鐘 靜，焦春偉，梁慧嘉，鄭嬌吉，劉健文，謝意珍**

（1.廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司，廣東 廣州 510000；2.廣東粵微生物科技有限公司，廣東 肇慶 526000）

高脂血癥是一種血液中脂質(zhì)含量異常的慢性疾病，與脂肪肝、糖尿病及心血管疾病等的發(fā)生密切相關(guān)，對(duì)人類健康造成了極大威脅[1]。目前，國(guó)內(nèi)外多采用他汀類、貝特類及煙酸類等藥物來(lái)緩解高脂血癥所帶來(lái)的危害[2]，雖效果顯著，卻存在耐藥性、副作用及價(jià)格昂貴等缺點(diǎn)[3]。近年來(lái)，研究發(fā)現(xiàn)香菇（Lentinula edodes）、黑木耳 （Auricularia auricula）及灰樹(shù)花（Grifola frondosa）等食用菌具有良好的降血脂功效[4-6]，這為健康、低副作用降血脂藥物的研發(fā)帶來(lái)了良好前景。

白背木耳 （Auricularia polytricha） 為木耳科（Auriculariales） 木耳屬（Auricularia） 大型真菌，主要分布在熱帶和亞熱帶地區(qū)，其營(yíng)養(yǎng)成分豐富，具有降血脂、抗腫瘤及抗氧化等多種生物活性[7-9]?，F(xiàn)有研究多以白背木耳的栽培為主，相關(guān)生理活性研究缺乏，制約了白背木耳的高值化利用。以白背木耳水提物為研究對(duì)象，建立高脂飲食大鼠模型，通過(guò)測(cè)定其體重變化、血脂水平及肝臟組織形態(tài)等指標(biāo)，研究該提取物的降血脂功效，明確其應(yīng)用價(jià)值，為開(kāi)發(fā)功能性食品奠定理論基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 供試材料

白背木耳子實(shí)體由廣東粵微食用菌技術(shù)有限公司提供。

1.2 主要試劑與儀器

血清總膽固醇（total cholesterol，TC）、甘油三酯（triglyceride，TG）、低密度脂蛋白膽固醇（lowdensity lipoprotein cholesterol，LDL-C）、高密度脂蛋白膽固醇（high-density lipoprotein cholesterol，HDLC）、谷草轉(zhuǎn)氨酶 （aspartate aminotransferase，AST）、谷丙轉(zhuǎn)氨酶（alanine aminotransferase，ALT）、超氧化物歧化酶（superoxide dismutase，SOD）、3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶（3-hydroxy-3-methyl glutaryl coenzyme A reductase，HMGR）、脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）測(cè)定試劑盒，購(gòu)自深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司。

UV-1750紫外分光光度計(jì)，島津企業(yè)管理（中國(guó)）有限公司；BS-480全自動(dòng)生化分析儀，深圳邁瑞生物醫(yī)療電子股份有限公司；BJ-300A中藥粉碎機(jī)，德清拜杰電器有限公司；SI-0246渦旋混勻器，美國(guó)SI儀器公司；BS200S分析天平，北京賽多利斯天平有限公司；JJ1000型電子天平，江蘇常熟市雙杰測(cè)試儀器廠；RE-600A旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀，上海亞榮生化儀器廠；L535R臺(tái)式離心機(jī)，湖南湘儀離心機(jī)儀器有限公司。

1.3 試驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)SD雄性大鼠，體重180 g～200 g，數(shù)量130只，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)試驗(yàn)動(dòng)物中心 [許可證號(hào)：SYXK（粵2012-0122）]。大鼠飼養(yǎng)于廣東省試驗(yàn)動(dòng)物監(jiān)測(cè)所SPF級(jí)動(dòng)物房，溫度22℃～23℃，相對(duì)濕度50%～60%。

1.4 飼料

普通飼料：SPF級(jí)鼠料，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

高脂飼料配方：基礎(chǔ)飼料53%、蔗糖20.0%、豬油15%、膽固醇1.2%、膽酸鈉0.2%、酪蛋白10%、磷酸氫鈣0.6%、石粉0.4%，購(gòu)自廣東省醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心。

1.5 試驗(yàn)方法

1.5.1 白背木耳水提物的制備

用中藥粉碎機(jī)將白背木耳子實(shí)體粉碎成粉末，過(guò)40目篩。稱取適量白背木耳粉末，按料液比為1∶40加入蒸餾水，90℃浸提3 h，提取液經(jīng)紗布與超濾裝置過(guò)濾，除去雜質(zhì)；再用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將濾液濃縮為原體積的10%；最后經(jīng)噴霧干燥除去濃縮液中的水分，即得白背木耳提取物粉末。

1.5.2 動(dòng)物分組與給藥

根據(jù)體重將大鼠隨機(jī)分為5組，每組13只，具體分組、飼料飼喂及給藥方式見(jiàn)表1。

如表1所示，除CON組外，其他各組均以高脂飼料喂養(yǎng)。14天后檢測(cè)大鼠血脂水平，并將其與CON組的血脂水平相比較，若P＜0.05，則造模成功，開(kāi)始給藥。各組均按照0.1 mL·10-1g-1體重?fù)Q算灌胃體積，每天定時(shí)灌胃，連續(xù)灌胃4周，期間每2周稱量大鼠體重1次。所有大鼠均自由飲食、飲水。

1.5.3 樣本采集與保存

大鼠末次給藥后，禁食不禁水12 h，麻醉后心臟取血。采血后迅速解剖大鼠，分離心臟和肝臟組織，稱量其重量并記錄，計(jì)算臟器指數(shù)。將采集的血液于室溫靜置30 min，在4℃、4 000 r·min-1條件下離心10 min，取上層血清于-80℃條件下保存?zhèn)溆谩?/p>

肝臟組織稱重后放于-80℃保存?zhèn)溆谩ＥK器指數(shù)（D，g·100-1g-1）的計(jì)算公式為：

式中：m為臟器重量（g）；M為大鼠體重（g）。

1.5.4 血清血脂水平測(cè)定

運(yùn)用ELISA法測(cè)定大鼠TC、TG、LDL-C及HDLC水平，計(jì)算動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)（AI），計(jì)算公式為：

式中：T為血清總膽固醇TC水平（mmol·L-1）；H為高密度脂蛋白膽固醇HDL-C水平（mmol·L-1）。

1.5.5 血清、肝臟酶活力測(cè)定

血清酶活測(cè)定：運(yùn)用試劑盒檢測(cè)血清中LPL的活性，相關(guān)操作步驟嚴(yán)格按照試劑盒說(shuō)明書進(jìn)行。

肝臟酶活測(cè)定：取少量肝臟加入9倍體積的生理鹽水，于冰浴中充分勻漿，制成10%的肝臟勻漿液。用試劑盒測(cè)定勻漿液中HMGR水平。

1.5.6 蘇木精-伊紅染色

取大鼠肝臟組織，用10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，蘇木精-伊紅（hematoxylin-eosin，HE）染色，光學(xué)顯微鏡下觀察形態(tài)。

1.6 數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)與分析

所有試驗(yàn)數(shù)據(jù)均用Excel記錄，以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差（mean±SD） 表示。采用SPSS 26進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，組間比較采用One-way ANOVA法，P＜0.05表示組間差異顯著，P＜0.01表示組間差異極顯著。采用GraphPad Prism 7.00繪圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 白背木耳水提物對(duì)大鼠體重的影響

白背木耳水提物對(duì)大鼠體重的影響結(jié)果見(jiàn)圖1。

由圖1可知，試驗(yàn)開(kāi)始時(shí)，各組大鼠體重基本一致，組間無(wú)顯著性差異（P＞0.05）；隨試驗(yàn)進(jìn)行，各組大鼠體重均呈上升趨勢(shì)；試驗(yàn)結(jié)束時(shí)，MOD組大鼠體重增加 （188.00±21.00） g，比CON高16.85%，說(shuō)明高脂飲食會(huì)導(dǎo)致大鼠體重增加。補(bǔ)充白背木耳水提物后，除APEM組外，APEL組、APEH組大鼠體重較MOD組均下降；其中APEH組與MOD組存在極顯著差異（P<0.01）。由此說(shuō)明，白背木耳水提物對(duì)高脂飲食引起的體重增加具有一定緩解作用。

圖1 各組大鼠體重變化（A） 和總增重（B）Fig.1 The body weight change(A)and body weight gain(B)of rats in each group

2.2 白背木耳水提物對(duì)大鼠臟器指數(shù)的影響

動(dòng)物臟器指數(shù)常能反映受試動(dòng)物內(nèi)臟的病變情況和營(yíng)養(yǎng)狀態(tài)，當(dāng)接觸某些外來(lái)物質(zhì)常會(huì)使動(dòng)物的臟器受到影響，使臟器指數(shù)發(fā)生變化。APE對(duì)大鼠臟器指數(shù)的影響結(jié)果見(jiàn)表2。

由表2可知，各組大鼠心臟指數(shù)相差不大，而肝臟指數(shù)差異明顯。與CON組相比，MOD組肝臟指數(shù)極顯著升高（P<0.01），說(shuō)明高脂飲食會(huì)導(dǎo)致大鼠肝臟異常。與MOD組相比，APEH組肝臟指數(shù)顯著下降（P＜0.05），說(shuō)明高劑量的白背木耳水提物對(duì)大鼠高脂飲食引起的肝臟指數(shù)異常具有一定緩解作用。

表2 白背木耳水提物對(duì)大鼠臟器指數(shù)的影響Tab.2 Effect of Auricularia polytricha water extract on organ index of rats

2.3 白背木耳水提物對(duì)大鼠血脂水平的影響

對(duì)大鼠血清中TC、TG、LDL-C及HDL-C 4種指標(biāo)進(jìn)行了檢測(cè)，結(jié)果見(jiàn)表3。

由表3可知，與CON組相比，MOD組血清中TC、TG及LDL-C水平極顯著升高，而HDL-C水平極顯著降低，即判定高脂血癥大鼠模型造模成功。在TG水平上，與MOD組相比，3個(gè)劑量組的TG水平均降低，其中APEL、APEM組與MOD組差異極顯著；在LDL-C水平上，各劑量組與MOD組差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，其中APEM組與MOD組差異顯著，APEL組、APEH組與MOD組差異極顯著；在HDL-C水平上，APEM組、APEH組大鼠較MOD組明顯升高，且差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；各劑量組血清中TC水平較MOD組無(wú)明顯差異。

表3 白背木耳水提物對(duì)大鼠血脂水平的影響Tab.3 Effects of Auricularia polytricha water extract on blood fat level of rats

2.4 白背木耳水提物對(duì)大鼠動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)的影響

白背木耳水提物對(duì)大鼠AI的影響結(jié)果見(jiàn)圖2。

圖2 白背木耳水提物對(duì)大鼠AI的影響Fig.2 Effect of Auricularia polytricha water extract on arteriosclerosis index of rats

由圖2可知，與CON組相比，MOD組與各劑量APE組的AI極顯著升高，說(shuō)明血脂升高會(huì)增加動(dòng)脈粥樣硬化的可能性。與MOD組相比，APEL組、APEH組的AI分別降低34.98%、18.45%；其中APEL組的AI與MOD組差異顯著，表明APE能明顯降低血脂升高所致的動(dòng)脈粥樣硬化現(xiàn)象的發(fā)生。

2.5 白背木耳水提物對(duì)大鼠血清脂蛋白脂肪酶的影響

各組大鼠血清LPL活力見(jiàn)表4。

表4 白背木耳水提物對(duì)大鼠血清LPL的影響Tab.4 Effects of Auricularia polytricha water extract on LPL level of rats

由表4可知，MOD組血清LPL水平顯著低于CON組。經(jīng)不同劑量APE干預(yù)后，大鼠血清LPL水平均提高，其中APEL組、APEH組極顯著增加。由此說(shuō)明，高脂飲食會(huì)導(dǎo)致大鼠LPL活力降低，而經(jīng)白背木耳水提物干預(yù)后，該不良癥狀得到緩解。

2.6 白背木耳水提物對(duì)大鼠肝臟3-羥基-3-甲基戊二酰輔酶A還原酶的影響

大鼠肝臟HMGR水平見(jiàn)圖3。

由圖3可知，與CON組相比，MOD組HMGR水平顯著增加，說(shuō)明高脂飲食會(huì)引起肝臟中HMGR水平升高。與MOD組相比，各劑量試驗(yàn)組HMGR水平均降低，其中APEM組、APEH組與MOD組差異顯著，說(shuō)明白背木耳水提物能夠一定程度改善高脂飲食引起的HMGR水平升高現(xiàn)象。

圖3 白背木耳水提物對(duì)大鼠肝臟HMGR水平的影響Fig.3 Effect of Auricularia polytricha water extract on HMGR of rats in liver

2.7 白背木耳水提物對(duì)大鼠肝臟形態(tài)的影響

綜合上述分析結(jié)果發(fā)現(xiàn)，高劑量的白背木耳水提物具有較好的降血脂活性，因此運(yùn)用HE染色對(duì)其肝臟組織形態(tài)進(jìn)行觀察（200倍），見(jiàn)圖4。

圖4 白背木耳水提物對(duì)大鼠肝臟組織形態(tài)的影響Fig.4 Effect of Auricularia polytricha water extract on the histomorphology of the rat liver

如圖4所示，CON組肝小葉中央有血管，肝細(xì)胞以血管為中心向周圍呈放射狀排列，形成肝索，細(xì)胞排列緊密。MOD組肝組織結(jié)構(gòu)完好，可見(jiàn)肝小葉，肝索排列雜亂，肝細(xì)胞排列松散，細(xì)胞體積增大形成脂肪性空泡，胞漿疏松、淺染。APEH組肝小葉肝索排列呈放射狀，細(xì)胞較為緊密，未出現(xiàn)脂肪性空泡。

3 討論

高脂血癥是一種因機(jī)體脂代謝或轉(zhuǎn)運(yùn)異常而導(dǎo)致血漿或血清中脂質(zhì)水平過(guò)度升高的慢性疾病，其疾病特點(diǎn)為TC、TG及LDL-C水平升高，而HDL-C水平降低[10-11]。試驗(yàn)結(jié)果表明，白背木耳多糖能夠明顯緩解高血脂大鼠上述癥狀，使模型大鼠體重降低，甚至能恢復(fù)至與正常組大鼠無(wú)顯著性差異。說(shuō)明白背木耳提取物具有調(diào)節(jié)機(jī)體血脂水平的作用，能一定程度防止高脂血癥。

高脂血癥患者體內(nèi)血脂水平紊亂可能會(huì)誘發(fā)動(dòng)脈粥樣硬化，進(jìn)而引發(fā)腦卒中、冠心病及腎動(dòng)脈硬化等疾病[12]，因此動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)是預(yù)測(cè)、衡量動(dòng)脈硬化的有效指標(biāo)之一[13]。于美匯等[14]試驗(yàn)證明，黑木耳（Auricularia auricula） 提取物對(duì)高血脂小鼠的血脂水平異常現(xiàn)象具有良好的調(diào)節(jié)作用，同時(shí)能有效緩解小鼠動(dòng)脈粥樣硬化，其中高劑量組動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)降低約48.8%。秦健峰等[15]向高血脂小鼠灌胃善清金花茶，使其動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)降低約46.07%。本文中大鼠經(jīng)白背木耳多糖干預(yù)后，動(dòng)脈粥樣硬化指數(shù)有所降低，其中低劑量組下降最為明顯（約34.98%），與上述研究結(jié)果相似。

肝臟是機(jī)體脂代謝的重要器官，在多種酶作用下完成脂質(zhì)的攝取、轉(zhuǎn)運(yùn)、代謝及排泄等生理過(guò)程[16]。高脂飲食會(huì)引起健康大鼠肝臟指數(shù)顯著升高，肝臟組織形態(tài)病變，而經(jīng)一些具有降血脂活性的天然產(chǎn)物干預(yù)后，以上不良現(xiàn)象能得到較明顯的緩解[17-18]。在本研究中，經(jīng)白背木耳水提取物干預(yù)后，大鼠肝臟指數(shù)約降低2.96%；同時(shí)，高血脂大鼠肝臟組織形態(tài)有向正常組恢復(fù)的趨勢(shì)，提示白背木耳水提取物的降血脂作用可能與減輕肝損傷有關(guān)。進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，白背木耳水提取物對(duì)脂代謝相關(guān)的2種酶具有較好的調(diào)節(jié)作用。LPL是血漿蛋白代謝的關(guān)鍵酶，可提高LPL活性能明顯減少脂質(zhì)在肝臟中的積累，從而保護(hù)肝臟組織[19-20]。HMGR活性能反映出機(jī)體合成膽固醇和脂肪酸的能力。崔敬愛(ài)等[21]研究表明，樺褐孔菌（Inonotus obliquus） 多糖能有效抑制高血脂模型大鼠肝臟HMGR活力。一些對(duì)HGMR具有抑制作用的天然產(chǎn)物除能明顯降低肝臟細(xì)胞中膽固醇含量外，還能減少肝臟中脂滴的儲(chǔ)存[22]。本研究中結(jié)果顯示，白背木耳多糖能夠提高LPL水平而抑制HGMR活力，并明顯減少肝臟組織中的脂肪空泡，說(shuō)明白背木耳水提取物的護(hù)肝作用可能是由于其發(fā)揮了降血脂活性，但具體作用機(jī)制還需開(kāi)展進(jìn)一步深入研究。