袁 揚，趙 恬，王胤晨，張定紅，張錦華

（貴州省農業(yè)科學院畜牧獸醫(yī)研究所，貴州 貴陽 550002）

引言

蜂蜜因其豐富的營養(yǎng)價值和保健功能備受消費者青睞，具有良好的市場前景。中國是一個養(yǎng)蜂大國，也是世界上蜂產品生產大國[1]。貴州有悠久的養(yǎng)蜂歷史，是我國中蜂主產區(qū)之一[2]。蜜源植物是發(fā)展蜂產業(yè)的基礎，一方面可以壯大蜂群，另一方面是生產蜂產品的原料。因此，蜜源植物的開發(fā)利用具有現實意義及緊迫性。

金蕎麥【Fagopyrum dibotrys(D.Don)Hara】屬蓼科(Polygonaceae)蕎麥屬FagopyrumMill[3]，又名苦蕎麥、天蕎麥、野蕎麥、金鎖銀開、賊骨頭、土茯苓等。金蕎麥原產我國西南地區(qū)，分布于貴州省、四川省、重慶市、湖南省、陜西省和江蘇省等大部分省區(qū)，具有較高的藥用價值[4]。其中主要以云、貴、川三省野生資源儲量最大[5]，大多在海拔500～3 000 m的林緣、灌木叢、田邊、道旁以及陰濕瘠薄的山地野生生長[6]。金蕎麥對土壤要求較低，對磷、鉀肥的吸收能力較強，在瘠薄地和新墾地上均能生長，耐旱耐寒性強，適應性較強。

金蕎麥作為一種易繁殖、適應性強、產量高的牧草資源，在畜禽養(yǎng)殖中廣泛應用。阮涌等[7]將金蕎麥按一定比例（1%、2%、3%）混合于三穗麻鴨日糧中作為飼料添加劑，通過對鴨群注射禽流感疫苗后檢測其細胞和體液免疫水平，其結果表明金蕎麥能夠促進禽流感疫苗對鴨群的細胞和體液免疫水平。鄧蓉等[8]用野生金蕎麥替代豬日食中的部分精料，可以改善豬肉品質，提高豬的屠宰性能和肉品出品率。用金蕎麥飼喂豬還可降低其排泄物中的有機質、氮和磷等，以減少其對環(huán)境的污染。張潔等[9]使用金蕎麥飼喂生長育肥豬，可節(jié)省精料，節(jié)約成本。

目前對于金蕎麥的研究均集中于其藥用和飼用價值。眾所周知，蕎麥是非常好的蜜源植物，且蕎麥蜜多用于藥用，作為同屬植物的金蕎麥，對其進行花蜜分泌規(guī)律及花蜜成分的研究能更好地提高金蕎麥的利用價值。本試驗通過離心法測定泌蜜情況，采用代謝物全譜分析的方法進行金蕎麥花蜜成分分析，以期對其作為蜜源植物開發(fā)利用提供理論依據。通過利用超高效液相色譜質譜聯(lián)用技術對金蕎麥花蜜進行物質分離和鑒定，找出其特征成分，使其得到更好的開發(fā)利用。

1 材料和方法

1.1 材料

1.1.1 金蕎麥

品種為黔金蕎麥1號，種植于貴州省畜牧獸醫(yī)研究所苗圃及麥坪基地。

1.1.2 花蜜

采自貴州省畜牧獸醫(yī)研究所麥坪基地種植的黔金蕎麥1號。

1.1.3 儀器設備

①超高效液相色譜儀，品牌：Thermo Fisher Scientific，型號：Thermo Vanquish UHPLC；②高分辨質譜，品牌：Thermo Fisher Scientific，型號：Q-Exactive HF；③色譜柱，品牌：Agilent technologies，型號：Zorbax Eclipse C18(1.8μm×2.1×100mm)。

1.1.4 試劑

①甲醇，品牌：Merck KGaA，純度：LC-MS級；②乙腈，品牌：Merck KGaA，純度：LC-MS級；③甲酸，品牌：西亞試劑s，純度：LC-MS級。

1.2 方法

1.2.1 材料預處理

花蜜的采集和分離。預先隨機選取生長態(tài)勢相同的金蕎麥植株100株，標記分為5組，每組20株，在花開前用細眼紗網給待測花朵套袋?；ㄩ_后每日9:00、11:00、13:00、15:00、17:00于每組的20株中隨機選取30朵單花并小心摘下，將每組采得的金蕎麥小花共同放入一個離心管中進行離心采集，采集到的花蜜可以用微量進樣器測量其體積，再計算平均花蜜量。將離心所得的花蜜用手持糖度計測量糖分濃度。

1.2.2 金蕎麥花蜜成分測定

研究采用代謝物全譜分析的方法，通過色譜串聯(lián)質譜（HPLC-MS/MS）技術鑒定花蜜中小分子化合物，從而達到對其進行定性定量分析的目的。利用超高效液相色譜質譜聯(lián)用技術對物質分離和鑒定，結合質譜數據庫信息注釋和分類，精準定性，測定金蕎麥花蜜中糖類、氨基酸和黃酮類物質含量及花蜜中揮發(fā)性物質的種類和相對含量。所有結果為花蜜樣本送至青島科創(chuàng)質量檢測有限公司分析所得。

1.3 數據統(tǒng)計與分析

數據采用SPSS V.19進行統(tǒng)計分析，采用Duncan方法分析數據差異顯著性。

2 結果與分析

2.1 金蕎麥單花不同花期泌蜜動態(tài)規(guī)律

2.1.1 不同花期泌蜜量變化趨勢

據試驗觀察，金蕎麥從現蕾到完全凋謝，持續(xù)時間為7月7日至8月4日，約28 d。單朵花序花期時間為3～4 d，單個花序的花期為14 d左右，整株花期約為28 d?，F蕾時間從7月7日開始，現蕾期5～6 d后逐漸開花，到第十四天（7月21日）開花數量達到50%，進入盛花期，持續(xù)8 d（7月28日），這段時間開花的數量是最多的，之后進入末花期（7月29日至8月6日），到8月6日花基本凋謝完。這一花期正值夏季缺蜜時段，可作為夏季輔助蜜源。

金蕎麥單花不同花期泌蜜動態(tài)規(guī)律、泌蜜量、花蜜糖濃度及花蜜糖含量的日變化趨勢見圖1和表1。由圖1和表1可知，金蕎麥單花在花蕾期、初花期、盛花期和末花期的泌蜜量均體現出在每天下午15:00左右達到最高峰，15:00后由于花朵自吸收或者其他原因導致泌蜜量降低。從每天的不同時間段來看，初花期泌蜜量最高，末花期泌蜜量最低。因此，選擇每日15:00的泌蜜量作為金蕎麥單花日泌蜜總量來觀測花期的泌蜜趨勢，結果顯示從整個花期來看，初花期單花日泌蜜總量最高，達到0.206 9μL，顯著高于花蕾期、盛花期和末花期，末花期日泌蜜總量最低，為0.025 0μ L，顯著低于花蕾期、初花期和盛花期。

2.1.2 不同花期花蜜糖濃度變化趨勢

由圖1和表1可知，從花蜜糖濃度單日變化看，糖濃度呈逐漸上升的趨勢，在下午17:00達到最高，因金蕎麥單花在花蕾期、初花期、盛花期和末花期的泌蜜量均體現出在每天下午15:00左右達到最高峰，選擇不同花期下午15:00的糖濃度來監(jiān)測日泌蜜動態(tài)中糖度變化的趨勢。從整個花期來看，金蕎麥花蜜糖濃度呈現逐漸上升的趨勢，末花期達到最高。

2.1.3 不同花期花蜜糖含量變化趨勢

由圖1和表1可知，從花蜜糖含量單日變化看，糖含量在下午15:00達到最高，從整個花期不同時間段來看，也是初花期含糖量均高于其余幾個花期，與泌蜜量趨勢相同。

表1 金蕎麥單花不同花期泌蜜動態(tài)規(guī)律

圖1 金蕎麥單花不同花期泌蜜量、花蜜糖濃度及花蜜糖含量的日變化趨勢

2.5 金蕎麥花蜜成分組成

2.5.1 糖類、氨基酸的成分及含量

花蜜的成分不僅構成了蜂蜜的主要風味，也是影響授粉昆蟲的主要因素。通過測定金蕎麥花蜜中糖類、氨基酸的成分及含量，見表2，由表2可知，金蕎麥花蜜的主要可溶性糖為果糖和葡萄糖，未檢出蔗糖、麥芽糖及乳糖。從氨基酸含量檢測結果來看，金蕎麥花蜜中含有8種氨基酸，其中谷氨酸含量最高，檢出量為0.020 g/100 g，天冬氨酸、蘇氨酸含量次之，檢出量分別為0.012 g/100 g和0.011 g/100 g。

表2 金蕎麥花蜜中糖類、氨基酸及黃酮類物質含量

2.5.2 黃酮類物質的成分及含量

由分析結果可知，花蜜中黃酮類物質的成分包括槲皮黃素、蘆丁、山柰酚-3-O-蕓香糖苷、原花色素B1、花青素鼠李葡萄糖甙、槲皮素3-O-(6-沒食子?；?-β-D葡萄糖甙、表兒茶素、堪非醇、槲皮苷及楊梅酮，含量為0.100～56.545μg/mL，其中蘆丁含量最高，槲皮苷次之（10.888μg/mL），堪非醇最低。進一步說明金蕎麥作為中藥材的良好藥用價值，為其更好地開發(fā)利用提供理論依據。

2.5.3 花蜜中揮發(fā)性物質的成分

金蕎麥花蜜中揮發(fā)性物質成分見表3。由表3可知，金蕎麥花蜜揮發(fā)性成分中，醛類物質含量最高，共11種占40.29%；烴類化合物及其衍生物種類最多，共17種占24.27%；酸類化合物共6種占7.14%；酯類化合物共3種占4.65%；酚類化合物共2種占6.78%；酮類化合物共2種占4.12%；醇類化合物共2種占3.87%。其中占比最高的成分是2-己烯醛，占15.14%，可作為后續(xù)金蕎麥花蜜特征性標記物。

表3 金蕎麥花蜜中揮發(fā)性物質鑒定結果

3 討論

據試驗觀察金蕎麥花期正值夏季缺蜜時段，可作為夏季輔助蜜源。單花在不同花期的日泌蜜量均在每天15:00左右達到最高峰，15:00后由于花朵自吸收或者其他原因導致泌蜜量降低。在不同時間段，花蜜中糖分的濃度不同應該與水分的蒸發(fā)有所關聯(lián)[10]。

花蜜是高等植物在正常生理狀態(tài)下，由位于花內或花外組織中的蜜腺分泌出來的、具有特定生理生態(tài)學功能的復雜混合物[11]，不僅構成了蜂蜜的主要風味，更是吸引傳粉昆蟲訪花和植物種質保存的重要因素[12]?；垡话愣己刑穷悺⒌鞍踪|、氨基酸、無機離子和脂類等，有些花蜜還含有萜類、生物堿以及一些揮發(fā)性物質等[13]。金蕎麥花蜜的主要可溶性糖為果糖和葡萄糖，這二者是多數蜜源植物花蜜中的糖類主要成分，也是吸引傳粉者的重要物質。從氨基酸含量檢測結果來看，金蕎麥花蜜中含有8種氨基酸，其中谷氨酸含量最高，天冬氨酸含量次之。谷氨酸是生物體內氮代謝的基本氨基酸之一，在代謝上具有重要的意義。黃酮具有抗紫外線、防御外界入侵、鋁毒害耐性等保護作用[14]。從黃酮類化合物含量來看，金蕎麥花蜜中蘆丁含量最高，為56.545μg/mL，進一步說明金蕎麥作為中藥材的良好藥用價值，為其更好地開發(fā)利用提供理論依據。

花蜜中的揮發(fā)性成分決定了蜂蜜的風味，可作為區(qū)別不同蜜源植物的特征性標記物[15-16]。金蕎麥花蜜揮發(fā)性成分中，醛類物質共11種占40.29%，烴類化合物及其衍生物共17種占24.27%，酸類化合物共6種占7.14%，酯類化合物共3種占4.65%，酚類化合物共2種占6.78%，酮類化合物共2種占4.12%，醇類化合物共2種占3.87%。其中占比最高的成分是2-己烯醛，占15.14%，測定結果可為后續(xù)花蜜特征性標記物及蜂蜜質量控制提供理論支撐。

4 結論

金蕎麥在我省分布廣泛，其塊根可入藥，莖葉蛋白質含量高可作為優(yōu)良飼草推廣應用，試驗通過對金蕎麥的泌蜜量、泌蜜規(guī)律進行檢測分析，結果表明，金蕎麥花期持續(xù)時間約在7月7日至8月4日，正值夏季缺蜜時段，初花期單花日泌蜜總量最高，達到0.206 9μL，可作為夏季輔助蜜源。通過檢測金蕎麥花蜜成分，結果表明金蕎麥花蜜中黃酮類物質含量豐富，可進一步研究蜜蜂采集金蕎麥花蜜后產生的成品蜂蜜中有效成分的含量，對今后我省蜜源植物的開發(fā)和科學利用提供理論參考，并為貴州蜂業(yè)發(fā)展提供技術支撐。