尹平艷，楊 華，葉 凡，陳 煦，陸顯菊

（廣西壯族自治區(qū)環(huán)境保護(hù)科學(xué)研究院，廣西 南寧 530022）

多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺在我國(guó)使用較廣，撲虱靈主要用于水稻、蔬菜、茶葉和柑桔等作物的葉蟬、飛虱、粉虱和介殼蟲(chóng)等害蟲(chóng)的防治；速撲殺對(duì)多種蚧蟲(chóng)有高效，為柑橘的專(zhuān)門(mén)殺蚧劑[1-4]。目前，我國(guó)存在農(nóng)藥使用品種多、用量較大且農(nóng)藥科學(xué)用藥、環(huán)境保護(hù)意識(shí)較差等問(wèn)題，農(nóng)藥使用過(guò)程中會(huì)滲透到土壤、地下水和農(nóng)產(chǎn)品中，進(jìn)而通過(guò)食物鏈的傳遞，對(duì)環(huán)境和人們的健康造成潛在的、長(zhǎng)期的，甚至是嚴(yán)重的影響[5,6]。加強(qiáng)對(duì)土壤環(huán)境中農(nóng)藥殘留的監(jiān)測(cè)，進(jìn)而采取必要的措施，對(duì)新時(shí)期下中央提出的“建設(shè)社會(huì)主義新農(nóng)村”具有非常重要的意義。

現(xiàn)階段，有關(guān)土壤中多菌靈、啶蟲(chóng)脒等農(nóng)藥殘留的研究較少。經(jīng)查閱文獻(xiàn)，陳曦等[7]研究了高效液相色譜法測(cè)定西瓜及其種植土壤中多菌靈殘留研究檢驗(yàn)方法；譚華東[8]研究了QuEChERS/UPLC-MS/MS法快速測(cè)定土壤中吡蟲(chóng)啉、啶蟲(chóng)脒與阿維菌素殘留的分析方法。高效液相色譜法專(zhuān)屬性較低，易出現(xiàn)假陽(yáng)性檢測(cè)結(jié)果，且靈敏度較低，不適用于土壤中微量農(nóng)藥殘留的檢測(cè)；QuEChERS 提取速度快，但凈化效果較差，基質(zhì)干擾較大，且對(duì)色譜-質(zhì)譜系統(tǒng)影響較大。實(shí)驗(yàn)建立采用振蕩提取土壤中多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺4 種常用農(nóng)藥，凝膠凈化色譜法凈化后上液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀定性、定量檢測(cè)的分析方法。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器設(shè)備

AB Sciex Triple QuadTM5500 型三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜儀（美國(guó)艾伯塞斯公司）；島津LC-30A 型超高壓液相色譜系統(tǒng)（日本島津公司）；GPC 1000 型凝膠凈化色譜系統(tǒng)（北京萊伯泰科公司）；Quintix125D-1CN 型電子分析天平（德國(guó)賽多利斯公司）；Milli-Q direct 8 型超純水系統(tǒng)（美國(guó)密理博公司）；DSY-VI型水浴氮吹儀（北京東方精華苑公司）。

1.2 標(biāo)準(zhǔn)溶液和試劑

質(zhì)量濃度均為100μg·mL-1的多菌靈溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW（E）083201）、啶蟲(chóng)脒溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW（E）083206）、撲虱靈溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW（E）083326）、速撲殺溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)（GBW（E）083165），以上溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)均購(gòu)自北京普天同創(chuàng)生物科技有限公司。

丙酮、正己烷、乙腈、甲醇，均為色譜純，美國(guó)MERCK 公司；實(shí)驗(yàn)用水均為超純水（自制）；其他輔助試劑均為分析純，上?；瘜W(xué)試劑廠(chǎng)。

1.3 色譜、質(zhì)譜參數(shù)

1.3.1 色譜參數(shù)

分離柱為Waters Acquity UPLC BEH C18（規(guī)格：100mm（柱長(zhǎng)）×2.1mm（內(nèi)徑）, 1.7μm（填料粒徑））；流速：0.2mL·min-1；柱溫：35℃；進(jìn)樣體積：10μL；流動(dòng)相A：乙腈-甲醇溶液（V∶V=2∶1），流動(dòng)相B：0.1%甲酸水溶液，梯度洗脫。洗脫程序見(jiàn)表1。

表1 梯度洗脫條件Tab.1 Gradient elution conditions

1.3.2 質(zhì)譜參數(shù)

離子源為電噴霧離子源（ESI）；掃描方式：正離子模式（+）；離子源溫度：550℃；氣簾氣壓力：45Psi；輔助氣壓力：60Psi；離子噴霧電壓：5450V；霧化器壓力：45Psi；檢測(cè)模式：多反應(yīng)監(jiān)測(cè)（MRM）模式。

1.4 溶液配制

1.4.1 標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液的配制 精密移取“1.2”多菌靈溶液標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)，1.0mL，置于10mL 棕色量瓶中，加甲醇定容至標(biāo)線(xiàn)，搖勻，得多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液；同法配制啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液（多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液濃度均為10μg·mL-1）。

1.4.2 標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列溶液的配制 取“1.4.1”多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，分別精密移取適量，制備1mL 溶液中含多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺分別為0.01、0.05、0.1、0.5、5.0、10.0μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，加甲醇定容至標(biāo)線(xiàn)，搖勻，即得標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)系列溶液。

1.4.3 樣品溶液的配制

1.4.3.1 樣品預(yù)處理 隨機(jī)采集土壤樣品500g，置粉碎機(jī)中粉碎，粉碎后的樣品過(guò)85 目篩網(wǎng)，未過(guò)篩的土壤樣品，重新粉碎，直至全部過(guò)篩，粉碎后的樣品置廣口瓶中，冷藏（2～8℃）儲(chǔ)存。

1.4.3.2 樣品前處理 取“1.4.3.1”處理后的樣品15.0g，置于50mL 錐形瓶中，分別加入丙酮35mL，NH3·H2O 1.0mL，無(wú)水Na2SO4（除水劑）3.0g，渦旋1min，超聲提取20min；取出放冷，冷凍離心6min（轉(zhuǎn)速：1.0×104r·min-1），取上清液至GPC 凈化瓶中，設(shè)置GPC 參數(shù)如下：溶劑：丙酮∶甲醇（V∶V=3∶2）；色譜柱：Sephadex LH-20 色譜柱（250mm×5mm, 10μm）；流速：3.5mL·min-1, 收集800～2200s 的淋洗液；淋洗液氮吹至近干（水浴50℃），殘?jiān)?mL 丙酮溶解，0.45μm 濾膜濾過(guò)，即得。

2 結(jié)果與討論

2.1 前處理方法的選擇

因土壤基質(zhì)含有有機(jī)物、無(wú)機(jī)物等成分，基質(zhì)較為復(fù)雜，如提取后直接上機(jī)分析，基質(zhì)干擾嚴(yán)重，定量準(zhǔn)確度偏低，且容易造成色譜質(zhì)譜系統(tǒng)的污染。因此，需要對(duì)提取后的提取液進(jìn)行凈化。通常采用的凈化方法有固相萃取法和凝膠凈化色譜法等方法。實(shí)驗(yàn)分別選擇經(jīng)優(yōu)化后的固相萃取法和凝膠凈化色譜法，對(duì)加標(biāo)終點(diǎn)濃度為0.1μg·mL-1的加標(biāo)溶液進(jìn)行前處理，比較結(jié)果見(jiàn)表2。

表2 凈化方法回收率比較Tab.2 Comparison of recovery rate of purification methods

由表2 可知，選擇凝膠凈化色譜法具有更好的回收率。

2.2 MRM 方法的建立

精密移取“1.4.1”多菌靈標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液1.0mL，置于100mL 棕色量瓶中，加甲醇定容至標(biāo)線(xiàn)，搖勻，得多菌靈測(cè)試溶液。取上述溶液，設(shè)置質(zhì)譜掃描模式為Q1 Scan（全掃描模式），得多菌靈分子離子；再設(shè)置質(zhì)譜掃描模式為Product ion Scan（碎片離子模式），得到多菌靈分子離子對(duì)應(yīng)的碎片離子，根據(jù)掃描得到的碎片離子，選擇響應(yīng)較高的兩個(gè)，一個(gè)作為定量離子，另一個(gè)作為定性離子；最后根據(jù)選擇的離子對(duì)，分別進(jìn)行去簇電壓和碰撞能量的優(yōu)化，建立多菌靈的MRM 方法。同法建立啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺的MRM 方法，優(yōu)化結(jié)果見(jiàn)表3，4 種農(nóng)藥典型譜圖見(jiàn)圖1。

表3 MRM 優(yōu)化結(jié)果Tab.3 MRM optimization results

圖1 4 種農(nóng)藥典型譜圖Fig.1 Typical spectra of four pesticides

2.3 線(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、相關(guān)系數(shù)和檢測(cè)限

配制含多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺分別為0.01、0.05、0.1、0.5、5.0、10.0μg·mL-1的系列標(biāo)準(zhǔn)混合溶液，按“1.3”色譜和質(zhì)譜參數(shù)設(shè)定儀器，分別將上述溶液進(jìn)樣分析，以待測(cè)農(nóng)藥濃度為橫坐標(biāo)（X），響應(yīng)值為縱坐標(biāo)（Y）制作線(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，再以3 倍信噪比（S/N）計(jì)算檢測(cè)限，結(jié)果見(jiàn)表4。

表4 線(xiàn)性標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)、相關(guān)系數(shù)和檢測(cè)限Tab.4 Linear standard curve, correlation coefficient and detection limit

2.4 加標(biāo)回收率測(cè)試

分別制備含多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺終點(diǎn)加標(biāo)濃度為0.01、0.5 和10.0μg·mL-1的加標(biāo)測(cè)試溶液，每個(gè)濃度點(diǎn)制備3 份；按“1.3”色譜和質(zhì)譜參數(shù)設(shè)定儀器，分別將上述溶液進(jìn)樣分析，根據(jù)加入量和檢測(cè)結(jié)果計(jì)算加標(biāo)回收率。結(jié)果見(jiàn)表5。

表5 加標(biāo)回收率測(cè)試結(jié)果（%）Tab.5 Test results of spiked recovery

由表5 可知，樣品加標(biāo)回收率在86.1%～102.1%之間，表明該方法準(zhǔn)確度良好。

2.5 方法精密度測(cè)試

取“1.4.3.1”處理后的樣品15.0g，置于50mL 錐形瓶中，加入適量“1.4.1”4 種待測(cè)農(nóng)藥標(biāo)準(zhǔn)儲(chǔ)備溶液，后續(xù)按“1.4.3”進(jìn)行前處理，制備含多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺終點(diǎn)加標(biāo)濃度為0.1μg·mL-1的精密度測(cè)試溶液，同法平行制備6 份；按“1.3”色譜和質(zhì)譜參數(shù)設(shè)定儀器，分別將上述溶液進(jìn)樣分析，根據(jù)6 次檢測(cè)結(jié)果計(jì)算相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差（RSD）。結(jié)果為多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺精密度RSD 分別為3.7%、4.1%、2.5%和3.0%，表明該方法精密度良好。

3 結(jié)論

本文建立了采用振蕩提取土壤中多菌靈、啶蟲(chóng)脒、撲虱靈和速撲殺4 種常用農(nóng)藥，凝膠凈化色譜法凈化后上液相色譜-三重四級(jí)桿串聯(lián)質(zhì)譜質(zhì)譜儀定性、定量檢測(cè)的分析方法；分別考察了方法的線(xiàn)性、精密度等。結(jié)果證明，實(shí)驗(yàn)建立的方法具有準(zhǔn)確、快速等優(yōu)點(diǎn)，此方法適用于土壤中微量農(nóng)藥殘留的檢測(cè)，為農(nóng)藥施用的合理化和土壤環(huán)境保護(hù)提供技術(shù)參考。