毛愛民 周麗 鄭硯超 李花 楊芝芬 周虹妤 金嘉旻

摘要：為了解生豬養(yǎng)殖場(chǎng)豬口蹄疫免疫情況及抗體水平變化規(guī)律，對(duì)無錫4個(gè)生產(chǎn)縣區(qū)隨機(jī)抽取7個(gè)豬場(chǎng)通過3、5、7、9、11月定期監(jiān)測(cè)方式，隨機(jī)采取不同年齡豬血樣，通過ELISA方法對(duì)樣品進(jìn)行豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)。檢測(cè)結(jié)果表明所抽豬場(chǎng)豬口蹄疫的平均抗體合格率為89.44 %，達(dá)到國(guó)家免疫合格率要求。但從個(gè)體看，部分豬場(chǎng)存在免疫合格率偏低情況。本文通過對(duì)監(jiān)測(cè)結(jié)果進(jìn)行分析，并從生物安全、防疫制度、人員培訓(xùn)等方面提出相關(guān)建議，科學(xué)、合理制定綜合防制方案，減少豬口蹄疫的發(fā)生和流行。

關(guān)鍵詞：口蹄疫 抗體 免疫效果

【中圖分類號(hào)】 S851 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306（2022）12--01

口蹄疫是口蹄疫病毒引起偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳播速度極快的烈性傳染病，也是世界上危害最嚴(yán)重的動(dòng)物傳染病之一。主要特征是在口腔粘膜、蹄部、乳房、皮膚出現(xiàn)水皰，繼而發(fā)生潰瘍的一類傳染病[1]。口蹄疫病毒為小DNA病毒科口蹄疫病毒屬，共有7個(gè)血清型，分別為O型、A型、C型、SAT1（南非1型）、SAT2（南非2型）、SAT3（南非3型）、Asia1（亞洲1型），該病感染性強(qiáng)、傳播途徑多、速度快、不易控制和消滅，曾多次在世界范圍內(nèi)暴發(fā)流行，造成巨大政治、經(jīng)濟(jì)損失。鑒于此，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類傳染病之首，我國(guó)規(guī)定為一類動(dòng)物疫病。該病最主要的直接傳染源是病豬、帶毒豬，尤以發(fā)病初期的病豬最為危險(xiǎn)，主要通過消化道、呼吸道、破損的皮膚、黏膜、眼結(jié)膜、人工輸精直接或間接傳播?？谔阋卟《拘投嗲乙鬃儺?，型與型之間的抗原性不同，血清型間無血清學(xué)交叉反映和交叉免疫現(xiàn)象，且同一血清型內(nèi)不同病毒間抗原性亦有變化[2]，給防疫工作帶來很大困難。

目前，我國(guó)口蹄疫防控主要靠免疫為主，為了解無錫地區(qū)部分豬場(chǎng)口蹄疫免疫情況和抗體水平，更好地指導(dǎo)實(shí)際疫病防控工作，2021年，對(duì)轄區(qū)內(nèi)4個(gè)生豬生產(chǎn)縣區(qū)A、B、C、D隨機(jī)抽取了7個(gè)豬場(chǎng)，分別于3、5、7、9、11月采集血清樣本進(jìn)行豬口蹄疫抗體檢測(cè)，分析免疫效果，提出相關(guān)建議，為提升無錫市豬口蹄疫防控水平提供一定參考依據(jù)。

1 材料與方法

1.1樣品來源

從無錫市4個(gè)生產(chǎn)縣區(qū)隨機(jī)抽取7個(gè)豬場(chǎng)采集血清樣品，共360份。其中，A區(qū)100份、B區(qū)110分、C區(qū)50份、D區(qū)100份。

1.2檢測(cè)試劑與器材

我市生豬口蹄疫免疫主要為O型口蹄疫合成肽疫苗、O型口蹄疫滅活疫苗，根據(jù)使用疫苗品種的不同，選擇相應(yīng)的抗體檢測(cè)試劑盒。

O型口蹄疫合成肽疫苗抗體檢測(cè)盒，產(chǎn)品名稱：豬O型口蹄疫合成肽結(jié)構(gòu)蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒，生產(chǎn)廠家：深圳芬德，生產(chǎn)批號(hào)：21002;O型口蹄疫滅活疫苗抗體檢測(cè)盒，產(chǎn)品名稱：O型口蹄疫ELISA診斷試劑盒，生產(chǎn)廠家：法國(guó)ID-VET，生產(chǎn)批號(hào)：F90。檢測(cè)儀器主要包括酶標(biāo)儀、離心機(jī)、洗板儀器、微量移液器等。

1.3檢測(cè)原理與方法

豬O型口蹄疫合成肽結(jié)構(gòu)蛋白ELISA抗體檢測(cè)試劑盒應(yīng)用ELISA原理檢測(cè)豬血清、豬血漿樣本中豬口蹄疫病毒O型抗體。實(shí)驗(yàn)室在酶標(biāo)板中加入對(duì)照血清和代檢樣本，經(jīng)溫育后若樣品中含有豬口蹄疫病毒O型抗體，則將與酶標(biāo)板上抗原結(jié)合，經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的其他成分后，再加入酶標(biāo)記物，與酶標(biāo)板上抗原抗體復(fù)合物發(fā)生特異性結(jié)合;再經(jīng)洗滌除去未結(jié)合的酶標(biāo)記物，在孔中加TMB底物液，與酶反應(yīng)形成藍(lán)色產(chǎn)物，顯色深淺與樣品中的特異性抗體含量成正相關(guān);加入終止液終止反應(yīng)后，產(chǎn)物變?yōu)辄S色;用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)測(cè)定各反應(yīng)孔中的吸光值，可知樣品是否含有口蹄疫病毒O型抗體。

按照說明書操作方法進(jìn)行檢測(cè)，當(dāng)樣品A值≥0.38為陽性，樣品A值在0.2到0.37之間為可疑，樣品A值<0.2為陰性。

O型口蹄疫滅活疫苗抗體檢測(cè)盒原理為反應(yīng)板微孔由非傳染性O(shè)亞型口蹄疫病毒抗原FMDV包被。在反應(yīng)板微孔加入待測(cè)樣本和對(duì)照，如果存在抗O亞型FMDV抗體，將形成抗原-抗體復(fù)合物從而覆蓋病毒表位。洗滌后，向微孔中加入抗O亞型-辣根過氧化物酶HRP標(biāo)記抗體，它與剩余的游離表位結(jié)合，形成抗原-美標(biāo)抗體復(fù)合物。通過洗滌去除過量的酶標(biāo)抗體后，加入底物溶液TMB。顯色反映取決于待測(cè)樣本中特異性的量。

2 結(jié)果與分析

2.1總體檢測(cè)情況

無錫市各地區(qū)豬口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果見表1?？傮w來看，無錫市抽檢的360份血清樣品中，有322份樣品豬口蹄疫抗體免疫合格，抗體合格率為89.44%，表明全市整體豬口蹄疫抗體免疫效果較好，豬群具有較強(qiáng)的群體免疫力。從每個(gè)地區(qū)抗體合格率來看，豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)合格率都在80%以上，且A區(qū)抗體檢測(cè)合格率相對(duì)較高，達(dá)到99.00%。

2.2各時(shí)間段檢測(cè)情況

無錫市各時(shí)間段豬口蹄疫抗體檢測(cè)結(jié)果見表2。3、5、7、9、11月份豬口蹄疫免疫抗體檢測(cè)合格率分別為74.29%、90%、98.75%、98.57%、85%，表明除了3月份，其他月份豬口蹄疫免疫效果整體處于較高于水平。

從檢測(cè)的數(shù)據(jù)看，雖然豬口蹄疫總體抗體水平高于80%，但從單個(gè)場(chǎng)來看，不同地區(qū)不同場(chǎng)之間抗體水平差異較大，個(gè)別豬場(chǎng)抗體水平偏低，說明有部分地區(qū)豬場(chǎng)防疫工作仍有待提升。經(jīng)分析，抗體水平偏低的原因可能是：1、抽檢的部分樣品不符合采樣要求，存在未及時(shí)開展免疫或未達(dá)到免疫保護(hù)期限。2、豬品種問題，自身對(duì)疫苗應(yīng)答水平偏低。3、因疫苗保存條件、使用劑量、注射方式等不夠科學(xué)、規(guī)范，導(dǎo)致免疫效果較差。

2.3不同疫苗檢測(cè)情況

對(duì)使用O型口蹄疫合成肽疫苗、O型口蹄疫滅活疫苗產(chǎn)生的抗體進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)結(jié)果見表3。從表中可以看出豬場(chǎng)使用O型口蹄疫合成肽疫苗產(chǎn)生的抗體水平要高于O型口蹄疫滅活疫苗產(chǎn)生的抗體，且保持較高的合格率。經(jīng)分析，除了和疫苗本身有關(guān)系，還和養(yǎng)殖場(chǎng)及時(shí)、科學(xué)開展O型口蹄疫免疫工作有較大關(guān)系。

3 結(jié)論

目前，口蹄疫病種被列入國(guó)家強(qiáng)制免疫病種之一，通過每年開展口蹄疫強(qiáng)制免疫工作，為口蹄疫科學(xué)防控夯實(shí)了基層，近年來，無錫總體疫情態(tài)勢(shì)平穩(wěn)。從2021年全市監(jiān)測(cè)的結(jié)果來看，總體水平較高，且處于相對(duì)穩(wěn)定狀態(tài)，無論使用O型口蹄疫合成肽疫苗還是O型口蹄疫滅活疫苗，都能獲得較好的保護(hù)率，但從個(gè)體來看，經(jīng)調(diào)查存在防疫主體意識(shí)有所淡化、免疫不及時(shí)、免疫不科學(xué)等問題，需加以重視，重點(diǎn)做好以下幾點(diǎn)工作：一是建立健全生物安全管理制度。一般情況下FMD 不像豬瘟、豬鏈球菌、大腸桿菌那樣，病原隱匿在各場(chǎng)的豬群中，而是從場(chǎng)外傳入。因此，限制乃至拒絕來自FMD一區(qū)的易感動(dòng)物及其副產(chǎn)品進(jìn)入非疫區(qū)，是控制FMD最有效的預(yù)防措施[1]。因此需要制定完善各項(xiàng)生物安全制度，做好防鳥、防鼠、防蟲以及消毒、人物料管控等工作，切斷傳染源和傳播途徑。二是制定科學(xué)規(guī)范的免疫制度。包括免疫程序、疫苗保管、定期監(jiān)測(cè)等，及時(shí)、科學(xué)掌握養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)免疫狀況，做到心中有數(shù)。特別近幾年來，國(guó)家、省市縣大力推行“先打后補(bǔ)”工作，當(dāng)前乃至今后更需要養(yǎng)殖場(chǎng)提高免疫意識(shí)和免疫水平。三是加強(qiáng)飼養(yǎng)、管理、技術(shù)人員培訓(xùn)工作。再好的制度沒有掌握要點(diǎn)的人去實(shí)行都是一紙空文，因此，有必要加強(qiáng)飼養(yǎng)、管理、技術(shù)等各崗位的人員培訓(xùn)，熟悉各項(xiàng)政策、規(guī)章制度并嚴(yán)格執(zhí)行，才能形成合力防范未然。

參考文獻(xiàn)：

[1]宣長(zhǎng)和，馬春全，陳志寶等. 豬病學(xué).中國(guó)農(nóng)業(yè)大學(xué)出版社， 2002， 199-207.

[2]宣長(zhǎng)和，張桂紅，于長(zhǎng)江等. 規(guī)?；i場(chǎng)疾病信號(hào)監(jiān)測(cè)診治辯證法一本通圖譜.中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)技術(shù)出版社， 2013， 219.