張世武，吳凱，張鈺坤，蔡霞，王佐，周進，許禮發(fā)

1.淮南東方醫(yī)院集團總院，a 檢驗科，b 內鏡中心，c 消化內科，淮南 232038；2.安徽理工大學第一附屬醫(yī)院，a 檢驗科，b 消化內科；3.安徽理工大學醫(yī)學院免疫教研室

幽門螺桿菌(H.pylori)是胃部感染最常見的病原體[1]。目前，我國的H.pylori感染率為40%～60%[2]。據(jù)報道，有效治療胃部H.pylori感染的主要方案是1種含質子泵抑制劑、鉍劑和2種抗菌藥物的四聯(lián)療法，其中抗菌藥物的治療是控制H.pylori感染的主要手段，我國近20年來抗菌藥物的廣泛使用和治療的不規(guī)范導致H.pylori的耐藥率逐年上升，在我國的不同地區(qū)也呈現(xiàn)明顯的地域差異。因此，對某一地區(qū)的H.pylori的常用抗菌藥物敏感性檢測與分析，并依據(jù)藥敏試驗結果指導合理用藥，具有重要的臨床價值。

1 資料與方法

1.1 標本來源 選取安徽理工大學第一附屬醫(yī)院和淮南東方醫(yī)院集團總院2020年10月1日至2021年5月31日因胃部不適門診進行胃鏡檢查的患者102例，年齡22～90歲，其中男性63例、女性39例。納入標準：有胃部不適，如腹脹、噯氣、反酸等；無消化道急腹癥；胃組織及胃黏膜完整；近1個月內未使用對H.pylori有治療作用的抗菌藥物及鉍劑等；14C呼氣試驗陽性患者；患者愿意采集胃黏膜組織標本進行H.pylori培養(yǎng)及藥敏試驗。本研究的標本采集已經通過淮南東方醫(yī)院集團總院醫(yī)學倫理委員會審批(批號：202010032)，并取得所有患者的知情同意。

1.2 主要試劑 專用的H.pylori分離培養(yǎng)基，主要成分為布氏肉湯、馬血清、萬古霉素、多黏菌素、三甲氧芐氨嘧啶(TMP)、兩性霉素B(珠海益民生物)；專用H.pylori藥敏實驗溶液，主要成分為布氏肉湯和馬血清[3],配套的藥敏微孔板(珠海益民生物)，5%羊血+MH瓊脂培養(yǎng)基(河南安圖生物)；質控菌株：幽門螺桿菌ATCC43504為陽性質控菌株，變異鏈球菌ATCC700294、表皮葡萄球菌ATCC12228為陰性質控菌株(上海北諾生物科技有限公司)。

1.3 試驗方法

1.3.1 H.pylori檢測方法 (1)非侵入性方法：使用14C呼氣試驗檢查：患者空腹2 h，將1粒14C標記的尿素膠囊用10～15 mL的涼開水服下，靜坐15 min后，打開集氣卡包裝，對著吹氣口吹氣，力度適中，一口氣盡量長，可以換氣，嚴禁倒吸氣。當二氧化碳(CO2)集氣卡指示孔中的指示劑由橙紅色轉變成黃色的時候，應停止吹起，如果在3 min之后仍然沒有變色，同樣停止吹起，把集氣卡插入配套儀器進行測試，檢測CO2吸收劑14C含量即可判斷感染H.pylori。(2)侵入性方法(快速脲酶試驗)：在內鏡下用無菌活檢鉗取距幽門3～5 cm胃黏膜組織2～3塊，快速置入H.pylori分離培養(yǎng)液中，蓋緊；即刻放入35～37 ℃恒溫箱培養(yǎng)48～72 h。在培養(yǎng)期間，逐日觀察培養(yǎng)液及濁度變化。培養(yǎng)48 h后，用無菌接菌環(huán)取2～3環(huán)進行革蘭染色、鏡檢，顯微鏡下可見革蘭陰性句號狀、螺旋狀，脲酶陽性、觸酶陽性，同時分離培養(yǎng)液渾濁變紅、濁度達到2 MCF，即鑒定是H.pylori。

1.3.2 H.pylori藥敏試驗 當H.pylori培養(yǎng)的濃度達到2 MCF后，取出H.pylori藥敏微孔板，取2 MCF H.pylori培養(yǎng)物10 μL加至藥敏培養(yǎng)液中混勻，再移液100 μL至微孔板中的每個藥敏孔。每孔加無菌礦物油2滴或貼不干膠膜，保持其微需氧，35～37 ℃恒溫培養(yǎng)48～72 h，藥敏的結果判斷依據(jù)試劑盒的結果解釋。采集的標本培養(yǎng)48 h后培養(yǎng)液有明顯的紫紅色顆粒，表明有H.pylori生長，當陽性培養(yǎng)物生長至高峰時進行藥敏試驗。

1.3.3 H.pylori感染診斷標準 將以下兩項標準均符合的患者確定為感染：(1)14C呼氣試驗檢查陽性；(2)快速脲酶試驗陽性。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS 22.0統(tǒng)計學軟件分析數(shù)據(jù)，計數(shù)資料用例數(shù)表示，耐藥率和敏感率用百分比表示，組間比較用χ2檢驗。P<0.05為差異統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 H.pylori培養(yǎng)的陽性率 本研究共統(tǒng)計合格實驗標本102例，H.pylori陽性標本65例，陽性率是63.7%，見表1。

表1 H.pylori陽性患者的性別、年齡及疾病類型

2.2 幽門螺桿菌對常規(guī)藥物敏感性 本研究培養(yǎng)的幽門螺桿菌共測試14種抗菌藥物的敏感性，見表2。

表2 幽門螺桿菌對常規(guī)藥物的敏感性情況

3 討論

全世界一半以上人口胃黏膜攜帶H.pylori，50%以上無癥狀為潛在感染，相當一部分發(fā)展中國家甚至達到80%[4]。截止2016年底，我國H.pylori的感染率是55.62%[5]，并且感染率有逐年增加的趨勢[6]。本研究中，H.pylori感染率為63.7%，比全國總感染率高出約8%，可能與當?shù)仫嬍沉晳T、衛(wèi)生狀況、經濟發(fā)展水平等因素有關[7]，本地區(qū)的人喜好生冷食物，愛吃動物內臟，確診感染幽門螺桿菌，多數(shù)人無法堅持規(guī)范徹底的治療，這都給幽門螺桿菌的傳播與感染提供便利。

依據(jù)最新中華醫(yī)學會相關要求和全國第五次幽門螺桿菌感染處理共識報告推薦含鉍劑的四聯(lián)療法即PPI+鉍劑+2種抗菌藥物。隨著抗菌藥物的大范圍使用，越來越多的幽門螺桿菌對抗菌藥物產生耐藥，并通過耐藥基因傳遞，感染耐藥性幽門螺桿菌比例開始提高。本研究通過監(jiān)測數(shù)據(jù)得知H.pylori對二代頭孢菌素耐藥率較高，達到49.23%，克拉霉素和甲硝唑分別為44.61%和47.69%，以克拉霉素為基礎的治療方案在全國各地治療幽門螺桿菌感染應用多年，造成幽門螺桿菌對克拉霉素的耐藥性越來越高，已經成為H.pylori感染不能完全治愈的重要影響原因。甲硝唑和替硝唑常引起消化道不良反應，其耐藥率均超過40%，不建議作為抗H.pylori藥物首選。左氧氟沙星和阿奇霉素的藥物敏感性也比以前大幅下降，臨床常用的阿莫西林耐藥率達到27.69%，這直接導致近三分之一的患者療效不佳。本研究結果表明，阿莫西林/克拉維酸、慶大霉素、多西霉素、呋喃唑酮對幽門螺桿菌有很好的敏感性。依據(jù)經驗用藥可以作為首選，但隨著H.pylori對抗菌藥物的敏感性逐年變化，經驗用藥治療H.pylori方案需根據(jù)當?shù)氐乃幬锩舾性囼灲Y果適時調整，優(yōu)化抗生素組合，制定個體化治療方案，才能明顯提高幽門螺桿菌的治愈率，這也是減少臨床H.pylori耐藥性產生的有效措施[8]。