侯繼院， 單國(guó)用， 龔哲， 張春禮

（1.鄭州人民醫(yī)院放療科，河南鄭州 450000；2.鄭州人民醫(yī)院普外科，河南鄭州 450000）

腹部、盆腔放射療法誘發(fā)腸壁急性或慢性病變，稱(chēng)為放射性腸炎（radiation enteritis），是惡性腫瘤放療后的常見(jiàn)并發(fā)癥[1]。放射性腸炎可累及小腸、結(jié)腸和直腸等部位，其中，小腸黏膜損傷預(yù)后較其他部位差。目前，臨床治療以手術(shù)、對(duì)癥治療及營(yíng)養(yǎng)支持療法為主，但遠(yuǎn)期效果并不理想[2-3]；而中醫(yī)藥以可喜療效，毒副作用小，顯示了良好的臨床應(yīng)用前景。中藥黃芪為豆科植物黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge.或內(nèi)蒙古黃芪Astragalus membranaceus（Fisch.）Bge var.mongholicusBge.Hsiao等的根，味甘，性微溫，入脾、肺經(jīng)，具有補(bǔ)中益氣、固表、利水、托膿、生肌功效，善治癰疽久不潰破、潰久不斂。黃芪多糖（astragalus polysaccharide）是黃芪的主要有效活性成分之一，可緩解潰瘍性結(jié)腸炎，降低炎癥反應(yīng)，改善腸道黏膜屏障功能[4-5]。本病與慢性潰瘍性結(jié)腸炎的臨床表現(xiàn)有相似之處，均屬于中醫(yī)“泄瀉”范疇，但黃芪多糖對(duì)放射性腸炎大鼠腸黏膜損傷的治療作用尚不明確?；诖耍狙芯拷⒎派湫阅c炎大鼠模型，采用黃芪多糖進(jìn)行干預(yù)，探討黃芪多糖的修復(fù)作用及可能機(jī)制，以期為黃芪多糖相關(guān)藥物的研發(fā)和放射性腸炎的臨床治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物SPF級(jí)8周齡雄性SD 大鼠60只，體質(zhì)量（280 ± 20）g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，動(dòng)物質(zhì)量合格證號(hào)：SCXK（京）2016-0011。飼養(yǎng)條件：溫度20 ～25 ℃，相對(duì)濕度45%～55%，明暗循環(huán)時(shí)間比1∶1，根據(jù)國(guó)家實(shí)驗(yàn)動(dòng)物管理?xiàng)l例進(jìn)行喂養(yǎng)。本研究經(jīng)鄭州人民醫(yī)院倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)。

1.2 藥品、試劑與儀器黃芪多糖（純度≥95%，批號(hào)：A1427），購(gòu)自成都曼斯特生物科技有限公司；腺苷酸活化蛋白激酶（AMPK）特異性抑制劑——復(fù)合物C 購(gòu)自美國(guó)Sigma 公司（批號(hào)：171261）；硫氰酸熒光素標(biāo)記的葡聚糖4（FITC-dextran4，F(xiàn)D4）購(gòu)自美國(guó)Sigma Aldrich 公司；白細(xì)胞介素1β（IL-1β）、腫瘤壞死因子α（TNF-α）酶聯(lián)免疫吸附分析（ELISA）檢測(cè)試劑盒購(gòu)自晶美（深圳）生物工程公司；兔抗鼠AMPK抗體、磷酸化AMPK（p-AMPK）抗體、哺乳動(dòng)物雷帕霉素靶蛋白（mTOR）和磷酸化mTOR（p-mTOR）、β-actin抗體購(gòu)自美國(guó)Upstate公司；山羊抗兔辣根過(guò)氧化物酶（HRP）標(biāo)記的IgG購(gòu)自英國(guó)Abcam 公司。高能X 射線直線加速器購(gòu)自美國(guó)Varian 公司；Shimadzu RF-540 熒光分光光度計(jì)購(gòu)自日本島津儀器公司；酶標(biāo)儀購(gòu)自芬蘭雷勃公司。

1.3 建立大鼠放射性腸炎模型參照文獻(xiàn)研究[6]方法，隨機(jī)選取48只SD 大鼠，腹腔注射40 mg/kg戊巴比妥鈉麻醉后固定于手術(shù)板上，用高能X 射線直線加速器進(jìn)行全腹照射（從劍突至恥骨聯(lián)合），照射面積8.5 cm × 7.5 cm，其余部位使用5 cm 厚鉛板遮擋，源皮距100 cm，照射劑量9 Gy，射線能量6 MV，放射劑量率300 cGy/min，照射時(shí)間約3 min，照射1 次。若大鼠出現(xiàn)脫毛、便血、腹瀉和體質(zhì)量減輕等癥狀則提示建模成功。剩余12只大鼠作為正常組，置于相似環(huán)境中但不給予放射線照射。

1.4 分組與藥物干預(yù)將造模成功的48只SD 大鼠按隨機(jī)數(shù)字表分為模型組、黃芪多糖組、復(fù)合物C組、黃芪多糖+復(fù)合物C組，每組12只。造模成功后次日，參照文獻(xiàn)研究[7]用量，黃芪多糖組給予400 mg·kg-1·d-1黃芪多糖灌胃，復(fù)合物C組給予2 mL 復(fù)合物C 10 μmol/L 灌胃，黃芪多糖+復(fù)合物C組先給予400 mg/kg 黃芪多糖灌胃，4 h 后再灌胃2 mL 復(fù)合物C 10 μmol/L，每日1 次，連續(xù)7 d；正常組、模型組實(shí)驗(yàn)期間給予等量無(wú)菌生理鹽水灌胃。

1.5 觀察指標(biāo)與方法

1.5.1 大鼠一般情況和疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI） 藥物開(kāi)始干預(yù)第1天起，每2 d 稱(chēng)量大鼠體質(zhì)量至第7天給藥結(jié)束，期間同步觀察大鼠攝食飲水、精神狀態(tài)、排便等生活情況，根據(jù)體質(zhì)量變化、腹瀉、便血及大便性狀進(jìn)行DAI 評(píng)分。評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)[8]：①腹瀉程度（正常，計(jì)0 分；稀便，計(jì)2分；水樣腹瀉，計(jì)4分）；②便血程度（無(wú)出血，計(jì)0分；輕度出血，計(jì)2分；大出血，計(jì)4分）。

1.5.2 熒光素示蹤法檢測(cè)小腸黏膜通透性 末次藥物干預(yù)24 h后，F(xiàn)D4示蹤法向距離回盲部2.5 cm末段回腸腸腔注入0.1 mL FD4溶液（用生理鹽水稀釋至125 mg/L），0.5 h后取眼球血，分離血漿，應(yīng)用熒光分光光度計(jì)檢測(cè)其熒光強(qiáng)度，根據(jù)熒光強(qiáng)度計(jì)算血漿FD4含量。

1.5.3 ELISA法檢測(cè)小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α水平 眼球采血完畢，脊椎脫臼法處死大鼠，解剖分離小腸黏膜組織，取部分組織于勻漿器中勻漿，以3000 r/min（離心半徑8 cm）離心15 min，收集上清。酶標(biāo)板上設(shè)置空白孔、標(biāo)準(zhǔn)品孔和樣品孔，空白孔不加樣品和酶標(biāo)試劑，標(biāo)準(zhǔn)品孔加不同濃度的標(biāo)準(zhǔn)品50 μL，樣品孔先加40 μL 樣品稀釋液，再加10 μL 待測(cè)樣品（最終稀釋度為5 倍），晃動(dòng)混勻，除空白孔外其余每孔加100 μL 酶標(biāo)試劑，封板后37 ℃溫育1 h。洗滌液清洗5 次，先加50 μL 顯色劑A，再加50 μL 顯色劑B，晃動(dòng)混勻，37 ℃避光顯色15 min。加50 μL 終止液終止反應(yīng)，15 min 內(nèi)以空白孔調(diào)零，應(yīng)用酶標(biāo)儀于450 nm 波長(zhǎng)處測(cè)量吸光度（OD）值。根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品IL-1β、TNF-α水平。

1.5.4 蘇木素-伊紅（HE）染色法觀察小腸黏膜組織病理學(xué)變化 大鼠處死后以肛門(mén)到盲腸為標(biāo)志點(diǎn)，切取距回盲部5 cm的小腸組織，4%多聚甲醛固定，梯度乙醇脫水，二甲苯透明，石蠟包埋，組織切片（厚度約為4 μm），酒精、二甲苯脫蠟，蘇木素、伊紅染色，脫水、透明后中性樹(shù)膠封片，顯微鏡下觀察大鼠小腸黏膜組織病理變化。

1.5.5 透射電鏡觀察小腸組織結(jié)構(gòu)和絨毛超微結(jié)構(gòu)變化 選取小腸組織典型病灶處，預(yù)冷的4%戊二醛-1.5%多聚甲醛固定，梯度酒精脫水，丙酮浸透，環(huán)氧樹(shù)脂包埋劑包埋，超薄切片機(jī)切片（厚度約80 nm），3%醋酸鈾、檸檬酸鉛分別染色5 min，透射電鏡下觀察小腸組織結(jié)構(gòu)和絨毛超微結(jié)構(gòu)變化。

1.5.6 Western Blot 法檢測(cè)小腸黏膜組織AMPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平 取80 mg 小腸黏膜組織，加入液氮后研磨，提取總蛋白，二喹啉甲酸（BCA）試劑盒檢測(cè)蛋白濃度，蛋白變性。10%十二烷基硫酸鈉（SDS）-聚丙烯酰胺凝膠電泳（PAGE）分離目的蛋白，80 V恒壓電泳30 min，100 V恒壓電泳約1 h，濕式轉(zhuǎn)膜儀轉(zhuǎn)至PVDF 膜，300 mA 恒流轉(zhuǎn)膜1 h。5%脫脂牛奶室溫封閉1 h。分別加入AMPK 一抗（1∶500 稀釋?zhuān)?、p-AMPK 一抗（1∶200 稀釋?zhuān)?、mTOR 一抗（1∶500 稀釋?zhuān)-mTOR 一抗（1∶200 稀釋?zhuān)?、?actin 一抗（1∶1000 稀釋?zhuān)? ℃孵育過(guò)夜。TBST 洗膜3 次，每次10 min，再加入HRP 標(biāo)記二抗（1∶2000 稀釋?zhuān)?，室溫孵? h。TBST 洗膜3 次，每次10 min，浸入電化學(xué)發(fā)光（ECL）液，于暗室中曝光顯影。實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。應(yīng)用ImageJ軟件分析蛋白條帶灰度值，以目的蛋白條帶灰度值/內(nèi)參β-actin蛋白條帶灰度值表示目的蛋白相對(duì)表達(dá)量。

1.6 統(tǒng)計(jì)方法采用SPSS 24.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行分析，計(jì)量資料以均數(shù)± 標(biāo)準(zhǔn)差（x±s）表示，多組間比較采用單因素方差分析，進(jìn)一步兩組間比較采用LSD-t檢驗(yàn)。以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠一般情況和DAI變化比較正常組大鼠實(shí)驗(yàn)期間攝食、飲水、精神狀態(tài)及排便情況無(wú)明顯異常；模型組大鼠出現(xiàn)脫毛、弓背、精神萎靡、攝食飲水減少、腹瀉、便血、體質(zhì)量減輕，DAI升高。與模型組比較，黃芪多糖組大鼠腸炎癥狀明顯減輕，從給藥第3天開(kāi)始，DAI 降低（P＜0.05）；復(fù)合物C組腸炎癥狀明顯加重，從給藥第3天開(kāi)始，DAI升高（P＜0.05）。與黃芪多糖組比較，復(fù)合物C組、黃芪多糖+復(fù)合物C組腸炎癥狀明顯加重，從給藥第3天開(kāi)始，DAI 升高（P＜0.05）。與復(fù)合物C組比較，黃芪多糖+復(fù)合物C組腸炎癥狀明顯減輕，從給藥第3天開(kāi)始，DAI降低（P＜0.05）。DAI 變化見(jiàn)圖1。結(jié)果表明，復(fù)合物C可加重放射性腸炎大鼠癥狀，而黃芪多糖可緩解放射性腸炎大鼠腹瀉、便血等相關(guān)癥狀。

圖1 各組大鼠一般情況和疾病活動(dòng)指數(shù)（DAI）變化比較Figure 1 Comparison of changes in general condition and DAI between various groups of rats

2.2 各組大鼠腸道黏膜通透性比較與正常組比較，模型組血漿FD4 含量升高（P＜0.05）；與模型組比較，黃芪多糖組血漿FD4含量降低，復(fù)合物C組血漿FD4 含量升高（P＜0.05）；與黃芪多糖組比較，復(fù)合物C組、黃芪多糖+復(fù)合物C組血漿FD4含量升高（P＜0.05）；與復(fù)合物C組比較，黃芪多糖+復(fù)合物C組血漿FD4含量降低（P＜0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果表明，黃芪多糖可改善放射性腸炎大鼠腸道黏膜通透性。

表1 各組大鼠血漿FD4含量比較Table 1 Comparison of plasma FD4 content among various groups of rats （±s，mg·L-1）

表1 各組大鼠血漿FD4含量比較Table 1 Comparison of plasma FD4 content among various groups of rats （±s，mg·L-1）

①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與黃芪多糖組比較；④P＜0.05，與復(fù)合物C組比較

組別正常組模型組黃芪多糖組復(fù)合物C組黃芪多糖+復(fù)合物C組F值P值鼠數(shù)/只1212121212血漿FD412.74±1.7853.62±5.24①36.89±3.51②61.57±5.68②③50.45±4.73③④225.368＜0.001

2.3 各組大鼠小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α 水平比較與正常組比較，模型組小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α 水平升高（P＜0.05）；與模型組比較，黃芪多糖組小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α水平降低（P＜0.05），復(fù)合物C組小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α水平升高（P＜0.05）；與黃芪多糖組比較，復(fù)合物C組、黃芪多糖+復(fù)合物C組小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α 水平升高（P＜0.05）；與復(fù)合物C組比較，黃芪多糖+復(fù)合物C組小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α 水平降低（P＜0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)表2。結(jié)果表明，黃芪多糖可減輕放射性腸炎大鼠小腸黏膜組織的炎癥反應(yīng)。

表2 各組大鼠小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α水平比較Table 2 Comparison of the levels of IL-1β and TNF-α in the small intestinal mucosa among various groups of rats （±s，ng·mL-1）

表2 各組大鼠小腸黏膜組織IL-1β、TNF-α水平比較Table 2 Comparison of the levels of IL-1β and TNF-α in the small intestinal mucosa among various groups of rats （±s，ng·mL-1）

①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與黃芪多糖組比較；④P＜0.05，與復(fù)合物C組比較

組別正常組模型組黃芪多糖組復(fù)合物C組黃芪多糖+復(fù)合物C組F值P值鼠數(shù)/只1212121212 IL-1β 4.68±0.197.56±0.34①5.43±0.25②8.29±0.41②③6.42±0.28③④308.547＜0.001 TNF-α 1.34±0.123.67±0.24①1.92±0.18②4.51±0.37②③2.53±0.29③④319.532＜0.001

2.4 各組大鼠小腸黏膜組織病理表現(xiàn)比較正常組大鼠小腸黏膜單層柱狀上皮、黏膜肌層和固有層結(jié)構(gòu)完整，腺體結(jié)構(gòu)清晰，肌層、固有層及漿膜無(wú)炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；模型組小腸黏膜結(jié)構(gòu)不完整，隱窩和腺體正常結(jié)構(gòu)消失，小腸上皮結(jié)構(gòu)破壞，黏膜及黏膜下層大量炎性細(xì)胞浸潤(rùn)；與模型組比較，黃芪多糖組小腸部分上皮細(xì)胞及腺體細(xì)胞再生，黏膜結(jié)構(gòu)較完整，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)減少，病變程度顯著減輕，復(fù)合物C組小腸黏膜結(jié)構(gòu)嚴(yán)重破壞，炎性細(xì)胞浸潤(rùn)增多，病變程度顯著加重；黃芪多糖+復(fù)合物C組小腸黏膜病變程度較黃芪多糖組加重。具體結(jié)果見(jiàn)圖2。結(jié)果表明，黃芪多糖可改善放射性腸炎大鼠小腸黏膜組織病理?yè)p傷。

圖2 各組大鼠小腸黏膜組織病理表現(xiàn)比較（HE染色，×200）Figure 2 Comparison of pathological features of small intestinal mucosal tissue among various groups of rats（by HE staining，×200）

2.5 各組大鼠小腸組織結(jié)構(gòu)和絨毛超微結(jié)構(gòu)變化比較正常組大鼠小腸上皮細(xì)胞微絨毛完整，細(xì)胞結(jié)構(gòu)清晰，排列整齊，緊密連接結(jié)構(gòu)無(wú)顯著變化；模型組腸上皮細(xì)胞空泡變性，大部分杯狀細(xì)胞排空，線粒體輕度腫脹，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴(kuò)張，細(xì)胞間質(zhì)水腫伴炎性細(xì)胞浸潤(rùn)，腸黏膜緊密連接結(jié)構(gòu)減少，細(xì)胞間隙增寬；與模型組比較，黃芪多糖組腸黏膜組織損傷顯著減輕，緊密連接結(jié)構(gòu)較完整，間隙擴(kuò)大程度降低，復(fù)合物C組腸黏膜組織損傷顯著加重，緊密連接結(jié)構(gòu)顯著減少；相較于黃芪多糖組，黃芪多糖+復(fù)合物C組小腸黏膜組織損傷加重，緊密連接結(jié)構(gòu)減少，細(xì)胞間隙增寬。具體結(jié)果見(jiàn)圖3。結(jié)果表明，黃芪多糖可改善放射性腸炎大鼠小腸超微結(jié)構(gòu)的損傷。

圖3 各組大鼠小腸組織結(jié)構(gòu)和絨毛超微結(jié)構(gòu)變化比較（透射電鏡，×4000）Figure 3 Comparison of changes in Histological structure of small intestine and ultrastructure of villi among various groups of rats（by transmission electron microscopy，×4000）

2.6 各組大鼠小腸黏膜組織AMPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較與正常組比較，模型組小腸黏膜組織p-AMPK蛋白相對(duì)表達(dá)量降低，p-mTOR蛋白相對(duì)表達(dá)量升高（P＜0.05）；與模型組比較，黃芪多糖組小腸黏膜組織p-AMPK 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高，p-mTOR 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低（P＜0.05），復(fù)合物C組小腸黏膜組織p-AMPK蛋白相對(duì)表達(dá)量降低，p-mTOR 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高（P＜0.05）；與黃芪多糖組比較，復(fù)合物C組、黃芪多糖+復(fù)合物C組小腸黏膜組織p-AMPK 蛋白相對(duì)表達(dá)量降低，p-mTOR 蛋白相對(duì)表達(dá)量升高（P＜0.05）；與復(fù)合物C組比較，黃芪多糖+復(fù)合物C組小腸黏膜組織p-AMPK蛋白相對(duì)表達(dá)量升高，p-mTOR蛋白相對(duì)表達(dá)量降低（P＜0.05）。具體結(jié)果見(jiàn)表3、圖4。結(jié)果表明，黃芪多糖可調(diào)控放射性腸炎大鼠小腸黏膜組織AMPK通路關(guān)鍵蛋白的表達(dá)。

表3 各組大鼠小腸黏膜組織AMPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較Table 3 Comparison of the relative expression levels of AMPK pathway-related proteins in the small intestinal mucosa among various groups of rats （±s，n=3）

表3 各組大鼠小腸黏膜組織AMPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平比較Table 3 Comparison of the relative expression levels of AMPK pathway-related proteins in the small intestinal mucosa among various groups of rats （±s，n=3）

①P＜0.05，與正常組比較；②P＜0.05，與模型組比較；③P＜0.05，與黃芪多糖組比較；④P＜0.05，與復(fù)合物C組比較

組別正常組模型組黃芪多糖組復(fù)合物C組黃芪多糖+復(fù)合物C組F值P值p-AMPK蛋白相對(duì)表達(dá)量0.83±0.050.42±0.03①0.67±0.05②0.35±0.02②③0.55±0.04③④67.557＜0.001 AMPK蛋白相對(duì)表達(dá)量1.01±0.061.08±0.081.03±0.071.05±0.060.99±0.040.9100.494 p-mTOR蛋白相對(duì)表達(dá)量0.51±0.040.98±0.06①0.74±0.05②1.15±0.08②③0.86±0.06③④51.924＜0.001 mTOR蛋白相對(duì)表達(dá)量1.23±0.081.25±0.091.24±0.081.21±0.071.22±0.110.0990.980

圖4 各組p-AMPK、AMPK、p-mTOR、mTOR的Western Blot電泳圖Figure 4 Western Blot electropherograms of p-AMPK，AMPK，p-mTOR，mTOR in various groups of rats

3 討論

放射性腸炎是由于盆腔、腹膜、腹腔惡性腫瘤放療暴露引發(fā)的腸道炎癥反應(yīng)，約15%接受放療的患者出現(xiàn)慢性腸道疾病[9-10]。放射性腸炎的病理變化主要包括腸道上皮細(xì)胞、腺體細(xì)胞、血管內(nèi)皮細(xì)胞等受損，引起腸道黏膜炎性浸潤(rùn)水腫、壞死及纖維化。臨床上常見(jiàn)腹痛、腹瀉、便血、腸梗阻等癥狀，嚴(yán)重者可出現(xiàn)腸穿孔、腸瘺、毒血癥。放射性腸炎的發(fā)病機(jī)制主要是腸屏障損傷，包括機(jī)械屏障、免疫屏障、微生物屏障和化學(xué)屏障等，其中，腸道菌群在電離輻射引起的腸損傷的發(fā)展中起著關(guān)鍵作用[11]。腹盆腔放療后未分化細(xì)胞過(guò)度增生、變性及壞死，使腸絨毛表面的細(xì)胞供應(yīng)中斷，腸道微生物失調(diào)引起炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致腸上皮層缺失、腸道通透性增加和腸黏膜屏障功能受損[12]。因此，尋找低毒、溫和、高效可修復(fù)腸黏膜損傷的藥物對(duì)治療放射性腸炎具有重要意義。

黃芪為常見(jiàn)的“托毒排膿、斂瘡生肌”中藥，主要成分包括多糖、類(lèi)黃酮和皂苷等，具有免疫調(diào)節(jié)、抗炎、抗氧化及抗癌等藥理活性[13]。Dong 等[14]研究表明，黃芪多糖可以通過(guò)抑制脂多糖（LPS）刺激誘導(dǎo)的有絲分裂原激活蛋白激酶（MAPK）/核因子（NK）-κB 炎癥通路的激活而抑制炎性因子和趨化因子產(chǎn)生，減輕小鼠腸道炎癥反應(yīng)。Zhao等[15]研究顯示，黃芪多糖可抑制炎癥、加速細(xì)胞周期、促進(jìn)修復(fù)因子的分泌從而促進(jìn)傷口愈合。以上研究均證實(shí)黃芪多糖具有抗炎作用。本研究結(jié)果顯示，放射性腸炎大鼠經(jīng)黃芪多糖干預(yù)后，腸炎癥狀減輕、DAI降低、腸道黏膜通透性減小、小腸黏膜組織炎性因子IL-1β、TNF-α水平降低，且腸黏膜組織病理?yè)p傷程度顯著減輕，提示黃芪多糖可減輕炎癥反應(yīng)，對(duì)放射性腸炎大鼠腸黏膜損傷具有修復(fù)作用。

AMPK 是由催化性α 亞基和調(diào)節(jié)性β、γ 亞基組成的異源三聚體蛋白，發(fā)生缺血、低糖、缺氧等損傷時(shí)，AMPK信號(hào)通路迅速被激活，補(bǔ)充細(xì)胞的ATP供應(yīng)，是細(xì)胞的能量感受器，AMPK通路激活進(jìn)一步正向調(diào)控參與細(xì)胞ATP 供應(yīng)的其他信號(hào)通路，在維持腸道上皮細(xì)胞屏障功能中起重要作用[16-17]。mTOR 是AMPK 的下游信號(hào)分子，AMPK激活后可通過(guò)調(diào)控mTOR 的磷酸化水平抑制NFκB 炎性信號(hào)通路[18]。Yu 等[19]研究顯示，臭氧可通過(guò)激活A(yù)MPK 通路抑制組織因子觸發(fā)的腸缺血，修復(fù)小鼠腸黏膜損傷并有效改善化療性腸炎。Ma等[20]研究顯示，褪黑素通過(guò)激活A(yù)MPK 通路防止Th17/Treg 失衡而改善壞死性小腸結(jié)腸炎。本研究對(duì)放射性腸炎大鼠模型應(yīng)用黃芪多糖、AMPK通路抑制劑復(fù)合物C干預(yù)后檢測(cè)小腸黏膜組織AMPK通路相關(guān)蛋白表達(dá)水平，結(jié)果顯示，復(fù)合物C 下調(diào)p-AMPK 表達(dá)，上調(diào)p-mTOR 表達(dá)，抑制了AMPK信號(hào)通路的激活，黃芪多糖則呈現(xiàn)相反的作用效果，黃芪多糖、復(fù)合物C同時(shí)干預(yù)后，復(fù)合物C對(duì)AMPK通路的抑制作用被逆轉(zhuǎn)，提示黃芪多糖可通過(guò)調(diào)控AMPK 通路修復(fù)放射性腸炎大鼠的腸黏膜損傷。

綜上所述，黃芪多糖對(duì)放射性腸炎大鼠腸黏膜損傷有明顯的修復(fù)作用，可能與調(diào)控AMPK 信號(hào)通路相關(guān)蛋白的表達(dá)有關(guān)。本研究結(jié)果可為黃芪多糖相關(guān)藥物的研發(fā)及應(yīng)用于放射性腸炎的臨床治療提供基礎(chǔ)數(shù)據(jù)。