韓鑫垚, 王金鑫, 張欣夢, 閆森博, 王 磊, 陳雨欣, 袁 敏

(佳木斯大學(xué)藥學(xué)院,黑龍江 佳木斯 154007)

0 引 言

近年來,人口老齡化形勢日漸嚴峻,皮膚抗衰老化妝品的開發(fā)成為研究熱點[1-2]?；瘜W(xué)制劑作為抗衰老劑不僅危害人體健康,同時也會對環(huán)境帶來負面影響。天然植物提取物中的活性成分具有良好的抗氧化性,同時具有抗敏性、毒副作用小、溫和、適應(yīng)面廣等優(yōu)點,引起世界各國醫(yī)藥與化妝品行業(yè)的關(guān)注。目前,已被開發(fā)作為抗衰老劑的天然植物有茶多酚、葡萄籽和蝦青素等[3-5]。

漢麻,為?？拼舐閷僖荒晟牟荼局参?在我國具有悠久的栽培歷史[6]。漢麻中主要含有大麻二酚(CBD)和四氫大麻酚[7]。四氫大麻酚具有致幻和成癮性,已被列入第一類精神藥品品種目錄管制。相反,大麻二酚不具備精神活性,其具有抗氧化、抗炎活性、抗抑郁、抗菌活性等療效,在醫(yī)藥產(chǎn)業(yè)及化妝品領(lǐng)域中具有重要應(yīng)用[8-9]。

研究不同漢麻提取物的皮膚抗衰老活性,通過測定CBD 晶體、CBD 廣 譜 油 和86.69%CBD 油 對透明質(zhì)酸酶、膠原蛋白酶和彈性蛋白酶的抑制率,從而分析其在抗衰老過程的作用。

1 實 驗

1.1 試劑與儀器

試劑:甲醇(天津大茂化學(xué)試劑廠);磷酸二氫鈉(天津大茂化學(xué)試劑廠);磷酸氫二鈉(天津大茂化學(xué)試劑廠);彈性蛋白酶(美國Sigma公司);膠原蛋白酶(美國Sigma公司);N-(3-[2-呋喃基]丙烯酰)-亮氨酰-甘氨酰-脯氨酰-丙氨酸(FALGPA,美國Sigma公司);牛血清白蛋白(美國Sigma公司);茶多酚(EGCG,美國Sigma 公司);N-琥珀?；? 三- 丙氨酸- 對硝基苯胺(SANA,美國Sigma 公司);透明質(zhì)酸酶(美國Sigma公司);透明質(zhì)酸(美國Sigma公司);CBD晶體(中升生物科技有限公司);CBD 廣譜油(中升生物科技有限公司);86.26%CBD 油;Tris-HCl緩沖鹽(上海阿拉丁生物科技有限公司)。

儀器:FC 型酶標儀(賽默飛世爾儀器有限公司);超聲清洗儀(上海豫明儀器有限公司);79-1磁力加熱攪拌器(山東鄴城華魯電熱儀器有限公司);電熱鼓風(fēng)干燥箱(南京儀器廠)。

1.2 漢麻提取物抑制透明質(zhì)酸酶實驗

在96孔板中,依次加入樣品溶液與透明質(zhì)酸酶溶液,磷酸緩沖液,透明質(zhì)酸鈉溶液,震蕩混勻,在37 ℃孵育45min,加入酸性白蛋白溶液。用酶標儀測定其在600 nm 處的吸光度。以EGCG 為陽性對照,每個樣品重復(fù)三次。

1.3 漢麻提取物抑制膠原蛋白酶實驗

在96孔板中,依次加入樣品溶液與膠原蛋白酶溶液,Tris-HCl緩沖液,震蕩混勻,在37 ℃孵育15min,加入FALGPA 溶液。用酶標儀測定其在345 nm 處的吸光度。以EGCG 為陽性對照,每個樣品重復(fù)三次。

1.4 漢麻提取物抑制彈性蛋白酶實驗

在96孔板中,依次加入樣品溶液與彈性蛋白酶溶液,Tris-HCl緩沖液,震蕩混勻,在37 ℃孵育15min;加入SANA 溶液,在37°C 恒溫箱中孵育20min后,用酶標儀測定其在410nm 處的吸光度。以EGCG 為陽性對照,每個樣品重復(fù)三次。

抑制率按下列公式計算:

式中,A樣品:樣品溶液、透明質(zhì)酸鈉(FALGPA,SANA)、磷酸緩沖液、透明質(zhì)酸(膠原蛋白、彈性蛋白)酶混合物的吸光度;A空白:透明質(zhì)酸鈉(FALGPA,SANA)溶液、磷酸緩沖液、透明質(zhì)酸(膠原蛋白、彈性蛋白)酶混合物的吸光度。

2 結(jié)果與討論

2.1 漢麻提取物對透明質(zhì)酸酶抑制效果研究

從天然植物中提取出的多酚類化合物,如茶多酚(EGCG),已被證實具有良好的抗氧化效果,能夠清除體內(nèi)自由基,抑制氧化反應(yīng)的發(fā)生,同時具有抗敏性,因而廣泛用于化妝品中。選用EGCG作為陽性藥物作為對照,評價不同漢麻提取物樣品的抗衰老活性。實驗結(jié)果表明,隨著濃度的增大,所有樣品對透明質(zhì)酸酶的抑制率均增大,當濃度為1.5mg/m L時,抑制率基本不再增加。當濃度為1.5 mg/m L 時,茶多酚、CBD 廣 譜 油、CBD 晶 體、86.69%CBD 油對透明質(zhì)酸酶的抑制率分別為89.336%,90.309%,93.513%,94.121%。與EGCG陽性對照相比得知,CBD 廣譜油、CBD 晶體、86.69%CBD 樣品對透明質(zhì)酸酶的抑制率大于茶多酚,其中86.69%CBD 油對酶的抑制效果最為明顯,說明漢麻提取物可有效抑制透明質(zhì)酸酶的活性,維持皮膚中透明質(zhì)酸的水平,從而避免皮膚中水分的流失、促進營養(yǎng)物質(zhì)與代謝廢物交換的過程。

圖1 不同漢麻提取物對透明質(zhì)酸酶的抑制活性

2.2 漢麻提取物對膠原蛋白酶抑制效果研究

隨著濃度的增大,所有樣品對膠原蛋白酶的抑制率均增大,當濃度為1.5 mg/m L 時,抑制率基本不再增加。當濃度為1.5mg/m L 時,茶多酚、86.69%CBD,CBD 晶體,CBD 廣譜油對膠原蛋白酶的抑制率分別為75.255%,83.481%,83.512%,84.311%。與EGCG 陽性對照相比得知,CBD晶體,CBD 廣譜油,86.69%CBD 油對膠原蛋白酶的抑制率大于茶多酚,其中CBD 廣譜油對酶的抑制效果最為明顯,說明漢麻提取物可有效抑制膠原蛋白酶的活性,維持皮膚中膠原蛋白的水平,增強皮膚的彈性和強度,保持皮膚的柔韌性。

2.3 漢麻提取物對彈性蛋白酶抑制效果研究

隨著濃度的增大,所有樣品對彈性蛋白酶的抑制率均增大,當濃度為1.5mg/m L時,抑制率基本不再增加。當濃度為1.5mg/m L 時,茶多酚,86.69%CBD,CBD 廣譜油,CBD 晶體對彈性蛋白酶的抑制率分別為69.231%,90.924%,95.423%,95.433%。與EGCG 陽性對照相比得知,CBD 晶體,CBD 廣譜油,86.69%CBD 油對彈性蛋白酶的抑制率大于茶多酚,其中CBD 晶體和CBD 廣譜油對酶的抑制效果均十分顯著,說明漢麻提取物可有效抑制彈性蛋白酶的活性,維持皮膚中彈性蛋白的水平,使皮膚富有彈性,延緩皮膚衰老過程。

圖2 不同漢麻提取物對膠原蛋白酶的抑制活性

圖3 不同漢麻提取物對彈性蛋白酶的抑制活性

3 結(jié) 論

主要探討了不同漢麻提取物,即CBD 晶體、CBD 廣 譜 油、86.69%CBD 油對 透 明 質(zhì) 酸 酶、膠 原蛋白酶及彈性蛋白酶的抑制作用。實驗結(jié)果表明漢麻提取物抗衰老效果顯著,能很好地抑制透明質(zhì)酸酶、膠原蛋白酶和彈性蛋白酶的活性,延緩皮膚衰老過程,未來將在醫(yī)療領(lǐng)域和化妝品領(lǐng)域有廣闊的應(yīng)用前景。