邢義高 張秀濤 呂玲 王忠 高峰 雒猛

臍帶血是造血干細胞[1-2]的重要來源，是骨髓移植的替代治療方法之一，對于需要干細胞治療[3-5]的患者而言，公共臍血庫是移植干細胞的重要來源。在臨床應用中，臍帶血有核細胞總數（TNC）、CD34+細胞數量是影響臍帶血移植結果的重要指標[6-8]。本研究以山東省臍帶血造血干細胞庫2020年公共庫的臍帶血相關信息為統(tǒng)計資料，通過分析母嬰因素對臍帶血TNC、CD34+細胞數量的影響，探討母嬰因素對臍帶血TNC和CD34+細胞數量的預測意義。

材料與方法

1 研究對象 回顧性分析2020年1月1日～2020年12月31日山東省臍帶血造血干細胞庫制備的8 267份公共庫臍帶血，所有臍帶血均具有產婦簽署的書面捐獻知情同意書。

2 臍帶血采集 臍帶血是在完全無菌的條件下完成采集，采集結束后將產婦的外周血、胎兒臍帶血及臍帶血采集信息表放入臍帶血箱內（4～25℃），運送到山東省臍帶血造血干細胞庫，24 h內完成臍帶血的相關檢測和分離制備。

3 臍帶血檢測和分離凍存 利用酶聯(lián)免疫吸附試驗對采集的臍帶血和對應的母血進行檢測，檢測指標包括：乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒、艾滋病病毒、巨細胞病毒等，采用全自動血培養(yǎng)系統(tǒng)對臍帶血標本進行需氧菌和厭氧菌的檢測。

按照臍帶血體積∶6%羥乙基淀粉體積=5∶1的比例加入6%羥乙基淀粉，通過三步離心法完成臍帶血造血干細胞的分離，轉移到冷凍袋中，加入冷凍保護劑（DMSO∶右旋糖酐=1∶1），經程序降溫后，置于-196℃液氮中長期保存。

4 臍帶血的TNC和CD34+細胞數量檢測 使用五分類血細胞計數儀測定臍帶血的白細胞濃度（WBC），計數后根據TNC=WBC×體積（L），計算 TNC數量。

利用BD的流式細胞儀測定臍帶血中CD34+細胞占TNC數量的比率，根據公式：CD34+細胞數量=有核細胞總數×CD34+細胞占比。

5 統(tǒng)計學分析 采用SPSS 22.0統(tǒng)計軟件進行數據分析，非正態(tài)分布的數據采用中位數M（P25，P75）表示，在Spearman秩相關性分析的基礎上，結合多元線性回歸分析研究了母嬰因素對TNC、CD34+細胞數量的影響，P＜0.05表示差異有統(tǒng)計學意義。

結 果

1 傳染病檢測結果 8 267份臍帶血和對應母血的乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、梅毒、艾滋病病毒、巨細胞病毒等檢測均為陰性，臍帶血的需氧菌和厭氧菌的檢測均為陰性。

2 母嬰因素的統(tǒng)計信息和臍血特征 在8 267份臍帶血樣本中，產婦年齡的范圍是18～35歲，平均年齡為28歲；男孩4 078例（49.3%），女孩4 189例（50.7%）；順產共計5 410例（65.4%），剖宮產2 857例（34.6%）；血型統(tǒng)計中，B型例數最多，共2 729例（33.0%），AB型最少，共有883例（10.7%），A型和O型分別占比27.3%和29.0%；孕周的范圍為34～42周，孕周的平均值為39周，詳見表1。臍血體積的中位數為128.79（114.18，145.58）mL，TNC的中位數為12.33（11.0，14.45）×108，CD34+細胞數量的中位數為4.14（2.88，6.04）×106，詳見表2。

表1 母嬰因素的統(tǒng)計信息（n=8 267）

表2 臍血特征（n=8 267）

3 母嬰因素與TNC、CD34+細胞數量的相關性分析 產婦年齡與TNC、CD34+細胞數量均無顯著相關性；分娩方式對TNC具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），對CD34+細胞數量無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；孕周與TNC、CD34+細胞數量均具有顯著相關性（P＜0.05）；新生兒性別與TNC、CD34+細胞數量均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；新生兒血型與TNC、CD34+細胞數量均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；臍血體積與TNC、CD34+細胞數量均具有顯著相關性（P＜0.05）；TNC與CD34+細胞數量呈正相關性（r=0.458，P＜0.001）。見表3。

表3 母嬰因素對臍血質量參數的相關性分析（n=8 267）

4 母嬰因素對TNC、CD34+細胞數量的多元線性回歸分析 選取孕周、臍血體積、分娩方式、新生兒性別作為自變量，TNC作為因變量進行多元線性回歸分析，R2=0.234，說明孕周，臍血體積等自變量能解釋TNC變異的23.4%，F值為632.04，P＜0.001，這表明因變量TNC與四個自變量之間擬合程度較好；德賓-沃森指數為1.833接近2，可認為該模型無自相關性；四個自變量在模型中的顯著性檢驗結果P均小于0.05，證明四個自變量在模型中具有統(tǒng)計學意義，應當保留；此外四個自變量的VIF的值均遠小于10，所以各自變量之間不存在共線關系，擬合得到的多元線性回歸方程一為：

根據模型中的偏回歸系數可以得出四個自變量對因變量TNC影響程度強弱：分娩方式＞新生兒新生兒性別＞孕周＞臍血體積。

表4 母嬰因素對TNC. CD34+組胞數量的回歸結果（n=8 267）

選取孕周、臍血體積、分娩方式、新生兒性別、TNC作為自變量，CD34+細胞數量作為因變量進行多元線性回歸分析，R2=0.360，說明孕周、臍血體積等自變量能解釋CD34+細胞數量變化的36.0%，F值為929.53，P＜0.001，這說明因變量CD34+細胞數量與五個自變量之間擬合程度較好；德賓-沃森指數為2.307接近2，可認為該模型無自相關性；五個自變量在模型中的顯著性檢驗結果P均小于0.05，證明五個自變量在模型中具有統(tǒng)計學意義；此外五個自變量的VIF值均遠小于10，所以各自變量之間不存在共線關系，擬合得到的多元線性回歸方程二為：

根據建立的模型中的偏回歸系數可以得出，自變量孕周、臍血體積、新生兒性別每增加1，因變量CD34+細胞數量分別降低0.354×106、0.014×106、0.662×106，分娩方式、TNC每增加1，CD34+細胞數量分別升高0.179×106、0.585×106，五個自變量對因變量CD34+細胞數量影響程度強弱：新生兒性別＞TNC＞孕周＞分娩方式＞臍血體積。

討 論

臍帶血干細胞是臍帶血中的一類具有多向分化潛能的原始祖細胞[9]，具備自我更新和增殖的能力，在特定誘導條件下可以分化為所需的目的細胞或組織。與骨髓和外周血來源的干細胞相比較，臍帶血來源的干細胞具有移植物抗宿主病的發(fā)生率低、傳播感染的風險率低、造血祖細胞豐富、易收集等[10]優(yōu)勢。自1988年GLUCKMAN等[11]成功對一名范科尼貧血患兒進行臍帶血移植以來，臍帶血移植技術可治療的疾病已達80余種，包括鐮刀型紅細胞貧血、地中海貧血、再生障礙性貧血、免疫缺陷癥、遺傳性獲得性骨髓衰竭綜合征、腦癱、腦損傷和糖尿病等[12]。

本研究以8 267例臍帶血相關信息為統(tǒng)計資料，經Spearman秩相關性檢驗，產婦年齡、新生兒血型與TNC、CD34+細胞數量均無顯著相關性。賀晶等[13]研究結果表明，產婦年齡和CD34+細胞數量呈正相關，本研究與其結論不一致原因可能為本研究的樣本數據均來自山東省臍帶血造血干細胞庫的公共庫，公共庫的臍帶血捐獻對產婦年齡有明確的限定（18～35周歲），從而導致產婦年齡的分布存在局限性。分娩方式對TNC和CD34+細胞數量的影響具有統(tǒng)計學意義，根據擬合得到的多元線性回歸方程一、二可知，順產的TNC要高于剖宮產，與BEATA等[14]研究一致，其原因可能是順產通過應激反應或者壓力等因素導致臍帶血中的TNC升高；但是在本研究中剖宮產的CD34+細胞數量要高于順產。新生兒性別對TNC和CD34+細胞數量的影響具有統(tǒng)計學意義，根據多元線性回歸方程二可知新生兒性別對CD34+細胞數量的影響程度最大，并且男孩的CD34+細胞數量要高于女孩，該結果與BIJOU等[15]結論一致。孕周對TNC和CD34+細胞數量的影響具有統(tǒng)計學意義，但是孕周與TNC呈正相關性，與CD34+細胞數量呈負相關性，表明隨孕周的增加，CD34+細胞數量呈現下降趨勢。臍血體積對TNC和CD34+細胞數量均具有統(tǒng)計學意義（P＜0.05），隨臍血體積的增加，TNC呈現上升的趨勢，CD34+細胞數量呈現下降趨勢，但是根據多元線性方程一、二中臍血體積的偏回歸系數可知，與其他自變量相比，臍血體積對TNC和CD34+細胞數量的影響程度最弱。

綜上所述，分娩方式、新生兒性別、孕周、臍血體積與TNC和CD34+細胞數量均具有顯著相關性，并且可以根據多元線性回歸模型對臍血中的TNC和CD34+細胞數量進行預測，可為公共庫臍帶血的篩選提供參考；同時也為合理地利用臍帶庫資源，為臍帶血質量參數的影響因素分析積累一定的數據。但是本研究分析的母嬰因素有限，可能會導致結果存在偏倚，后續(xù)將會收集更加全面的母嬰因素信息進行深入分析。

利益沖突所有作者均聲明不存在利益沖突