譚金哲 鄢玲利 李貴星

Lewis血型系統(tǒng)抗體（簡稱Lewis抗體）多為天然產(chǎn)生，以IgM型為主，具有補(bǔ)體結(jié)合性質(zhì)，多數(shù)在37℃無反應(yīng)活性，而在室溫（20℃～24℃）可發(fā)生反應(yīng)[1]。近年來有較多文獻(xiàn)報道了[2-6]由于Lewis抗體導(dǎo)致胎兒新生兒溶血病與輸血反應(yīng)的病例。本實(shí)驗室檢測出一例在37℃下仍具有反應(yīng)活性的Lewis抗體，現(xiàn)將本例抗-Lea+抗-Leb抗體的分析、鑒定思路匯報如下。

材料與方法

1 病歷資料 患者，男，61歲。既往有輸血史，臨床診斷為上頜竇癌，需術(shù)前備血4單位紅細(xì)胞懸液，完善輸血前相關(guān)檢測時發(fā)現(xiàn)不規(guī)則抗體篩選結(jié)果為陽性，隨即進(jìn)行抗體鑒定和交叉配血試驗。

2 試劑與儀器 抗-A、抗-B試劑（上海血液生物醫(yī)藥有限責(zé)任公司，批號：20200508），ABO血型反定型紅細(xì)胞試劑（BIO-RAD，批號：45092791），伯樂抗體篩選紅細(xì)胞試劑（BIO-RAD，批號：45330751），安迪博特抗體篩選紅細(xì)胞試劑（安迪博特，批號：202011007），Rh分型卡（四川邁克，批號：0320041），抗-A1、抗-Lea、抗-Leb、抗-Jka、抗-Jkb、抗-Fya、抗-Fyb、抗-M、抗-N、抗-S和抗-s來自荷蘭Sanquin，血型檢測卡（BIO-RAD，批號：50093.96.52），Liss/coombs凝膠卡（BIO-RAD，批號：50531.60.17），Liss樣本稀釋液（BIO-RAD，批號：05761.00.11），紅細(xì)胞酸放散試劑（江蘇力博，批號：202012008），抗體鑒定譜細(xì)胞試劑（Sanquin，批號：8000451970），DTT試劑由本實(shí)驗室自制，微柱凝膠卡專用離心機(jī)（型號：ID-Centrifuge12 SII），孵箱（型號：ID-Centrifuge37 SI），全自動血型分析儀器（型號：IH-1000）。

3 方法

3.1 ABO/RhD血型檢測：利用全自動血型分析儀器對患者標(biāo)本進(jìn)行血型檢測。

3.2 不規(guī)則抗體篩查：用兩種不同廠商的抗體篩查細(xì)胞，分別進(jìn)行室溫試管法鹽水抗篩試驗以及37℃ Liss/Coombs凝膠卡抗篩試驗，具體操作方法按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[2]。

3.3 抗體鑒定：使用抗體鑒定譜細(xì)胞試劑對患者原血清進(jìn)行室溫鹽水抗體鑒定和37℃ Liss/Coombs凝膠卡抗體鑒定，具體操作方法按試劑說明書操作。

3.4 Lewis血型、Kidd血型、Duffy血型、MNS血型檢測：使用相應(yīng)的抗體試劑，采用試管法，按試劑說明書進(jìn)行檢測。

3.5 Rh血型：使用Rh血型分型卡，通過微柱凝膠法進(jìn)行檢測。

3.6 唾液中和試驗：使用ABO/RhD血型為A型RhD陽性，Lewis血型為Le（a-b+）分泌型的健康人唾液（來自本實(shí)驗室人員），進(jìn)行唾液中和試驗。經(jīng)唾液中和后的患者血清做抗體篩查和抗體鑒定試驗，具體操作方法按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[2]。

3.7 吸收放散試驗：選取O型Le（a+b-）紅細(xì)胞以及A型Le（a-b+）紅細(xì)胞分別和患者血清進(jìn)行吸收放散試驗，并對放散液中的抗體進(jìn)行檢測，具體操作方法按照《全國臨床檢驗操作規(guī)程》[2]。

3.8 抗體鑒定：再次使用抗體鑒定譜細(xì)胞試劑對DTT（0.01M）處理后的患者血清進(jìn)行室溫鹽水抗體鑒定和37℃ Liss/Coombs凝膠卡抗體鑒定，具體操作方法按試劑說明書操作。

結(jié) 果

1 患者血型 ABO/RhD血型鑒定結(jié)果：A型RhD陽性。

2 抗體篩查結(jié)果 兩種不同廠商的抗體篩查細(xì)胞在室溫和凝膠卡檢測結(jié)果均為陽性，結(jié)果顯示患者體內(nèi)存在IgM型和IgG型抗體，分別見表1和表2。

表1 患者標(biāo)本與安迪博特抗體篩選細(xì)胞的篩查結(jié)果

表2 患者標(biāo)本與伯樂抗體篩選細(xì)胞的篩查結(jié)果

3 抗體鑒定 室溫鹽水抗體鑒定和37℃ Liss/Coombs凝膠卡抗體鑒定結(jié)果不能排除抗-Lea、抗-Leb、抗-Fy3、抗-Fya、抗-Fyb、抗-Jkb、抗-M和抗-S，見表3～4。患者Lewis血型為Le（a-b-），Duffy血型為Fy（a+b-），Kidd血型為Jk（a+b+），MNS血型為M（+）N（+）S（-）s（+）。排除患者體內(nèi)存在抗-Fy3、抗-Fya、抗-Jkb和抗-M。

4 患者Rh血型為DCcEe 排除患者體內(nèi)存在抗-D、抗-C、抗-c、抗-E和抗-e。

5 唾液中和試驗 因分泌型的唾液里有I型的Lea和Leb抗原，我們選取Lewis血型為Le（a-b+）分泌型的健康人唾液，經(jīng)唾液中和后的患者血清做抗體篩查和抗體鑒定，結(jié)果全是陰性。推斷患者體內(nèi)存在抗-Lea+抗-Leb抗體，且排除患者體內(nèi)存在抗-Fyb和抗-S。

6 吸收放散試驗 選取O型Le（a+b-）紅細(xì)胞和患者血清進(jìn)行吸收放散試驗，把放散液和O型Le（a+b-）紅細(xì)胞以及A型Le（a-b+）紅細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果前者有反應(yīng)性，后者無反應(yīng)性；選取A型Le（a-b+）紅細(xì)胞和患者血清進(jìn)行吸收放散試驗，把放散液和A型Le（a-b+）紅細(xì)胞以及O型Le（a+b-）紅細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果前者有反應(yīng)性，后者無反應(yīng)性，通過以上吸收放散試驗驗證患者血清中存在抗-Lea+抗-Leb抗體，其中A型Le（a-b+）紅細(xì)胞和抗-A1反應(yīng)陽性。

7 抗體鑒定 用抗體鑒定譜細(xì)胞試劑對DTT（0.01M）處理后的患者血清在室溫鹽水中進(jìn)行檢測；再用抗體鑒定譜細(xì)胞試劑對DTT（0.01M）處理后的患者血清在37℃ Liss/Coombs凝膠卡中進(jìn)行檢測，結(jié)果經(jīng)DTT處理后的患者血清與譜細(xì)胞在室溫鹽水中的反應(yīng)性均為陰性，而在37℃ Liss/Coombs凝膠卡中與譜細(xì)胞具有反應(yīng)性。對兩次抗體鑒定結(jié)果進(jìn)行分析，結(jié)果顯示抗-Lea抗體為IgM型，而抗-Leb抗體為IgM型和IgG型，見表3～4。

表3 抗體鑒定細(xì)胞譜

討 論

Lewis血型抗原是一種較為常見的紅細(xì)胞膜外I型糖鏈抗原，ISBT在1998年確認(rèn)該抗原系統(tǒng)并命名為Le，系統(tǒng)編號為007，直至2019年，該系統(tǒng)已被確認(rèn)的抗原有6個。Lewis血型抗原的表達(dá)主要受到FUT2（Se）和FUT3（Le）基因的調(diào)控，編碼Lea和Leb兩種主要抗原，以及三種常見表型，Le（a-b+）、Le（a+b+）和Le（a-b-），其中，由于受到FUT2基因表達(dá)的影響，導(dǎo)致Le（a-b+）為分泌型，Le（a+b-）為非分泌型。Lewis抗原廣泛表達(dá)于血小板、內(nèi)皮細(xì)胞、腎臟以及泌尿生殖和胃腸道上皮細(xì)胞，紅細(xì)胞表面Lewis抗原是從血漿中吸附上去的，紅細(xì)胞本身不表達(dá)Lewis抗原[3]。抗-Lea抗體通常情況下是天然存在的，僅在表型為Le（a-b-）的人的血漿中存在，抗-Lea抗體以IgM型為主，僅存在IgG型的抗-Lea抗體的情況罕見[4-5]?？?Leb抗體與抗-Lea抗體的血清學(xué)特點(diǎn)較為相似，即抗-Leb抗體主要為IgM型，常在表型為Le（a-b-）的人的血漿中存在。大多數(shù)時候Lewis抗體在37℃條件下無活性，因此即使Lewis抗體很常見，但由抗-Lea抗體所致的溶血反應(yīng)卻極少見，而由抗-Leb抗體所致的溶血更加罕見[7]。截至目前，文獻(xiàn)報道由Lewis抗體引起的急/遲發(fā)型溶血性輸血反應(yīng)病例極少[8-11]。但東南亞人群 Lewis抗體效價強(qiáng)度遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于歐洲人，若輸注Lewis血型不符的紅細(xì)胞懸液，可能造成嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)[6]，因此部分Lewis抗體在臨床輸血中也具有臨床意義。

表4 DTT處理前后患者血清抗體鑒定結(jié)果

本例患者的Lewis血型為Le（a-b-） ，經(jīng)唾液中和試驗推斷出患者血清中存在罕見抗-Lea+抗-Leb抗體，且抗-Lea+抗-Leb抗體在37℃有反應(yīng)活性。我們選取O型Le（a+b-）紅細(xì)胞（來源于抗體篩選細(xì)胞）和患者血清進(jìn)行吸收放散試驗，把放散液和O型Le（a+b-）紅細(xì)胞以及A型Le（a-b+）紅細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果前者有反應(yīng)性，后者無反應(yīng)性，說明存在抗-Lea抗體，且不與Leb發(fā)生交叉反應(yīng)。由于抗-LebH抗體與H有交叉反應(yīng)，只與O型Le（a-b+）和A2型Le（a-b+）紅細(xì)胞反應(yīng)，不與A1或B型的Le（a-b+）紅細(xì)胞反應(yīng)，我們選取A型Le（a-b+）紅細(xì)胞和患者血清進(jìn)行吸收放散試驗，把放散液和A型Le（a-b+）紅細(xì)胞以及O型Le（a+b-）紅細(xì)胞反應(yīng)，結(jié)果前者有反應(yīng)性，后者無反應(yīng)性，說明存在抗-Leb抗體，且排除抗-LebH抗體。因此通過吸收放散試驗驗證患者血清中存在抗-Lea+抗-Leb抗體。而本例患者血清用試管法立即離心檢測出IgM型抗體，用Liss/coombs卡檢測出IgG型抗體，用患者原血清和DTT處理后患者血清分別進(jìn)行抗體鑒定，結(jié)果顯示抗-Lea抗體是IgM型，而抗-Leb抗體是IgM型和IgG型。

若在臨床上遇到體內(nèi)有罕見血型抗體的患者，在交叉配血不相合但又需輸血治療時，除抗體鑒定以外，還可采用相應(yīng)抗體試劑篩檢相應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞懸液，再進(jìn)行交叉配血試驗，這樣容易選擇與患者表型一致的血液成分。由于意外抗體可能出現(xiàn)迅速，為了盡早預(yù)防輸血反應(yīng)的發(fā)生并確保輸血安全，建議在患者距離上一次輸血超過24小時后再需要輸血時，應(yīng)重新采集血樣并完成抗體鑒定后再進(jìn)行交叉配血[11]。因此我們在臨床輸血工作中，遇到患者體內(nèi)有如本文所報道的罕見抗-Lea+抗-Leb抗體，要適時采用相應(yīng)的血清學(xué)試驗來進(jìn)行抗體鑒定，應(yīng)重視該抗體會引起交叉配血不相合，并影響臨床輸血效果。對于使用血清學(xué)方法檢出Lewis血型抗體患者，應(yīng)選擇相應(yīng)抗原陰性的紅細(xì)胞懸液供患者輸注，同時應(yīng)盡可能采用三種介質(zhì)交叉配血方法來保障臨床輸血安全。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突