王小玲 張霞 程秋鳳 王磊

(1聊城市人民醫(yī)院腦科醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科，山東 聊城 250000；2聊城市第三人民醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科)

帕金森病在老年群體中具有較高發(fā)病率，且部分患者存在一定程度認(rèn)知損害，若患者未及時(shí)得到有效干預(yù)，則隨病情進(jìn)展，多數(shù)患者可進(jìn)展為帕金森病癡呆〔1～3〕。隨臨床研究深入發(fā)現(xiàn)，表皮生長(zhǎng)因子(EGF)可促進(jìn)細(xì)胞有絲分裂，并參與神經(jīng)細(xì)胞等諸多細(xì)胞生長(zhǎng)與增殖、分化，且對(duì)神經(jīng)干細(xì)胞發(fā)育及增殖等具有調(diào)控作用，還可促使受損神經(jīng)功能恢復(fù)〔4,5〕。β淀粉樣蛋白(Aβ)1～42近些年已成為神經(jīng)系統(tǒng)退變性疾病生物學(xué)標(biāo)志物研究熱點(diǎn)，其自身可造成多巴胺(DA)神經(jīng)元進(jìn)行性變性，改變DA能神經(jīng)元形態(tài)，沉積于腦部皮層引發(fā)氧化應(yīng)激反應(yīng)、炎性級(jí)聯(lián)反應(yīng)，參與帕金森病發(fā)病及進(jìn)展〔6～8〕。而胱抑素(Cys)C為反映腎功能的重要指標(biāo)，新近研究發(fā)現(xiàn)其和諸多神經(jīng)系統(tǒng)病變具有關(guān)聯(lián)性，能調(diào)節(jié)半胱氨酸蛋白酶活性，參與炎性反應(yīng)，而神經(jīng)免疫炎癥為帕金森病重要發(fā)病機(jī)制，故認(rèn)為其與帕金森病也具有一定關(guān)聯(lián)性〔9～11〕。本研究探討老年帕金森病患者血清EGF、CysC、Aβ1～42表達(dá)變化及其與疾病分期、認(rèn)知障礙的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料 2017年2月至2019年12月聊城市人民醫(yī)院腦科醫(yī)院帕金森病患者116例設(shè)為研究組，另選取同期健康體檢者116例設(shè)為對(duì)照組。研究組男67例，女49例；年齡60～78歲，平均(69.03±4.30)歲；疾病分期：早期54例〔Hoehn-Yahr(H-Y)分級(jí)<3級(jí)〕，中晚期62例(H-Y分級(jí)≥3級(jí))；認(rèn)知狀況：伴認(rèn)知障礙73例〔蒙特利爾認(rèn)知評(píng)估(MoCA)量表評(píng)分<26分〕，無(wú)認(rèn)知障礙43例(MoCA評(píng)分≥26分)；受教育程度：小學(xué)及以下26例，中學(xué)56例，大專(zhuān)及以上34例。對(duì)照組男63例，女53例；年齡61～80歲，平均(70.39±4.61)歲；受教育程度：小學(xué)及以下23例，中學(xué)57例，大專(zhuān)及以上36例。兩組一般資料差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，本研究經(jīng)醫(yī)院倫理委員會(huì)審批通過(guò)。納入標(biāo)準(zhǔn)：(1)研究組符合《中國(guó)帕金森病治療指南(第三版)》〔12〕中帕金森病診療標(biāo)準(zhǔn)；(2)對(duì)照組MoCA評(píng)分≥26分；(3)知曉本研究，簽署同意書(shū)；(4)研究組既往未采取帕金森病相關(guān)治療藥物。排除標(biāo)準(zhǔn)：(1)合并其他神經(jīng)系統(tǒng)病變；(2)合并全身性感染性病變；(3)存在進(jìn)行性核上性麻痹、皮質(zhì)基底節(jié)變性等帕金森病疊加綜合征；(4)DA受體阻滯劑所致帕金森病綜合征及血管性帕金森病綜合征；(5)其他可造成認(rèn)知障礙的疾病，包括頭部外傷、藥物不良反應(yīng)、嚴(yán)重抑郁等。

1.2方法 入院后抽取所有受檢者外周靜脈血4 ml，離心取上清液(3 000 r/min，10 min)，離心半徑為4.5 cm，置于-20℃環(huán)境中儲(chǔ)存待檢，以美國(guó)Bio-RAD公司Bio-RAD550型酶標(biāo)儀經(jīng)酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定EGF、CysC、Aβ1～42水平；試劑盒購(gòu)于武漢博士德生物工程有限公司。

1.3觀察指標(biāo) (1)統(tǒng)計(jì)研究組與對(duì)照組血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(2)統(tǒng)計(jì)分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平與帕金森病間關(guān)聯(lián)性。(3)統(tǒng)計(jì)分析研究組不同疾病分期患者血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(4)統(tǒng)計(jì)分析研究組不同認(rèn)知障礙程度患者血清EGF、CysC、Aβ1～42水平。(5)統(tǒng)計(jì)分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平與疾病分期、認(rèn)知障礙間關(guān)聯(lián)性。(6)統(tǒng)計(jì)分析血清EGF、CysC、Aβ1～42水平對(duì)帕金森病單獨(dú)及聯(lián)合診斷效能。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS22.0軟件進(jìn)行t檢驗(yàn)、χ2檢驗(yàn)、Spearman相關(guān)分析，受試者工作特征(ROC)曲線探討血清各指標(biāo)單一與聯(lián)合檢測(cè)對(duì)帕金森病診斷效能。

2 結(jié) 果

2.1兩組血清指標(biāo)水平 研究組血清Aβ1～42、EGF水平明顯低于對(duì)照組，CysC水平明顯高于對(duì)照組(均P<0.001)。見(jiàn)表1。

表1 兩組血清指標(biāo)水平比較

2.2血清指標(biāo)與帕金森病關(guān)聯(lián)性 以帕金森病作為因變量，將Aβ1～42、EGF、CysC作為自變量，納入Logistic回歸分析模型，結(jié)果顯示，Aβ1～42、EGF、CysC與帕金森病具有顯著關(guān)聯(lián)性(P<0.001)。見(jiàn)表2。

表2 帕金森病影響因素的Logistic回歸分析

2.3不同疾病分期患者血清指標(biāo)水平比較 中晚期患者血清Aβ1～42、EGF水平明顯低于早期患者，CysC水平明顯高于早期患者(P<0.01，P<0.001)。見(jiàn)表3。

表3 不同疾病分期患者血清指標(biāo)水平比較

2.4不同認(rèn)知障礙程度患者血清指標(biāo)水平 伴認(rèn)知障礙患者血清Aβ1～42、EGF水平明顯低于無(wú)認(rèn)知障礙患者，CysC水平明顯高于無(wú)認(rèn)知障礙患者(均P<0.001)。見(jiàn)表4。

表4 不同認(rèn)知障礙程度患者血清指標(biāo)水平比較

2.5血清指標(biāo)與疾病分期、認(rèn)知障礙間關(guān)聯(lián)性 血清Aβ1～42、EGF水平與疾病分期、認(rèn)知障礙呈負(fù)相關(guān)，CysC水平與疾病分期、認(rèn)知障礙呈正相關(guān)(均P<0.001)。見(jiàn)表5。

表5 血清指標(biāo)與疾病分期、認(rèn)知障礙間關(guān)聯(lián)性分析

2.6血清指標(biāo)單獨(dú)及聯(lián)合診斷效能 各指標(biāo)聯(lián)合診斷AUC為0.892，95%CI為0.845～0.929，當(dāng)Aβ1～42截?cái)嘀怠?.01 ng/ml、EGF≤886.17 ng/L、CysC>0.98 mg/L，其聯(lián)合診斷敏感度為86.21%、特異度為81.90%，見(jiàn)表6、圖1。

表6 血清指標(biāo)單獨(dú)及聯(lián)合診斷帕金森病效能

圖1 單獨(dú)及聯(lián)合診斷帕金森病ROC曲線

3 討 論

帕金森病具有較高發(fā)病率，其致病因素復(fù)雜，與遺傳、環(huán)境及年齡等均具有密切關(guān)聯(lián)性，且細(xì)胞凋亡、鈣離子超載、興奮性氨基酸毒性、免疫異常、炎癥反應(yīng)、氧化應(yīng)激、線粒體功能異常等均參與了疾病發(fā)生及進(jìn)展〔13～15〕。同時(shí)，帕金森病患者隨病程延長(zhǎng)及臨床分期增高，通常會(huì)發(fā)生不同程度認(rèn)知障礙，對(duì)其日常生活構(gòu)成影響。

帕金森病患者DA神經(jīng)元變性丟失，額葉和基底核間皮質(zhì)-皮質(zhì)下DA環(huán)路顯著受損，紋狀體DA耗竭，可能為帕金森病患者發(fā)生認(rèn)知功能障礙的重要病理基礎(chǔ)〔16,17〕。正常生理狀態(tài)下，腦內(nèi)Aβ生成、降解維持動(dòng)態(tài)平衡狀態(tài)，血腦屏障中Aβ可利用外向轉(zhuǎn)運(yùn)及內(nèi)向轉(zhuǎn)運(yùn)維持外周血、腦部Aβ含量平衡〔18〕。相關(guān)研究指出，若編碼APP基因發(fā)生突變及其他因素造成β-分泌酶活性顯著增高，則APP易被γ-分泌酶及β-分泌酶一同切割形成Aβ，主要包括Aβ1～42與Aβ1～40兩種形式〔19,20〕。Aβ1～42亞型含量雖少于Aβ1～40，但聚集性和神經(jīng)毒性均更強(qiáng)，其神經(jīng)毒性作用主要參與細(xì)胞凋亡、細(xì)胞中鈣穩(wěn)態(tài)失衡、氧自由基代謝等。α-突觸核蛋白(Syn)和帕金森病間關(guān)聯(lián)性研究較早，其病理性聚集、錯(cuò)誤折疊可形成路易小體，最終造成細(xì)胞凋亡。而Cheng等〔21〕研究表明，α-Syn異常聚集可造成突觸損傷與功能異常，而可溶性Aβ較纖維狀A(yù)β引發(fā)上述病理變化的風(fēng)險(xiǎn)更大，且Aβ1～42和α-Syn聚集、α-Syn過(guò)磷酸化關(guān)系密切。Clinton等〔22〕協(xié)同作用加劇突觸損傷，致使疾病進(jìn)展性加劇。另有研究證實(shí)，Aβ1～42和α-Syn能協(xié)同作用于神經(jīng)元，致使細(xì)胞突觸數(shù)目與功能降低，且相較于單純阿爾茨海默病患者，同時(shí)具備Aβ1～42和α-Syn病理改變的患者，認(rèn)知功能異常進(jìn)展更快〔23,24〕。本研究結(jié)果可能是因Aβ1～42造成血腦屏障滲透性提升，緊密連接蛋白受損，上調(diào)高級(jí)糖基化終產(chǎn)物受體作用，使腦屏障中Aβ1～42內(nèi)向轉(zhuǎn)運(yùn)顯著多于外向轉(zhuǎn)運(yùn)，腦中Aβ1～42水平明顯增高，發(fā)生聚集沉積，故外周血內(nèi)Aβ1～42水平減少。

CysC屬半胱氨酸蛋白酶抑制劑，以恒定速度在所有有核細(xì)胞中表達(dá)，其和諸多神經(jīng)系統(tǒng)病變均具有關(guān)聯(lián)性，其能通過(guò)影響半胱氨酸蛋白酶活性，參與細(xì)胞外基質(zhì)生成及降解，參與炎性反應(yīng)，誘導(dǎo)神經(jīng)細(xì)胞再生，且其還可上調(diào)α-Syn表達(dá)，最終造成神經(jīng)細(xì)胞凋亡〔25,26〕。本研究結(jié)果產(chǎn)生的原因可能在于：腦組織受損傷時(shí)，對(duì)應(yīng)組織蛋白酶水平增高，CysC活化，表達(dá)增加，保護(hù)機(jī)體細(xì)胞。同時(shí)，CysC對(duì)認(rèn)知功能具備一定保護(hù)作用，其可結(jié)合于Aβ1～42及Aβ1～40，對(duì)淀粉樣斑塊沉積予以抑制，減少蛋白組酶，阻止Aβ生成和聚集〔27,28〕。EGF不僅具備強(qiáng)力細(xì)胞有絲分裂原，還可促進(jìn)神經(jīng)系統(tǒng)生長(zhǎng)發(fā)育，并能于神經(jīng)元氧化損傷中，對(duì)中腦DA神經(jīng)元產(chǎn)生營(yíng)養(yǎng)及保護(hù)作用。Chen-Plotkin等〔29〕研究證實(shí)，血清EGF含量降低和帕金森病患者發(fā)生認(rèn)知功能障礙具有密切關(guān)聯(lián)性，其在預(yù)測(cè)帕金森病患者認(rèn)知功能轉(zhuǎn)化中具有潛在優(yōu)勢(shì)。本研究結(jié)果提示EGF表達(dá)情況也與帕金森病發(fā)病及病情程度等具有相關(guān)性。此外，本研究還顯示聯(lián)合診斷效能更高，故推測(cè)臨床實(shí)際可聯(lián)合上述指標(biāo)對(duì)帕金森病予以綜合診斷，確保實(shí)現(xiàn)早發(fā)現(xiàn)、早治療。但本研究存在樣本選取量少等弊端，故其具體效力仍需進(jìn)一步探究證實(shí)。