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        慶陽市引種栽培柴胡含量研究進(jìn)展

        2022-06-24 23:00:26賈佳琳孫花麗板小琪熊懿華張宏偉
        關(guān)鍵詞:高效液相色譜法柴胡中藥材

        賈佳琳 孫花麗 板小琪 熊懿華 張宏偉

        摘要:目的:通過高效液相色譜法(HPLC)測(cè)定柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的總含量,分析慶陽不同地域、不同生長年限對(duì)柴胡質(zhì)量的影響。方法:收集慶陽市不同地域不同生長年限的栽培柴胡藥材20批次,根據(jù)《中國藥典》2020年版一部中柴胡方法測(cè)定柴胡皂苷a、柴胡皂苷d的含量。結(jié)果:慶陽市內(nèi)不同種植區(qū)域,套種品種對(duì)柴胡中柴胡皂苷a、柴胡皂苷d總量影響不大,生長年限兩年半的柴胡含量明顯高于栽培一年半的柴胡。結(jié)論:為保證柴胡藥材的質(zhì)量,建議藥農(nóng)把柴胡的栽培年限提高到兩年半為宜,同時(shí)育種時(shí)應(yīng)避免與其他品種柴胡及野生柴胡發(fā)生雜交,引起質(zhì)量下降。

        關(guān)鍵詞:柴胡;中藥材;高效液相色譜法

        【中圖分類號(hào)】 R282.2 【文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼】 A? ? ? 【文章編號(hào)】2107-2306(2022)12--02

        ABSTRACT:OBJECTIVE:To determinethe total content of the saponins a and saponins d in Radix Bupleuri by HPLC,and the influence of quality difference and growth years of introduced Radix bupleurum in different areas of Qingyang were analyzed.METHODS:Twenty batches of Introduced Radix bupleurum with different growth years were collected from different areas of Qingyang,and the content of saponins a and saponins d were determined by Radix bupleurum method in Chinese Pharmacopoeia(2020 edition).RESULTS:In Qingyang,different planting areas and interplanting varieties had little effect on the total content of Saponin a and saponin d.The content of Radix bupleurum grown for two and a half years was significantly higher than that of Radix bupleurum grown for one and a half years.CONCLUSION:In order to ensure the quality of Radix Bupleuri,it is suggested that the growth years of Radix Bupleuri should be increased to two and a half years.At the same time,the quality of Radix Bupleuri taxocline should be avoided when breeding.

        《中國藥典》2020年版收載柴胡為傘形科植物柴胡(Bupleurum chinense DC.北柴胡)、狹葉柴胡(Bupleurum scorzonerifolium Willd.南柴胡)的干燥根,性微寒,味苦,具有疏散退熱,疏肝解郁,升舉陽氣的作用。[1]柴胡始載于《神農(nóng)本草經(jīng)》,在我國已有兩千多年的藥用歷史。各地供以藥用的除南、北柴胡外還有同屬20余個(gè)品種。[2]根據(jù)研究報(bào)道,柴胡含有多種化學(xué)成分,包含皂苷、揮發(fā)油、植物甾醇、木脂素、香豆素和脂肪酸等,其中柴胡皂苷、揮發(fā)油為柴胡的主要活性成分,也是目前評(píng)價(jià)柴胡質(zhì)量的主要指標(biāo)成分。[3]

        歷代記載柴胡的主要產(chǎn)區(qū)為陜西、河南,道地產(chǎn)區(qū)為陜西省榆林市。后柴胡產(chǎn)區(qū)逐漸擴(kuò)大至華東、華北、江南一帶。因柴胡野生資源減少,20世紀(jì)80年代初國內(nèi)已經(jīng)開展野生變家種試驗(yàn),主要選用北柴胡B.chinense栽培,河北、甘肅、山西、陜西成為主要種植區(qū),但各地柴胡質(zhì)量差異較大。[4]甘肅省慶陽市位于甘肅省最東部,陜甘寧三省交匯處,柴胡很早就開始引種。目前慶陽市柴胡品種主要有北柴胡、藏柴胡、紅柴胡、黑柴胡,其中北柴胡種植面積最大。2018年以來,柴胡藥材價(jià)格不斷上漲,市場(chǎng)價(jià)格約每公斤100-120元。經(jīng)濟(jì)效益明顯,種植量也日益增大,現(xiàn)慶陽市種植量可達(dá)到10萬畝,畝產(chǎn)60-80公斤,質(zhì)量優(yōu)良。同時(shí),慶陽境內(nèi)不同產(chǎn)地的柴胡之間,由于品種、產(chǎn)地、種植方式之間的差異,其質(zhì)量參差不齊。因此,對(duì)慶陽市柴胡進(jìn)行產(chǎn)量及質(zhì)量評(píng)價(jià),分析柴胡、藥材質(zhì)量現(xiàn)狀,對(duì)指導(dǎo)慶陽市大面積種植,保障人民用藥安全具有非常重要的現(xiàn)實(shí)意義。

        1. 儀器與材料

        安捷倫1260高效液相色譜儀,超聲波清洗儀(昆山KQ-600KDE)。乙腈(優(yōu)級(jí)純,德國默克、甲醇(色譜純,科密歐)、水為超純水(摩爾純水機(jī)制備)。

        柴胡皂苷a(批號(hào):110777-201510;來源:中檢院;含量:93.2%)柴胡皂苷d(批號(hào):110778-201912;來源:中檢院;含量:96.3%)。柴胡樣品20批次,收集于西峰、環(huán)縣、華池、鎮(zhèn)原、寧縣、合水、慶城、正寧,均為個(gè)子藥材,所有柴胡品種均經(jīng)張宏偉主管中藥師會(huì)同何登文主任藥師鑒定,具體情況見表1。

        2. 方法與結(jié)果

        2.1對(duì)照品的制備

        分別精密稱取柴胡皂苷a對(duì)照品0.01031g、0.00859g置20ml容量瓶中加甲醇定容至刻度,搖勻。分別精密稱取柴胡皂苷d對(duì)照品0.01181g、0.01035g置20ml容量瓶中加甲醇定容至刻度,搖勻。

        2.2供試品的制備

        取藥材粉末(過四號(hào)篩)約0.5g,精密稱定,置具塞錐形瓶中,加入含5%濃氨試液的甲醇溶液25ml,密塞,30℃水溫超聲處理(300W,40KHz)30分鐘,濾過,用甲醇20ml,分兩次洗滌容器及濾渣,洗液與濾液合并,回收溶劑至干。殘?jiān)蛹状既芙?,轉(zhuǎn)移至5ml量瓶中,加甲醇至刻度,搖勻,濾過,取續(xù)濾液作為供試品。

        2.3色譜條件

        色譜柱:安捷倫C18柱(4.6mm×250mm,5μm);流動(dòng)相:乙腈、水,梯度洗脫;流速1.0ml/min;檢測(cè)波長210nm;柱溫35℃。

        2.4標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備

        分別精密量取柴胡皂苷a(0.4804mg/ml)、柴胡皂苷d(0.5687mg/ml)對(duì)照品溶液2μl、5μl、10μl、15μl、20μl注入高效液相色譜儀,按上述色譜條件測(cè)定峰面積。以峰面積為縱坐標(biāo),單體皂苷量為橫坐標(biāo)繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線,得線性回歸方程。柴胡皂苷a的線性回歸方程為Y=6417.53X-2.24,R2=0.9997,在0.96~9.61μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好;柴胡皂苷d的線性回歸方程為Y=6705.34X+0.36,R2=0.9992,在1.14~11.37μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

        3. 方法學(xué)考察

        3.1精密度實(shí)驗(yàn)

        分別精密吸取胡皂苷a(0.4804mg/ml)、柴胡皂苷d(0.5687mg/ml)對(duì)照品溶液品10μl,重復(fù)進(jìn)樣5次,測(cè)定峰面積,兩種皂苷峰面積RSD均小于2%,結(jié)果表明色譜系統(tǒng)精密度良好。

        3.2重現(xiàn)性實(shí)驗(yàn)

        精密稱取柴胡樣品粉末約0.5g,平行制備5份樣品溶液,進(jìn)樣量10μl,測(cè)定柴胡皂苷a、d的含量,兩種成分的RSD均小于2%,表明方法重現(xiàn)性良好。

        3.3穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)

        取供試品溶液(序號(hào)6),按0、2、4、6、8、10、12小時(shí)進(jìn)樣,測(cè)定樣品溶液中柴胡皂苷a、d在12小時(shí)內(nèi)的峰面積變化,結(jié)果兩種成分的RSD均小于2%。表明樣品在12小時(shí)內(nèi)穩(wěn)定性良好。

        3.4加樣回收率實(shí)驗(yàn)

        取已知含量的柴胡樣品(序號(hào)6,柴胡皂苷a含量0.77%,柴胡皂苷d含量0.91%)5份,分別加入柴胡皂苷a(0.4804mg/ml)對(duì)照品4ml和柴胡皂苷d(0.5687mg/ml)對(duì)照品4ml,進(jìn)樣量10μl,測(cè)定柴胡皂苷a和d含量,結(jié)果平均加樣回收率分別為100.6%和98.7%,RSD分別為1.20%,1.87%。

        4. 樣品測(cè)定

        按照樣品溶液的制備方法分別制備不同樣品溶液,進(jìn)樣量10μl注入高效液相色譜儀。測(cè)定結(jié)果見表1,對(duì)照品色譜圖見圖1,供試品色譜圖見圖2。

        實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,在同等栽培年限下,北柴胡所含柴胡皂苷a和d的總量為最高。且慶陽市所產(chǎn)栽培北柴胡外皮紅棕色,個(gè)大、氣香,外觀質(zhì)量較其他栽培柴胡品種良好,產(chǎn)量也較為理想。栽培品不僅銷往全國各地,而且銷往國外,顯示了極好的推廣前景。

        5. 討論

        栽培柴胡顯示了極好的藥用和商品前景。今后,應(yīng)進(jìn)一步考察各種生態(tài)因素對(duì)標(biāo)示成分含量的影響,并觀察3代以后柴胡的質(zhì)量變化,制定出相應(yīng)的藥材質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)。同時(shí),還要考察栽培北柴胡與其他柴胡品種雜交引起的質(zhì)量降低情況,以便引導(dǎo)藥農(nóng)在留種時(shí),避免把北柴胡和其他品種栽培柴胡、野生柴胡的雜交種子當(dāng)作種子種植的情況發(fā)生。

        6. 結(jié)論

        慶陽市境內(nèi)不同分布區(qū)域?qū)康挠绊懸嗖淮螅鞣N套種農(nóng)作物對(duì)含量的影響不大,經(jīng)過研究栽培年限兩年半的柴胡,皂苷含量明顯高于栽培年限一年半的柴胡。為保證柴胡藥材的質(zhì)量,建議藥農(nóng)把柴胡的栽培年限提高到兩年半為宜。

        國家藥典委員會(huì).中華人民共和國藥典[S].北京:中國醫(yī)藥科技出版社,2020,293.

        潘勝利,李穎,戴克敏,云南省柴胡屬藥用植物的分類及其化學(xué)成分的研究[J].上海第一醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào),1984,11(1):1.

        趙香妍,劉長利.中藥柴胡的研究概況與發(fā)展趨勢(shì)[J].時(shí)珍國醫(yī)國藥,2015,26(4):963-966.

        于丹,吳軍凱,謝海龍,等.不同產(chǎn)地柴胡商品藥材的質(zhì)量評(píng)價(jià)研究[J].化學(xué)工程師,2020(2):25-27.

        基金項(xiàng)目:甘肅省2020年度藥品安全監(jiān)管科研項(xiàng)目(2020GSMPA029)

        作者簡介:賈佳琳(1989),女,主管中藥師,中藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)研究。

        通訊作者:張宏偉(1968),男,主管中藥師,中藥鑒定與資源。

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