肝細(xì)胞癌(HCC)是肝臟常見惡性腫瘤，多數(shù)HCC發(fā)現(xiàn)時已經(jīng)到晚期，預(yù)后不良。研究發(fā)現(xiàn)

，轉(zhuǎn)錄基因的異常表達(dá)可能發(fā)揮重要的作用。microRNAs(miRs)是長度22 nt的內(nèi)源性非編碼RNA，與靶基因相互作用后調(diào)控轉(zhuǎn)錄及轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)

。有報道稱，miR-106b作為促癌基因，可促進(jìn)食管癌細(xì)胞的增殖、侵襲，抑制凋亡

。另外研究發(fā)現(xiàn)，miR-106b在乳腺癌組織中高表達(dá)，與臨床病理參數(shù)相關(guān)

。miR-30a屬于miR-30家族，與乳腺癌、肝癌及肺癌的惡性生物學(xué)行為有關(guān)

。但miR-106b、miR-30a是否與HCC患者預(yù)后有關(guān)的文獻(xiàn)較少。本研究觀察HCC患者外周血清中miR-106b、miR-30a表達(dá)情況，及其與臨床特征、預(yù)后的關(guān)系，以期為HCC患者預(yù)后評估提供新指標(biāo)。

問卷回收經(jīng)篩查后，采用Epidata 3.1軟件錄入數(shù)據(jù)，導(dǎo)入SPSS18.0進(jìn)行統(tǒng)計分析。描述性統(tǒng)計分析采用頻數(shù)、百分比；知識部分答案有“是”“否”“不清楚”3個選項，回答正確得1分，錯誤或不清楚得0分；態(tài)度和行為部分答案采用5分制的Likert量表評定；考慮知識分?jǐn)?shù)呈偏態(tài)分布，采用秩和檢驗分析不同人口學(xué)特征下受訪者知識部分得分情況是否有顯著差異；采用Pearson相關(guān)法分析全科醫(yī)生抗生素相關(guān)知識、態(tài)度和行為之間的關(guān)系。顯著性水平α值設(shè)定為0.05。

1 資料與方法

1.1 一般資料 本研究上報南充市中心醫(yī)院倫理委員會批準(zhǔn)。選取2013年6月至2017年2月南充市中心醫(yī)院收治的接受手術(shù)治療的HCC患者160例為研究對象。其中男117例，女43例；年齡為41～71歲，平均(55.79±11.16)歲；(Ⅰ+Ⅱ)期105例，(Ⅲ+Ⅳ)期55例；高分化31例，中分化33例，低分化為96例；淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移：有95例，無65例；肝內(nèi)轉(zhuǎn)移：有89例，無71例；腫瘤直徑：≥5 cm 86例，<5 cm 74例；肝硬化：有121例，無39例；Child-Pugh分級：A級106例，B級40例，C級14例；腫瘤數(shù)目：≥3個123例，<3個37例。40例同期體檢的正常人群作為對照組，其中男25例，女性15例，年齡36～71歲，平均(55.13±13.09)歲。兩組人群性別、年齡比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義，具有可比性。

1.2 納入及排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①病理明確診斷HCC；②符合《原發(fā)性肝癌診療規(guī)范》診斷標(biāo)準(zhǔn)；③排除肝臟其他疾病；④未接受手術(shù)、放化療、靶向藥物治療等抗腫瘤相關(guān)治療；⑤臨床病理資料完整；⑥預(yù)測生存時間>6個月；⑦簽訂知情同意書。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并其他部位腫瘤；②合并其他肝臟其他腫瘤；③精神疾病患者。

中高職銜接“3+3”分段培養(yǎng)要取得較好的成效，政府、中職、高職、企業(yè)等合作多方必須對學(xué)生的培養(yǎng)全過程進(jìn)行有力監(jiān)控，只有這樣才能保障專業(yè)人才培養(yǎng)的質(zhì)量。但現(xiàn)實是中高職在分段培養(yǎng)過程中各自為營、互不干涉，中高職之間沒有相互監(jiān)控的舉措，中高職雙方?jīng)]有制定合理的政策制度評價和調(diào)控對方的人才培養(yǎng)過程，無法保障對方人才培養(yǎng)的質(zhì)量，將導(dǎo)致專業(yè)人才培養(yǎng)水平大打折扣。

2.4 HCC患者3年總生存率影響因素分析 以Child-Pugh分級、肝硬化、腫瘤直徑、組織分化類型、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AFP水平、門靜脈癌栓、腫瘤數(shù)目、TNM分期、miR-30a及miR-106b表達(dá)水平為自變量，以患者3年總生存率為因變量，結(jié)果表明，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、TNM分期(Ⅲ+Ⅳ)與miR-106b高表達(dá)水平是HCC患者隨訪3年期間預(yù)后不良的危險因素，而miR-30a高表達(dá)是保護(hù)性因素。見表3。

在評估刑事立法政策時，也應(yīng)當(dāng)按照刑事立法價值的三個層次的梯級結(jié)構(gòu)逐步逐層進(jìn)行。首先必須具有現(xiàn)實指導(dǎo)性和可行性，其次要有利于維持社會秩序，維護(hù)社會穩(wěn)定。而最終要評價這一政策是否更多地從社會個體的角度去考慮政策施行的目的性和有效性，有利于維護(hù)社會和諧。如果特定的刑事立法政策有助于社會秩序的維護(hù)和公民權(quán)利的保障，使人們在日常生活中具有安全感，對自己及家人的人身及財產(chǎn)方面沒有擔(dān)憂，能夠正常地開展日常生活和工作，社會管理井然有序地進(jìn)行，那么這樣的刑事立法政策就是一個“良策”，反之，則為“惡策”。

1.4 血清miR-30a、miR-106b檢測 兩組人群清晨空腹?fàn)顟B(tài)下采集外周血5 ml于抗凝管中，3 000 r/min離心20 min，取上層血清，-80℃保存。按miRNeasy Mini Kit提取分離試劑盒說明書進(jìn)行miRNA提取，分光光度計檢測其濃度及純度。按照cDNA合成試劑盒說明書合成cDNA，反應(yīng)體系10 μl：總RNA 7 μl，5×Prime Script Buffer 2 μl，Prime Script Enzyme Mix I 0.5 μl，RT Primer 0.5 μl，-20℃保存?zhèn)溆?。以U6作為內(nèi)參，進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)體系總體積20 μl：cDNA 4 μl，SYBR Premix Ex Taq Ⅱ 10 μl，PCR Forward Primer(10 μmol/L)0.8 μl，PCR Reverse Primer 0.8 μl(10 μmol/L)，Rnase-Free Water 4.4 μl，反應(yīng)條件：95℃預(yù)變性10 min，95℃ 15 s，60℃ 60 s，共40個循環(huán)。結(jié)果使用2

表示。引物序列見表1。根據(jù)miR-30a、miR-106b表達(dá)水平中位數(shù)，將HCC患者分為miR-30a低表達(dá)組、miR-30a高表達(dá)組，miR-106b低表達(dá)組、miR-106b高表達(dá)組。

1.5 隨訪 以患者出院日期作為隨訪起點，截止2020年10月1日，隨訪中位時間45.2(36.5～63.7)個月。失訪2例，失訪率2.5%。隨訪方式選擇電話、門診復(fù)查等。使用3年總生存率(OS)對患者進(jìn)行預(yù)后生存評價，OS是指從組織病理學(xué)確診日期至最后一次隨訪或死亡日期。

2.1 兩組人群血清miR-30a、miR-106b表達(dá)情況 HCC患者血清miR-30a表達(dá)水平(1.02±0.02)低于正常人群(5.18±0.05)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(

=33.64，

<0.01)；HCC患者血清miR-106b表達(dá)水平(2.65±0.35)高于正常人群(1.15±0.06)，差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(

=5.41，

<0.01)。

2 結(jié)果

2.3 不同血清miR-30a、miR-106b表達(dá)水平HCC患者的生存分析 miR-30a低表達(dá)組患者3年總生存率(39.8%)低于miR-30a高表達(dá)組(64.6%)(

=0.002)；miR-106b低表達(dá)組患者3年總生存率(75.8%)高于miR-106b高表達(dá)組(51.2%)(

=0.003)。見圖1。

2.2 HCC患者血清miR-30a、miR-106b表達(dá)與臨床病理特征的關(guān)系 HCC患者血清中miR-30a、miR-106b表達(dá)與患者腫瘤直徑、組織分化類型、肝內(nèi)轉(zhuǎn)移、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、AFP水平、門靜脈癌栓、腫瘤數(shù)目及TNM分期有顯著相關(guān)性(均

<0.05)。見表2。

贛南燈彩歌舞文化發(fā)展迅速，但是距離產(chǎn)業(yè)化還具有一定的差距。需要旅游開發(fā)者和管理者共同努力，實施多渠道、多角度的資源開發(fā)，建立旅游產(chǎn)品品牌效應(yīng)，體現(xiàn)產(chǎn)品背后的文化特征，以獲得民眾認(rèn)可。挖掘贛南燈彩歌舞品牌背后的文化元素，應(yīng)基于贛南燈彩歌舞內(nèi)容，將其拍攝成電影或者電視宣傳片，對民俗文化藝術(shù)和贛南物質(zhì)文化進(jìn)行宣傳與保護(hù)，促進(jìn)其良性發(fā)展。

1.3 主要試劑及儀器 Trizol試劑(廣東凱普生物科技公司)；DNA 提取、cDNA合成、半定量PCR試劑盒(美國Sigma公司)；PCR引物(武漢博士德生物工程有限公司)；倒置相差顯微鏡(上海美谷分子)；低溫高速離心機(長沙東旺實驗儀器有限公司)；ABI 7900PCR擴(kuò)增儀(上海美谷分子)。

3 討論

HCC的發(fā)生與多基因、多因素共同參與有關(guān)，早期易發(fā)生轉(zhuǎn)移，惡性程度高，其發(fā)病機制復(fù)雜。目前關(guān)于HCC預(yù)后評估尚無統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn)，AFP、分化程度、腫瘤大小、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移等均與預(yù)后有關(guān)，但無法通過上述諸因素準(zhǔn)確評估，因而尋找到有效的高敏感度和特異性的診斷和預(yù)后判斷因子，對準(zhǔn)確評估患者預(yù)后、延長患者生存期有重要的價值。

miRs是長度22nt的內(nèi)源性非編碼RNA，研究發(fā)現(xiàn)，多種miRNA在HCC組織或患者外周血中差異性表達(dá)，參與了腫瘤細(xì)胞的增殖、侵襲等生物學(xué)行為

。miR-30a的表達(dá)與腫瘤的發(fā)生和發(fā)展關(guān)系密切，在多種腫瘤中表達(dá)也明顯下調(diào)，推測其在不同類型惡性腫瘤中發(fā)揮抑癌或促癌效益不同

。miR-106b在多種腫瘤組織中差異性表達(dá)，與腫瘤的惡性生物學(xué)行為有關(guān)

。研究發(fā)現(xiàn)，miR-106b在非小細(xì)胞肺癌組織中高表達(dá)，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移有關(guān)

。另外研究顯示，肝癌組織高表達(dá)miR-106b，與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移密切相關(guān)

。本研究結(jié)果表明，HCC患者血清miR-30a表達(dá)水平低于正常人，而miR-106b表達(dá)水平高于正常人，說明miR-30a低表達(dá)和miR-106b高表達(dá)可能參與了HCC的發(fā)生、發(fā)展。進(jìn)一步分析其表達(dá)水平與患者臨床病理參數(shù)的關(guān)系，兩者的表達(dá)水平與腫瘤的惡性生物學(xué)行為有顯著相關(guān)性，說明腫瘤直徑越大、TNM分期越晚、淋巴結(jié)發(fā)生轉(zhuǎn)移及分化程度越低，miR-30a表達(dá)水平越低及miR-106b表達(dá)水平越高。研究表明，miRNA與癌細(xì)胞增殖、侵襲及轉(zhuǎn)移有關(guān)，有研究指出，miR-30a可通過Ras/Raf/MEK/ERK通路抑制肝癌細(xì)胞的增殖、侵襲及遷移能力。另外研究發(fā)現(xiàn)，miRNA-30a可通過失活PI3K通路抑制非小細(xì)胞肺癌的侵襲、轉(zhuǎn)移。Sun等研究發(fā)現(xiàn)，miR-106b可靶向DAB2促進(jìn)肝癌細(xì)胞的增強、侵襲等。我們推測miRNA-30a下調(diào)及miR-106b上調(diào)后可能通過調(diào)控一系列通路促進(jìn)了細(xì)胞的侵襲能力，臨床表現(xiàn)為惡性病理學(xué)特征，如淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移、低分化及周圍組織的侵襲等。

有文獻(xiàn)報道稱，miRNA可作為肝癌診斷及預(yù)后標(biāo)志物

。目前關(guān)于miR-30a、miR-106b與HCC患者預(yù)后的關(guān)系文獻(xiàn)報道較少，本研究對患者進(jìn)行了隨訪，結(jié)果顯示，miR-30a低表達(dá)組患者3年總生存率更低；miR-106b低表達(dá)組患者的3年總生存率更高，這表明miR-30a具有抑癌作用，miR-30a高表達(dá)能改善HCC患者預(yù)后，miR-106b低表達(dá)也具有改善HCC患者預(yù)后效應(yīng)；進(jìn)一步多因素Logistic回歸分析結(jié)果顯示，miR-106b高水平、miR-30a低水平是HCC患者預(yù)后不良的危險因素，提示miR-30a、miR-106b與患者的預(yù)后關(guān)系密切，在控制治療后的腫瘤的生物學(xué)行為中具有重要作用。

綜上所述，miR-30a、miR-106b在HCC組織中分別低表達(dá)、高表達(dá)，與腫瘤的進(jìn)展、預(yù)后有關(guān)，為HCC的診斷治療提供了思路。

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