王福財(cái) ， 王淑芳 ， 白天俊

(天祝縣動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心 ， 甘肅 天祝 733299)

岔口驛馬是我國(guó)擅走“胎里帶”對(duì)側(cè)步的優(yōu)良地方走馬品種[1]，產(chǎn)于甘肅省武威市天祝藏族自治縣。該地區(qū)是甘肅省九大牧區(qū)之一，轄區(qū)內(nèi)岔口驛馬和牛羊在同一草原混合放牧現(xiàn)象較為普遍。天?？h動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)施“天祝白牦牛疫病綜合防控技術(shù)研究推廣項(xiàng)目”時(shí),對(duì)天祝白牦牛血液原蟲(chóng)病傳播媒介進(jìn)行了調(diào)查，經(jīng)中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所鑒定，天?？h轄區(qū)內(nèi)有青海血蜱和銀盾革蜱2種蜱類生存繁殖，牛羊血液原蟲(chóng)病在天祝縣各鄉(xiāng)鎮(zhèn)均有不同程度感染。馬梨形蟲(chóng)病(Equine piroplasmosis，EP，又稱馬巴貝斯蟲(chóng)病、馬焦蟲(chóng)病)主要是由駑巴貝斯蟲(chóng)(Babesiacaballi,B.caballi)和馬泰勒蟲(chóng)(Theileriaequi,T.equi,又稱馬巴貝斯蟲(chóng)Babesiaequi,B.equi)寄生于馬紅細(xì)胞而引起的一種經(jīng)媒介蜱傳播的馬屬動(dòng)物血液原蟲(chóng)病[2-4]，通常表現(xiàn)為發(fā)熱、黃疸、貧血以及呼吸困難等癥狀[4-5],患馬瘦弱，影響生產(chǎn)性能，急性病例可引起持續(xù)的長(zhǎng)期感染[6],嚴(yán)重的可導(dǎo)致死亡[7]。該病廣泛分布于世界各地[5]，但尚未見(jiàn)岔口驛馬產(chǎn)區(qū)內(nèi)EP流行病學(xué)調(diào)查相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道。為掌握岔口驛馬產(chǎn)區(qū)內(nèi)EP感染情況，制定科學(xué)防控措施，本課題組對(duì)華藏寺鎮(zhèn)等16個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)養(yǎng)殖的岔口驛馬按照占養(yǎng)殖量約10%的比例，隨機(jī)采集馬血清510份，用ELISA方法進(jìn)行B.equi和B.caballi的抗體檢測(cè)，并對(duì)抗體陽(yáng)性率高的鄉(xiāng)鎮(zhèn)和養(yǎng)殖量最大的打柴溝鎮(zhèn)的馬匹進(jìn)行血液蟲(chóng)體檢查。

1 材料與方法

1.1 主要試劑 馬巴貝斯蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：EQB.e-1005)和馬駑巴比斯蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒(批號(hào)：EQB.c-1005)，均購(gòu)自Kernel.Inc公司，于2～8 ℃存儲(chǔ)備用。

1.2 主要儀器 酶標(biāo)儀、精密移液器、量筒量杯。

1.3 主要方法

1.3.1 樣品準(zhǔn)備 獸醫(yī)專業(yè)技術(shù)人員對(duì)16個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)共510匹馬空腹頸靜脈進(jìn)行無(wú)菌采血，完成采血后統(tǒng)一置于獸醫(yī)實(shí)驗(yàn)室室溫下自然析出血清，收集血清，-20 ℃冷凍保存待檢。待檢血清務(wù)必保證清亮,避免使用溶血以及被污染樣品。

1.3.2 試驗(yàn)準(zhǔn)備 在使用前所有試劑需恢復(fù)到室溫20～25 ℃，提前預(yù)熱恒溫孵育設(shè)備；用19體積的蒸餾水稀釋1體積的20×洗板液，得到1×洗板液；在血清稀釋板上使用樣品稀釋液將樣品血清稀釋40倍，備用；1份原液與24份酶標(biāo)稀釋液混合，得到酶標(biāo)工作液，使用前根據(jù)實(shí)際用量現(xiàn)用現(xiàn)配。

1.3.3 試驗(yàn)操作 試驗(yàn)前1 h將試劑盒從冷凍冰箱中取出回復(fù)室溫。采用馬巴貝斯蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒和馬駑巴貝斯蟲(chóng)抗體檢測(cè)試劑盒進(jìn)行檢測(cè)，按照試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟操作。

1.3.4 馬血液涂片鏡檢 天?？h每年的3～4月份、8～9月份是蜱蟲(chóng)爬上宿主體的季節(jié)。2021年3月份底，在全縣蜱蟲(chóng)較多且抗體檢測(cè)陽(yáng)性率最高的天堂、賽什斯2個(gè)鎮(zhèn)和岔口驛馬養(yǎng)殖規(guī)模最大的打柴溝鎮(zhèn)采集馬耳尖血推片120份，甲醇固定，染色鏡檢，同時(shí)統(tǒng)計(jì)感染率。血推片采樣以馬匹身上有蜱蟲(chóng)為主。

1.4 抗體檢測(cè)結(jié)果判斷標(biāo)準(zhǔn) 樣品S/P值=(樣品OD值÷陽(yáng)性對(duì)照OD值)×100%。有效性：陰性對(duì)照的S/P值必須<30%,陽(yáng)性對(duì)照的平均OD值必須≥0.4。陰性：樣品的S/P值<65%，樣品血清中抗體陰性。陽(yáng)性：樣品的S/P值>65%，樣品血清中抗體陽(yáng)性。

2 結(jié)果

2.1 抗體檢測(cè) 各鄉(xiāng)鎮(zhèn)的抗體檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表1。結(jié)果顯示，510份馬血清中檢測(cè)出B.equi抗體陽(yáng)性數(shù)為34份，陽(yáng)性率為6.67%；B.caballi抗體陽(yáng)性數(shù)為38份，陽(yáng)性率為7.45%。

表1 抗體檢測(cè)結(jié)果

2.2 血推片蟲(chóng)體鏡檢 蟲(chóng)體檢出情況見(jiàn)表2。120份血推片樣本中，B.equi蟲(chóng)體檢出樣品數(shù)為5份，蟲(chóng)體檢出率為4.17%，視野中蟲(chóng)體長(zhǎng)度小于紅細(xì)胞半徑，這是與其他血液原蟲(chóng)蟲(chóng)體區(qū)分的特征之一。80%蟲(chóng)體呈圓點(diǎn)狀，個(gè)別似橢圓狀，紅細(xì)胞里有1個(gè)或2個(gè)蟲(chóng)體。有蟲(chóng)體感染的血推片中，紅細(xì)胞染蟲(chóng)率約為35%左右。B.caballi蟲(chóng)體檢出樣品數(shù)為4份，蟲(chóng)體檢出率為3.33%，蟲(chóng)體長(zhǎng)度大于紅細(xì)胞半徑，多數(shù)呈梨形，多呈2個(gè)存在，多數(shù)平行排列。有蟲(chóng)體感染的血推片中，紅細(xì)胞染蟲(chóng)率達(dá)到20%左右。在天堂鎮(zhèn)的1份血液樣品中同時(shí)發(fā)現(xiàn)B.equi和B.caballi蟲(chóng)體。

表2 蟲(chóng)體檢出情況統(tǒng)計(jì)表

3 討論

3.1 據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道，EP廣泛分布于世界各地[5]，在甘肅省隴東南地區(qū)該病呈局域性流行[8]。新疆西部、吉林省東部等地抽樣檢測(cè)的抗體陽(yáng)性率(感染率)分別達(dá)到40%[9]、34%[10]。馬利青研究[11]發(fā)現(xiàn)，青海省海西地區(qū)EP廣泛傳播，抗體陽(yáng)性率為30.65%。本調(diào)查檢測(cè)結(jié)果顯示，岔口驛馬產(chǎn)區(qū)B.equi抗體陽(yáng)性率為6.67%，B.caballi抗體陽(yáng)性率為7.45%；血推片蟲(chóng)體檢查結(jié)果顯示，3個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)B.equi和B.caballi總檢出率分別為4.17%和3.33%。綜上所述，岔口驛馬產(chǎn)區(qū)內(nèi)馬群EP抗體陽(yáng)性率低于上述地區(qū)，16個(gè)鄉(xiāng)鎮(zhèn)中除毛藏鄉(xiāng)、炭山嶺鎮(zhèn)、石門(mén)鎮(zhèn)、祁連鎮(zhèn)、大紅溝鄉(xiāng)外，其他鄉(xiāng)鎮(zhèn)均有B.equi或B.caballi感染史或馬群中存在感染現(xiàn)象，但本次調(diào)查樣本數(shù)量有限，覆蓋面不夠，并不能完全代表本地區(qū)EP感染程度和流行情況，只表明該地區(qū)有EP感染現(xiàn)象，因此，針對(duì)不同季節(jié)、年齡、性別、畜別等感染規(guī)律和流行病學(xué)特點(diǎn)進(jìn)行調(diào)查研究十分必要，如全面掌握EP在岔口驛馬產(chǎn)區(qū)的感染和流行情況，還需要做進(jìn)一步深入研究。

3.2 岔口驛馬產(chǎn)區(qū)馬群有EP感染史或正在受EP感染，這與轄區(qū)內(nèi)革蜱活躍，岔口驛馬完全暴露在該病威脅的環(huán)境中等情形相吻合。近幾年，隨著馬產(chǎn)業(yè)和賽馬等傳統(tǒng)馬文化的發(fā)展，馬匹流動(dòng)頻繁，跨區(qū)域調(diào)運(yùn)、交易呈現(xiàn)頻發(fā)勢(shì)頭，跨區(qū)域參加各地藏區(qū)傳統(tǒng)賽馬會(huì)現(xiàn)象多見(jiàn)，也為該病的發(fā)生和傳播提供了可能。另外，有文獻(xiàn)報(bào)道稱EP也可經(jīng)胎盤(pán)感染，引起流產(chǎn)或胎兒感染[12]。

3.3 天?？h位于青藏、內(nèi)蒙、黃土三大高原交匯地帶，境內(nèi)海拔處于2 040～4 874 m，年降水量為260～630 mm，年平均氣溫為-1～1.3 ℃，無(wú)絕對(duì)無(wú)霜期，東西跨度大，南北狹長(zhǎng)，各鄉(xiāng)鎮(zhèn)氣候差異大，賽什斯、天堂等莫科片區(qū)鄉(xiāng)鎮(zhèn)氣候較溫暖濕潤(rùn)，尤其是天堂鎮(zhèn)，俗稱天?？h的“小江南”，適宜蜱蟲(chóng)生存繁殖，其傳播的牛羊血液原蟲(chóng)病較為嚴(yán)重，天祝牧區(qū)各種牲畜存在混牧現(xiàn)象，長(zhǎng)期以來(lái)因馬屬動(dòng)物疫病發(fā)生率低，廣大養(yǎng)殖戶馬匹預(yù)防性驅(qū)蟲(chóng)等防疫意識(shí)淡薄，致使馬群中受各種寄生蟲(chóng)侵襲，馬匹抵抗力下降，加上該病具有帶蟲(chóng)免疫現(xiàn)象[13]，有一定的隱蔽性，畜主很容易造成麻痹大意，為EP在該地區(qū)的傳播提供了便利條件。EP的地理分布與蜱的區(qū)系分布有關(guān)，蜱蟲(chóng)作為傳播媒介,在該病的流行中有著十分重要的作用。蜱蟲(chóng)種類眾多并且分布范圍較廣，有研究表明，有4個(gè)品種可在發(fā)病高峰期傳播，9個(gè)品種可在排卵時(shí)期傳播B.caballi[14]，EP的傳播流行取決于蜱的傳播能力，有文獻(xiàn)報(bào)道，隨著蜱蟲(chóng)活動(dòng)能力的下降,EP的流行也漸漸停止[15]。天?？h屬高寒牧區(qū)，每年3～4月份、8～9月份是蜱蟲(chóng)活躍期，充分了解蜱蟲(chóng)的生長(zhǎng)繁殖、感染規(guī)律、生長(zhǎng)分布規(guī)律等情況，對(duì)全面掌握EP感染和科學(xué)防控等有著非常重要的意義。在岔口驛馬EP綜合防控中分片區(qū)制定防控措施意義重大，可有效控制該病在岔口驛馬產(chǎn)區(qū)的傳播流行，減少養(yǎng)殖損失。不同片區(qū)有計(jì)劃地實(shí)行劃區(qū)輪牧、不同畜種間輪牧和計(jì)劃性休牧制度，可起到保護(hù)草場(chǎng)和減少感染的作用。如何采取控蜱、檢疫、預(yù)防性驅(qū)蟲(chóng)等綜合防控措施還需進(jìn)一步研究并試驗(yàn)推廣。