF患者心肌中cGMP-PKG信號(hào)受損[33]。舒張功能障礙還可能由于該通路中SERCA-2a活性降低有關(guān)，導(dǎo)致肌漿網(wǎng)清除Ca2+功能降低，舒張期Ca2+增加，心肌松弛異常[34]?？偟膩?lái)說(shuō)，cGMP增加和PKG激活導(dǎo)致細(xì)胞內(nèi)游離鈣減少，導(dǎo)致血管平滑肌細(xì)胞松弛，這是該通路主要生理效應(yīng)之一。

常麗萍[35]研究發(fā)現(xiàn)芪藶強(qiáng)心膠囊可以提高心梗后心衰大鼠主動(dòng)脈組織中降鈣素基因相關(guān)肽（calcitonin gene related peptide，CGRP）、cGMP、eNOS蛋白表達(dá)，同時(shí)增強(qiáng)主動(dòng)脈組織、mRNA表達(dá)水平，提示芪藶強(qiáng)心膠囊可以通過(guò)舒張血管而增強(qiáng)心肌供血，其擴(kuò)展血管機(jī)制可能與eNOS-sGC-cGMP-PKG通路相關(guān)，證實(shí)了芪藶強(qiáng)心膠囊可以通過(guò)調(diào)控cGMP-PKG通路改善心臟/血管舒張功能。本研究亦證實(shí)，芪藶強(qiáng)心膠囊能降低HFpEF大鼠心臟指數(shù)，提高EF，降低室壁肥厚程度，縮短IVRT時(shí)間，提高E/A值，提示心室舒張功能明顯恢復(fù)；同時(shí)增加HFpEF血清中NO水平，提高eNOS表達(dá)量，增強(qiáng)內(nèi)皮功能；可降低PDE5A對(duì)cGMP的水解作用增加心臟cGMP水平，同時(shí)增強(qiáng)PKG活性，這些過(guò)程改善了肌絲功能，降低了心肌細(xì)胞的被動(dòng)僵硬度，從而改善了舒張功能。此外，芪藶強(qiáng)心膠囊還能降低該通路下游心肌肥厚相關(guān)因子和mRNA相對(duì)表達(dá)量增加，提示其能夠增強(qiáng)大鼠排鈉利尿和血管平滑肌松弛，改善心室重構(gòu)的重要作用。

綜上所述，本研究基于網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)構(gòu)建“藥物-有效成分-靶點(diǎn)-疾病”網(wǎng)絡(luò)，闡明了芪藶強(qiáng)心膠囊多組分-多靶點(diǎn)-多環(huán)節(jié)治療HFpEF的作用機(jī)制。通過(guò)體內(nèi)實(shí)驗(yàn)，發(fā)現(xiàn)芪藶強(qiáng)心膠囊可以多維度、全面的激活cGMP-PKG信號(hào)通路，增強(qiáng)內(nèi)皮功能，改善心肌被動(dòng)僵硬程度，增強(qiáng)Ca2+轉(zhuǎn)運(yùn)功能，減輕心室重構(gòu)，驗(yàn)證了網(wǎng)絡(luò)藥理學(xué)的預(yù)測(cè)結(jié)果。這些數(shù)據(jù)對(duì)于闡明芪藶強(qiáng)心膠囊介導(dǎo)的舒張性心功能障礙改善的潛在機(jī)制有重要意義，并為HFpEF治療提供了有力佐證。

利益沖突 所有作者均聲明不存在利益沖突

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Mechanism of Qili Qiangxin Capsule in treatment of heart failure with preserved ejection fraction based on network pharmacology and experimental verification

HAO Jia-meng1, 2, CHANG Li-ping4, 5, WANG Lu3, 5, LIU Huan3, CHEN Meng3, 5, HOU Bin3, 4, ZHOU Lu-heng3, HOU Yun-long1, 2, 3

1. Hebei Medical University, Shijiazhuang 050017, China 2. Key Research Office of State Administration of Traditional Chinese Medicine (Cardiovascular and Cerebrovascular Diseases), Hebei Yiling Hospital, Shijiazhuang 050023, China 3. Shijiazhuang Yiling Pharmaceutical Co., Ltd., Shijiazhuang 050023, China 4. State Key Laboratory of Collateral Disease Research and Innovative Chinese Medicine, Shijiazhuang 050023, China 5. Hebei Key Laboratory of Collateral Diseases, Shijiazhuang 050023, China

To explore the mechanism of Qiliqiangxin Capsule (芪藶強(qiáng)心膠囊, QLQX) in treatment of heart failure with preserved ejection fraction (HFpEF) based on network pharmacology and experimental verification.Forty-four clearly identified exogenous substances in QLQX were identified as active ingredients, and targets of compounds were predicted by Swisstarget prediction and Pharmmapper platforms, HFpEF disease targets were retrieved from OMIM, Disgenet and Gencard databases. Intersection targets were collected, String database and Cytoscape 3.7.2 software were uses to perform protein-protein interaction network analysis (PPI) and topology analysis. Metescape platform were used to perform gene ontology (GO) and Kyoto encyclopedia of genes and genomes (KEGG) pathway enrichment analysis for common targets. A salt-sensitive HFpEF rat model with deoxycorticosterone acetate (DOCA) was constructed and given sacubitril-valsartan or QLQX for intervention. After eight weeks of administration, small animal ultrasound imaging system, ELISA, immunofluorescence, Western blotting, qRT-PCR methods were used for pharmacodynamic evaluation and cyclic guanosinc monophosphate (cGMP)-protein kinase G1 (PKG1) signaling pathway related target validation.Thirty-eight identical targets were screened out from active ingredients of QLQX and HFpEF; GO function and KEGG pathway enrichment analysis showed that they were involved in biological process (such as blood circulation, circulatory system, cardiac contraction), cellular components (such as membrane rafts, axons, cytoplasmic region) and molecular function (such as α-glucosidase activity, endopeptidase activity, hydrolase activity), involving cGMP-PKG signaling pathway, renin secretion, calcium signaling pathway.experiments confirmed that QLQX increased ejection fraction, reduced degree of ventricular wall hypertrophy, shortened isovolumic relaxation time (IVRT), and increased ratio of left ventricular diastolic filling velocity in HFpEF rats (< 0.05), increased nitric oxide (NO) and cGMP levels in serum (< 0.05), enhanced myocardial endothelial nitric oxide synthase (eNOS) fluorescence expression (< 0.05, 0.01), increased eNOS, PKG1, cardiac sarcoplasmic reticulum Ca2+-ATPase (SERCA), soluble guanylate cyclase α (sGCα) protein expressions (< 0.05, 0.01), decreased cGMP-specific phosphodiesterase 5A (PDE5A) protein expression level (< 0.05), decreased B-type brain natriuretic peptide () and β-myosin heavy chain () mRNA expressions in myocardial tissue (< 0.05).QLQX can exert the therapeutic effect of HFpEF through component-multi-target-multi-link, and its mechanism is related to the regulation of cGMP-PKG signaling pathway.

network pharmacology; Qili Qiangxin Capsule; heart failure with preserved ejection fraction; endothelial function; choroid theory; cGMP-PKG1 pathway

R285.5

A

0253 - 2670(2022)14 - 4365 - 11

10.7501/j.issn.0253-2670.2022.14.016

2022-02-23

國(guó)家重點(diǎn)研發(fā)計(jì)劃“中醫(yī)藥現(xiàn)代化研究”重點(diǎn)專項(xiàng)資助項(xiàng)目（2017YFC1700501）；河北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（H2019106059）；河北省中醫(yī)藥管理局科研計(jì)劃項(xiàng)目（Z2022020）

郝佳夢(mèng)（1992—），女，博士研究生，從事心血管病中西醫(yī)結(jié)合研究。E-mail: sweet_dreams0502@yeah.net

侯云龍，男，博士，教授，博士生導(dǎo)師，從事中藥藥理學(xué)研究。E-mail: houyunlonghrb@hotmail.com

[責(zé)任編輯 李亞楠]