朱單瓅，婁賽煒，梁嘉怡，唐星宇，費(fèi) 絲，方幽文，葉雨蒙，張培云，劉 鵬，邢承華

(1.金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院 農(nóng)學(xué)院，浙江 金華 321017；2.浙江師范大學(xué) 植物學(xué)實(shí)驗(yàn)室，浙江 金華 321004)

0 引言

【研究意義】土雞又稱(chēng)柴雞，常放養(yǎng)于山野林間并加以粗飼喂養(yǎng)，具有較高的營(yíng)養(yǎng)和食用價(jià)值，廣受消費(fèi)者歡迎[1]。然而，我國(guó)土雞養(yǎng)殖存在技術(shù)體系不完善、飼料營(yíng)養(yǎng)配比缺乏標(biāo)準(zhǔn)等問(wèn)題，其肉營(yíng)養(yǎng)及適口性欠佳，雞肉品質(zhì)及經(jīng)濟(jì)價(jià)值仍具較大發(fā)展空間[2]。豆粕作為我國(guó)傳統(tǒng)土雞飼料的主要成分，其活性物質(zhì)大豆異黃酮(Soybean Isoflavone，SI)多以結(jié)合態(tài)存在[3]，在腸道消化過(guò)程中無(wú)法被直接吸收，而β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase)是一種能夠?qū)⒔Y(jié)合態(tài)SI轉(zhuǎn)化為具有生理活性的游離型苷元的水解酶，可提高SI的利用率[4]。大豆異黃酮具有抗氧化、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)等多種營(yíng)養(yǎng)生理功能。因此，研究豆粕對(duì)土雞生長(zhǎng)性能及抗氧化性能的影響，對(duì)土雞功能飼料的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用具有重要意義。【前人研究進(jìn)展】王錦湘[5]研究表明，飼糧中添加SI可提高生長(zhǎng)豬15～28 d的平均日增重，降低血漿丙二醛(MDA)含量水平，提高過(guò)氧化氫酶(CAT)活性并改善血清免疫指標(biāo)。胡勝蘭等[6]研究發(fā)現(xiàn)，添加SI可提高體外氧化應(yīng)激仔豬腸上皮細(xì)胞的抗氧化能力，并可通過(guò)調(diào)控相關(guān)信號(hào)通路抑制氧化應(yīng)激誘導(dǎo)細(xì)胞炎癥應(yīng)答。田何芳等[7]研究表明，在京粉1號(hào)蛋雞基礎(chǔ)飼糧的基礎(chǔ)上添加SI(10 mg/kg)，可提高雞蛋的蛋殼厚度和強(qiáng)度，并顯著增加雞血漿中的鈣、磷和谷胱甘肽過(guò)氧化物酶(GSH-Px)的含量。MORVARIDZADEH等[8]報(bào)道，采用β-葡萄糖苷酶處理豆粕有望提高畜禽對(duì)飼料的吸收率，激活生理代謝，促進(jìn)其生長(zhǎng)。【研究切入點(diǎn)】鮮見(jiàn)關(guān)于β-葡萄糖苷酶水解改良豆粕對(duì)土雞生長(zhǎng)性能及抗氧化性能影響的研究報(bào)道?！緮M解決的關(guān)鍵問(wèn)題】選擇婺農(nóng)土雞為研究對(duì)象，探明β-葡萄糖苷酶水解豆粕替換原豆粕不同比例飼喂婺農(nóng)土雞的生產(chǎn)性能、血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的變化，以期為功能飼料的開(kāi)發(fā)與應(yīng)用提供科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 土雞 選取體型適中、性狀優(yōu)良、健康無(wú)病的婺農(nóng)土雞雞仔32只，由金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物養(yǎng)護(hù)疾病診治實(shí)訓(xùn)中心提供。

1.1.2 豆粕與試劑 豆粕，購(gòu)自浙江金華；β-葡萄糖苷酶，購(gòu)自上海源葉生物科技有限公司；丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒，來(lái)自南京建成生物工程研究所。

1.1.3 儀器 離心機(jī)，購(gòu)自上海凌儀生物科技有限公司；酶標(biāo)儀，購(gòu)自帝肯(上海)貿(mào)易有限公司；恒溫水浴箱，購(gòu)自上海一恒科學(xué)儀器有限公司。

1.2 方法

1.2.1 飼料原料預(yù)處理 豆粕與酶比例為0.7 g∶4.0 mg，將酶溶于適量水中制成稀酶液，倒入豆粕中攪拌均勻，室溫下放置2 h后進(jìn)行水解，烘箱烘干，陰涼避光處貯存?zhèn)溆谩?/p>

1.2.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì) 試驗(yàn)于2021年5-7月在金華職業(yè)技術(shù)學(xué)院動(dòng)物養(yǎng)護(hù)疾病診治實(shí)訓(xùn)中心進(jìn)行，試驗(yàn)期42 d。選擇體重與發(fā)育時(shí)間一致且公母各半的婺農(nóng)土雞為研究對(duì)象，采用單因子分組設(shè)計(jì)，β-葡萄糖苷酶水解豆粕替換未水解豆粕(以下簡(jiǎn)稱(chēng)水解豆粕替換未水解豆粕)的比例共設(shè)4個(gè)處理，4次重復(fù)。CK，飼喂玉米-豆粕型基礎(chǔ)日糧(即不替換未水解豆粕)；T1，1/3替換未水解豆粕；T2，2/3替換未水解豆粕；T3，全部替換未水解豆粕。

1.2.3 飼養(yǎng)管理 對(duì)放養(yǎng)雞舍、雞籠、采食及飲水設(shè)備進(jìn)行清洗、消毒，按常規(guī)管理方法做好免疫工作。每日7:00喂料1次，自由采食、飲水，根據(jù)林草和昆蟲(chóng)資源情況制訂合理的人工補(bǔ)飼次數(shù)和數(shù)量，傍晚補(bǔ)飼。

1.2.4 指標(biāo)測(cè)定 分別于試驗(yàn)開(kāi)始前和試驗(yàn)結(jié)束時(shí)于早飼前空腹稱(chēng)重婺農(nóng)土雞始重(g)和終重(g)，計(jì)算統(tǒng)計(jì)期內(nèi)的日增重(ADG，g)、日采食量(ADFI，g)和料重比(F/G)。21 d和42 d時(shí)采用普通采血管翅靜脈采血5 mL，血清樣本于4℃保溫箱靜置，用于測(cè)定各組婺農(nóng)土雞血清生化指標(biāo)。參照文獻(xiàn)[9]的方法，采用丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)試劑盒測(cè)定婺農(nóng)土雞血清的MDA含量和SOD活性。

1.3 數(shù)據(jù)處理與分析

采用SPSS 22.0對(duì)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理與分析，以單因素方差分析法和Duncan法進(jìn)行顯著性差異分析(P<0.05)，用Origin 2021制圖。

2 結(jié)果與分析

2.1 不同處理婺農(nóng)土雞的生長(zhǎng)性能

從表1可知，改良豆粕不同處理婺農(nóng)土雞始重、終重和日增重等生長(zhǎng)性能存在差異。始重：各處理為386.09～386.72 g,處理間差異不顯著。終重：各處理為1 162.54～1 258.75 g，T2顯著大于CK，T1、T2、T3間和CK、T1、T3間差異不顯著。日增重：各處理為18.49～20.78 g,T2較CK顯著增重12.39%，T1、T2、T3間和CK、T1、T3間差異不顯著。日采食量：各處理為59.87～61.13 g,處理間差異不顯著。料重比：各處理為2.88～3.31,依次為CK>T1>T3>T2，處理間差異不顯著，T2較CK降低12.99%。表明，在婺農(nóng)土雞始重及日采食量基本相同的情況下，T2日增重最大，且效用優(yōu)于T1和T3。

表1 不同處理婺農(nóng)土雞的生長(zhǎng)性能

2.2 不同處理婺農(nóng)土雞血清的抗氧化性能

從圖1看出，改良豆粕不同處理婺農(nóng)土雞血清超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)含量的變化。

注：相同時(shí)間各處理不同小寫(xiě)字母表示差異顯著(P<0.05)。

2.2.1 超氧化物歧化酶(SOD)活性 21 d時(shí)，T2最大，為199.35 U/mL，CK最小，為167.12 U/mL；T2較CK顯著提高19.29%，T1、T2、T3間和CK、T1、T3間差異不顯著。42 d時(shí)，T2最大，為213.49 U/mL，CK最小，為179.03 U/mL；T2顯著大于其余處理，其余處理間差異不顯著。

2.2.2 丙二醛(MDA)含量 21 d時(shí)，各處理為3.51～4.01 μmol/L，T2較CK降低12.47%，各處理間差異不顯著。42 d時(shí)，各處理為3.36～3.92 μmol/L，T2較CK降低14.29%，CK顯著大于T2，T1、T2、T3間和CK、T1、T3間差異不顯著。

3 討論

大豆異黃酮(SI)是存在于豆科植物的一類(lèi)多酚化合物，具有抗氧化、促進(jìn)動(dòng)物生長(zhǎng)、增強(qiáng)機(jī)體免疫力及提高蛋白質(zhì)合成效率等多種營(yíng)養(yǎng)生理功能，用作飼料添加劑能夠?qū)η菪蟮纳a(chǎn)、生理性能產(chǎn)生積極影響[10-11]。豆粕中的結(jié)合型大豆異黃酮可在β-葡萄糖苷酶的作用下水解成游離型苷元[12]，從而提高其利用率。王一冰等[13]研究表明，基礎(chǔ)日糧中添加大豆異黃酮300 mg/kg飼喂110～140 日齡文昌雞，試驗(yàn)組生長(zhǎng)末重與平均日增重較對(duì)照組均顯著增加，料重比降低。林廈菁等[14]研究發(fā)現(xiàn)，添加大豆異黃酮能夠顯著提高斷奶仔豬的采食量和飼料轉(zhuǎn)化率，其后期作用更為明顯。周鈴鈴等[15]報(bào)道，用含8%高活性大豆異黃酮發(fā)酵豆粕替代普通豆粕，斷奶仔豬的增重及采食量顯著提高。研究結(jié)果表明，β-葡萄糖苷酶水解豆粕替換原豆粕不同比例處理中，各處理組婺農(nóng)土雞的生長(zhǎng)性能均有提升，2/3替換未水解豆粕農(nóng)土雞日增重最大和料重比最小，分別較CK提高12.39%和降低12.99%，與林廈菁等[14-15]的研究結(jié)果一致。表明，β-葡萄糖苷酶能夠通過(guò)水解豆粕中的結(jié)合型大豆異黃酮轉(zhuǎn)化為游離態(tài)的大豆異黃酮，促進(jìn)婺農(nóng)土雞吸收豆粕中的營(yíng)養(yǎng)成分；充分發(fā)揮大豆異黃酮具有的弱雌激素活性，一定程度上影響婺農(nóng)土雞內(nèi)分泌系統(tǒng)，推動(dòng)其垂體生長(zhǎng)素(GH)和睪酮生成釋放[16]，激發(fā)肌肉蛋白合成，協(xié)調(diào)脂肪蛋白比例[17]，最終表現(xiàn)為生長(zhǎng)速度加快[18]。

SOD參與平衡機(jī)體內(nèi)氧化與抗氧化過(guò)程，能快速清除細(xì)胞內(nèi)的氧自由基并修復(fù)受損的細(xì)胞組織，在機(jī)體氧化與抗氧化平衡中具有至關(guān)重要的作用[19]。MDA是氧自由基攻擊脂類(lèi)物質(zhì)分解后的產(chǎn)物之一，其含量可反映機(jī)體脂質(zhì)過(guò)氧化的程度[20]。王一冰等[21]研究發(fā)現(xiàn)，1～30日齡的清遠(yuǎn)麻雞飼糧中添加大豆異黃酮，仔雞血漿和空腸中總超氧化物歧化酶(T-SOD)活性顯著增加，MDA含量明顯降低。劉思彤等[22]研究大豆異黃酮對(duì)衰老小鼠肝臟抗氧化能力的作用發(fā)現(xiàn)，小鼠肝組織中相關(guān)抗氧化酶活性均明顯上升，MDA含量顯著降低。林廈菁等[23]研究大豆異黃酮對(duì)文昌雞血漿抗氧化指標(biāo)的影響表明，SI組的MDA濃度平均較CK降低12.3%。研究結(jié)果表明，β-葡萄糖苷酶水解豆粕替換原豆粕不同比例處理中，2/3替換未水解豆粕婺農(nóng)土雞血清SOD活性最高和MDA含量最低，分別較CK提高19.29%和降低14.29%，與王一冰等[21-23]的研究結(jié)果相近。因此，使用β-葡萄糖苷酶水解豆粕得到具有游離活性的大豆異黃酮，能夠促進(jìn)婺農(nóng)土雞對(duì)豆粕飼料營(yíng)養(yǎng)的吸收，提高SOD活性，緩解自由基通過(guò)奪取細(xì)胞和細(xì)胞膜上電子發(fā)生的氧化反應(yīng)，并細(xì)胞膜脂過(guò)氧化程度，減少M(fèi)DA的積累量，以緩解蛋白質(zhì)和核酸等生命大分子的交聯(lián)毒性，最終達(dá)到維持機(jī)體營(yíng)養(yǎng)平衡的效果。

4 結(jié)論

日糧中添加β-葡萄糖苷酶飼喂婺農(nóng)土雞，不同替換比例處理其生長(zhǎng)性能及抗氧化性能指標(biāo)呈正向響應(yīng)，2/3替換未水解豆粕婺農(nóng)土雞的平均日增重和血清SOD活性最高，分別較CK提高12.39%和19.29%，MDA含量最低，較CK降低14.29%。說(shuō)明，飼喂改良豆粕對(duì)促進(jìn)婺農(nóng)土雞生長(zhǎng)、提高其抗氧化能力具有一定的促進(jìn)作用，可作為一種功能飼料飼養(yǎng)婺農(nóng)土雞。