楊麗娟 ，王 斌，錢(qián)東萌，李建美

（1.青島大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院，山東 青島 266071；2.淄博市婦幼保健院檢驗(yàn)科，山東 淄博 255029）

人巨細(xì)胞病毒（HCMV）又被稱為人類皰疹病毒5型，當(dāng)人體機(jī)能處于健康狀態(tài)下，感染HCMV后，潛伏在細(xì)胞內(nèi)的病毒可處于靜息狀態(tài)，不引起人體細(xì)胞病變反應(yīng)；相反，對(duì)于免疫力低下的人群（如新生兒），可出現(xiàn)相應(yīng)的臨床反應(yīng)，其中肝臟是其主要損傷的靶器官，其次是呼吸、神經(jīng)、血液系統(tǒng)，嚴(yán)重時(shí)可危及患兒的生命[1]。有學(xué)者指出，HCMV感染在健康人群中多表現(xiàn)為亞臨床隱性感染與潛伏感染，而孕婦和兒童感染HCMV較為嚴(yán)重，且其可通過(guò)母嬰垂直傳播造成新生兒的先天性感染，也是引起出生缺陷和各種不可逆損傷的重要因素[2-3]。HCMV肝炎作為常見(jiàn)的HCMV感染疾病，可表現(xiàn)為黃疸、肝腫大及肝功能異常，大部分患兒早期治療后預(yù)后良好，但仍有部分重癥患兒可發(fā)展為肝硬化、腹水等，預(yù)后較差[4]。因此，HCMV感染早期診治的重要性越來(lái)越受到臨床關(guān)注。本研究觀察了新生兒在感染HCMV后的免疫功能與肝功能指標(biāo)水平的變化，并分析了各指標(biāo)間的相關(guān)性，旨在為新生兒感染HCMV的臨床治療工作提供參考，現(xiàn)將研究結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 回顧性分析2018年1月至2021年1月淄博市婦幼保健院收治的51例感染HCMV新生兒的臨床資料，將其中20例活動(dòng)性HCMV感染新生兒的臨床資料作為活動(dòng)組，31例潛伏性感染HCMV新生兒的臨床資料作為潛伏組；另選同期于院內(nèi)正常分娩的80例健康新生兒的臨床資料作為健康對(duì)照組。其中健康對(duì)照組新生兒中男嬰45例，女?huà)?5例；日齡4～18 d，平均（10.51±4.07） d?；顒?dòng)組新生兒中男嬰12例，女?huà)?例；日齡3～18 d，平均（10.45±4.33） d。潛伏組新生兒中男嬰17例，女?huà)?4例；日齡4～15 d，平均（10.48±3.16） d。3組研究對(duì)象一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），可進(jìn)行組間對(duì)比。納入標(biāo)準(zhǔn)：感染HCMV的新生兒均符合《2017國(guó)際孕婦及新生兒先天性巨細(xì)胞病毒感染預(yù)防、診斷與治療專家共識(shí)》[5]中的相關(guān)診斷標(biāo)準(zhǔn)，且尿液經(jīng)聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)顯示HCMV陽(yáng)性者；均為初次感染，且未經(jīng)抗病毒或免疫抑制劑治療者；母體均為單胎妊娠，且孕婦產(chǎn)前均接受規(guī)律產(chǎn)檢者等。排除標(biāo)準(zhǔn)：日齡 ＞ 28 d者；合并單純皰疹病毒、梅毒、艾滋病、肝炎等其他感染者；存在先天性畸形或其他疾病者等。本研究已經(jīng)淄博市婦幼保健院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.2 研究方法 抽取3組新生兒清晨靜脈血3 mL，一部分血液以2 500 r/min的轉(zhuǎn)速離心10 min后取血清，采用散射比濁法檢測(cè)血清免疫球蛋白水平[包括免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）]；采用全自動(dòng)生化分析儀（日立公司，型號(hào)：LABOSPECT 008 AS）檢測(cè)3組新生兒肝功能指標(biāo)[總膽紅素（TBiL）、丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（ALT）、天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶（GGT）、總膽汁酸（TBA）]水平；另取一部分血液采用流式細(xì)胞儀[美國(guó)BD公司，型號(hào)：FACS Calibur]檢測(cè)3組新生兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群CD3+、CD4+、CD8+百分比水平及NK細(xì)胞水平，并計(jì)算CD4+/CD8+比值。

1.3 觀察指標(biāo) ①對(duì)比3組新生兒免疫球蛋白水平。②對(duì)比3組新生兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞水平。③對(duì)比3組新生兒肝功能指標(biāo)變化。④采用Pearson 相關(guān)性分析法分析各指標(biāo)之間的相關(guān)性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 25.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料以(±s)表示，兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間計(jì)量資料比較采用重復(fù)測(cè)量方差分析；采用Pearson 相關(guān)性分析法分析各指標(biāo)之間的相關(guān)性。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫球蛋白水平 健康對(duì)照組、潛伏組及活動(dòng)組3組新生兒血清IgA、IgM、IgG水平，組間兩兩比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表1。

表1 3組新生兒免疫球蛋白水平比較( ?±s?, g/L)

表1 3組新生兒免疫球蛋白水平比較( ?±s?, g/L)

注：IgA：免疫球蛋白A；IgG：免疫球蛋白G；IgM：免疫球蛋白M。

組別 例數(shù) IgA IgG IgM健康對(duì)照組 80 0.47±0.16 5.19±1.38 1.02±0.43潛伏組 31 0.45±0.14 5.92±2.49 0.94±0.32活動(dòng)組 20 0.50±0.20 5.68±1.22 0.92±0.31 F值 0.577 2.333 0.805 P值 ＞0.05 ＞0.05 ＞0.05

2.2 外周血T淋巴細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞水平 與健康對(duì)照組比，活動(dòng)組與潛伏組患兒CD3+、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值均顯著降低，且活動(dòng)組顯著低于潛伏組；CD8+百分比均顯著升高，且活動(dòng)組顯著高于潛伏組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），但3組間NK細(xì)胞水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＞0.05），見(jiàn)表2。

表2 3組新生兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞比較( ?±s)

表2 3組新生兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群與NK細(xì)胞比較( ?±s)

注：與健康對(duì)照組比，*P＜0.05；與潛伏組比，#P＜0.05。

組別 例數(shù) CD3+(%) CD4+(%) CD8+(%) CD4+/CD8+ NK細(xì)胞(%)健康對(duì)照組 80 75.15±6.41 48.21±7.45 19.80±2.63 2.43±0.83 12.72±3.60潛伏組 31 66.26±6.65* 40.10±9.21* 21.90±3.17* 1.83±0.49* 13.08±3.93活動(dòng)組 20 59.60±8.23*# 33.70±7.13*# 24.60±3.90*# 1.37±0.37*# 13.35±3.43 F值 50.892 32.509 22.483 21.464 0.286 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＞0.05

2.3 肝功能指標(biāo) 與健康對(duì)照組比，活動(dòng)組與潛伏組患兒血清TBiL、ALT、AST、GGT、TBA水平均顯著升高，且活動(dòng)組顯著高于潛伏組，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表 3。

表3 3組新生兒肝功能指標(biāo)比較( ?±s)

表3 3組新生兒肝功能指標(biāo)比較( ?±s)

注：與健康對(duì)照組比，*P＜0.05；與潛伏組比，#P＜0.05。TBiL：總膽紅素；ALT：丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；AST：天門(mén)冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶；GGT：谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶；TBA：總膽汁酸。

組別 例數(shù) TBiL(μmol/L) ALT(U/L) AST(U/L) GGT(U/L) TBA(μmol/L)健康對(duì)照組 80 10.05±2.66 9.23±3.38 37.95±11.10 31.99±14.39 7.73±3.26潛伏組 31 15.85±3.13* 21.94±5.54* 45.98±15.72* 42.05±15.43* 11.44±5.04*活動(dòng)組 20 30.01±6.52*# 47.42±9.30*# 63.73±23.24*# 60.55±18.54*# 18.24±6.59*#F值 248.657 442.060 25.286 28.765 48.224 P值 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05 ＜0.05

2.4 相關(guān)性分析 經(jīng)Pearson相關(guān)性分析法分析，結(jié)果顯示，外周血CD3+、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值均與TBiL、ALT、AST、GGT、TBA 呈負(fù)相關(guān)，CD8+百分比均與TBiL、ALT、AST、GGT、TBA 呈正相關(guān)，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（均P＜0.05），見(jiàn)表4。

表4 HCMV感染患兒外周血T淋巴細(xì)胞亞群與肝功能之間的相關(guān)性分析

3 討論

HCMV具有致病力弱，潛伏-?活化的生物學(xué)特性，可引起肝臟、泌尿生殖系統(tǒng)、中樞神經(jīng)系統(tǒng)等各系統(tǒng)的感染，臨床癥狀可從輕微無(wú)癥狀感染至嚴(yán)重缺陷或死亡。目前，HCMV感染率和發(fā)病率均呈升高趨勢(shì)，新生兒作為一個(gè)機(jī)體免疫功能低下的群體，發(fā)生感染的風(fēng)險(xiǎn)較高，而其感染可分為先天性感染和后天性感染，其中以先天性感染致殘率和病死率較高[6-7]。

HCMV感染不僅可以激活機(jī)體產(chǎn)生免疫應(yīng)答，同時(shí)能影響機(jī)體的免疫系統(tǒng)[8]。研究表明，當(dāng)HCMV感染機(jī)體后，在輔助性T細(xì)胞的作用下，B淋巴細(xì)胞系統(tǒng)可被激活，最終導(dǎo)致病毒特異性抗體與病毒結(jié)合，但HCMV感染后機(jī)體所產(chǎn)生的體液免疫應(yīng)答不能預(yù)防感染，僅能起到一定的保護(hù)作用，抗病毒細(xì)胞免疫應(yīng)答才是感染后的一種主要免疫應(yīng)答機(jī)制[9-11]。在本研究結(jié)果中，健康對(duì)照組、潛伏組及活動(dòng)組3組新生兒血清免疫球蛋白IgA、IgM、IgG、NK細(xì)胞水平比較，差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，提示HCMV感染后對(duì)機(jī)體體液免疫及NK細(xì)胞均無(wú)明顯影響。在姜濤等[12]研究中，通過(guò)對(duì)124例HCMV感染患兒進(jìn)行研究后發(fā)現(xiàn)，HCMV感染后，其機(jī)體的體液免疫功能基本正常，與本研究結(jié)果相似。

有研究發(fā)現(xiàn)，HCMV感染可引起T細(xì)胞亞群及輔助性T細(xì)胞1（Th1）、輔助性T細(xì)胞2（Th2）細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子比例失衡，從而引起機(jī)體的免疫系統(tǒng)功能紊亂，導(dǎo)致各臟器功能出現(xiàn)一系列損傷[13]。T細(xì)胞免疫作為機(jī)體適應(yīng)性免疫應(yīng)答的主要參與者，可對(duì)外來(lái)抗原進(jìn)行識(shí)別，其中CD3+、CD4+、CD8+細(xì)胞是細(xì)胞免疫的主要效應(yīng)細(xì)胞與調(diào)節(jié)細(xì)胞，而CD4+/CD8+比值是細(xì)胞免疫功能狀態(tài)的重要指標(biāo)，CD3+、CD4+T細(xì)胞反應(yīng)可受新生兒體內(nèi)未成熟的微環(huán)境影響，在急性HCMV感染的消退中起著重要的作用；而CD8+T細(xì)胞大多通過(guò)直接的細(xì)胞毒性來(lái)發(fā)揮其功能，在遇到外來(lái)抗原后，可導(dǎo)致攜帶特異性T細(xì)胞受體的幼稚T細(xì)胞激活并完成復(fù)制，在感染清除后，可導(dǎo)致抗原特異性T細(xì)胞凋亡，只留下一小部分記憶性T細(xì)胞發(fā)揮作用，若存在細(xì)胞免疫缺陷者，可導(dǎo)致嚴(yán)重的或長(zhǎng)期的HCMV感染，進(jìn)一步抑制機(jī)體的細(xì)胞免疫功能[14-15]。本研究中，與健康對(duì)照組比，活動(dòng)組與潛伏組患兒CD3+、CD4+百分比、CD4+/CD8+比值均顯著降低，且活動(dòng)組顯著低于潛伏組；CD8+百分比均顯著升高，且活動(dòng)組顯著高于潛伏組，提示HCMV感染后，新生兒機(jī)體處于細(xì)胞免疫抑制與失調(diào)狀態(tài)，而在活動(dòng)期感染中該種狀態(tài)更為明顯，可能導(dǎo)致機(jī)體抗感染細(xì)胞免疫應(yīng)答無(wú)法進(jìn)行有效誘導(dǎo)，進(jìn)而不能完全清除病毒，造成病毒持續(xù)感染。而在王智靈等[16]研究中認(rèn)為，CD4+、CD8+細(xì)胞水平的異?？赡苁怯捎诔绦蛐运劳鍪荏w-1所致的機(jī)體T細(xì)胞一定程度的衰竭所致，故而阻斷該受體，可增強(qiáng)HCMV感染新生兒機(jī)體的T細(xì)胞反應(yīng)。

血清肝功能指標(biāo)是反映新生兒肝功能損害的敏感指標(biāo)，對(duì)其進(jìn)行動(dòng)態(tài)監(jiān)測(cè)有助于觀察其肝功能損害程度，ALT、AST都是轉(zhuǎn)氨酶，也是人體肝臟正常運(yùn)轉(zhuǎn)過(guò)程必不可少的催化劑，當(dāng)肝細(xì)胞發(fā)生炎癥、壞死的時(shí)候，肝細(xì)胞膜會(huì)破裂，其可釋放進(jìn)血液中，使血清轉(zhuǎn)氨酶升高；同時(shí)TBiL由肝臟代謝，其水平高低可反映肝臟代謝功能；GGT反映膽汁淤積情況[17-18]。研究顯示，嬰幼兒感染HCMV后，HCMV在肝細(xì)胞內(nèi)繁殖，可導(dǎo)致肝細(xì)胞廣泛壞死；同時(shí)，其會(huì)侵犯肝內(nèi)膽管上皮細(xì)胞，引起膽管炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致膽汁淤滯，進(jìn)而出現(xiàn)HCMV肝炎、黃疸、多器官功能損害等[19-20]。本研究中，與健康對(duì)照組比，活動(dòng)組與潛伏組患兒血清TBiL、ALT、AST、GGT、TBA水平均顯著升高，且活動(dòng)組顯著高于潛伏組，從而證實(shí)了新生兒感染HCMV后可引起機(jī)體肝功能損害，引起肝臟間質(zhì)性炎癥與肝細(xì)胞變形壞死，且活動(dòng)期HCMV感染對(duì)機(jī)體肝功能影響更嚴(yán)重，因此，對(duì)新生兒HCMV感染期間進(jìn)行積極的肝功能指標(biāo)檢測(cè)，對(duì)預(yù)防患兒肝功能損害具有重要意義。此外，本研究還進(jìn)一步分析了外周血T淋巴細(xì)胞亞群與肝功能之間的相關(guān)性，發(fā)現(xiàn)CD3+、CD4+、CD4+/CD8+與各項(xiàng)肝功能指標(biāo)均呈負(fù)相關(guān)，CD8+百分比與各項(xiàng)肝功能指標(biāo)均呈正相關(guān)，從而表明免疫功能缺陷與肝功能損害的相關(guān)性，因此，臨床應(yīng)針對(duì)HCMV感染患兒適當(dāng)應(yīng)用免疫調(diào)節(jié)劑，實(shí)時(shí)監(jiān)測(cè)肝功能指標(biāo)，積極預(yù)防繼發(fā)感染，以減輕HCMV感染對(duì)患兒肝功能的影響，改善預(yù)后。

綜上，HCMV感染對(duì)新生兒機(jī)體體液免疫功能影響較小，但可抑制患兒細(xì)胞免疫功能，加強(qiáng)肝功能的損害，且以活動(dòng)期影響最大，故而臨床應(yīng)在新生兒HCMV感染期間，嚴(yán)密監(jiān)測(cè)新生兒的免疫指標(biāo)和肝功能指標(biāo)，及時(shí)對(duì)感染患兒進(jìn)行干預(yù)，以降低病毒感染對(duì)新生兒造成的損傷。