陳 樂 鄧 欣 譚宇星 張復(fù)興 鄺代治 蔣伍玖

(衡陽師范學(xué)院化學(xué)與材料科學(xué)學(xué)院，金屬有機(jī)新材料湖南省高校重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，功能金屬有機(jī)化合物湖南省重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，湘江上游重金屬污染監(jiān)測(cè)與治理湖南省工程研究中心，衡陽 421008)

0 引 言

化學(xué)藥物治療是目前臨床主要的癌癥治療方法之一[1-2]。在抗癌藥物的研發(fā)過程中，藥物對(duì)體外癌細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制試驗(yàn)是驗(yàn)證藥物抗癌效能的第一步，在明確藥物抗癌譜、篩選高效抗癌藥物等方面有著重要意義。鉑類藥物是臨床治療癌癥應(yīng)用最廣泛的金屬抗癌藥物，它具有較好的抗癌活性，主要是通過抑制癌細(xì)胞的DNA復(fù)制達(dá)到抑制惡性細(xì)胞增殖的目的[3-6]，故已有報(bào)道的大多數(shù)抗腫瘤金屬抗癌藥物的研究都是基于DNA作為靶向分子而設(shè)計(jì)的[7-8]。因此，研究金屬配合物抗癌藥物的體外抗癌活性和與DNA之間的相互作用模式，成為了研發(fā)新一代金屬抗癌藥物的關(guān)鍵。

有機(jī)錫配合物因其結(jié)構(gòu)的多樣性以及顯著的生物活性得到廣泛關(guān)注[9-11]。大量研究結(jié)果表明，有機(jī)錫配合物在體外都顯示出良好的抗腫瘤活性，并且與DNA結(jié)合能力較強(qiáng)，能夠抑制細(xì)胞增殖、誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡等[12-14]，所以它被認(rèn)為是替代鉑類金屬抗癌藥物的候選化合物之一。其中，二烴基錫配合物因更具有突出的抗增殖和誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞凋亡的特性而常被人們研究。作為配體而言，酰腙類配體大多具有抑菌、抗癌和抗病毒等生物活性[15-17]，文獻(xiàn)報(bào)道作為配體的酰腙類化合物在形成配合物后，其配合物的生物活性比配位前要明顯加強(qiáng)。因此，我們?cè)O(shè)計(jì)、合成了基于酰腙類配體的烴基錫配合物，探討了它們與DNA的作用方式和細(xì)胞毒性，為后續(xù)的抗腫瘤藥物的設(shè)計(jì)以及臨床應(yīng)用提供基礎(chǔ)。

1 實(shí)驗(yàn)部分

1.1 儀器和試劑

IR用日本島津Prestige-21紅外光譜儀(4 000～400 cm-1，KBr壓片)測(cè)定。1H、13C和119Sn NMR 用Bruker AVANCE-500核磁共振儀測(cè)定。元素分析用PE-2400Ⅱ元素分析儀測(cè)定。HRMS用Thermo Scientific LTQ Orbitrap XL(ESI源)測(cè)定。UV-Vis光譜用日本島津公司UV-2550型紫外可見光譜儀測(cè)定。熒光光譜用日本日立F-7000熒光光譜儀測(cè)定。熱重分析(TGA)用德國(guó)NETZSCH TG 209 F3熱重分析儀進(jìn)行，在空氣氣氛下，加熱速度為20℃·min-1，氣體流速為20 mL·min-1，在40～800 ℃范圍內(nèi)對(duì)配合物進(jìn)行測(cè)試。熔點(diǎn)用北京泰克X-4雙目體視顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀測(cè)定(溫度計(jì)未經(jīng)校正)。

二(2，4-二氯芐基)二氯化錫參考文獻(xiàn)[18]方法合成，合成方法見Supporting information。溴化乙錠(EB)、小牛胸腺DNA、三羥甲基氨基甲烷(Tris)為Sigma-Aldrich公司產(chǎn)品。其它試劑均為市售分析純，水為超純水。Tris-HCl(0.01 mol·L-1)緩沖溶液通過稱取一定量Tris用0.1 mol·L-1的鹽酸溶液調(diào)至pH=7.40配制而成，使用前配制。小牛胸腺DNA的純度通過比較260和280 nm處的吸光度來確定(A260/A280=1.8～1.9)，用所需pH的緩沖溶液配制，濃度通過測(cè)定260 nm處的吸光度計(jì)算而得(ε260=6 600 L·mol-1·cm-1)，其儲(chǔ)備液在4℃下保存；溴化乙錠溶液通過稱取適量溴化乙錠固體，用pH=7.40的Tris-HCl(0.01 mol·L-1)緩沖溶液配制。

1.2 配合物的合成

配合物的合成路線如圖1所示。在25 mL圓底燒瓶中，加入1 mmol對(duì)甲基苯甲酰肼或?qū)κ宥』郊柞ｋ隆? mmol丙酮酸鈉、1 mmol二(2，4-二氯芐基)二氯化錫、10 mL甲醇，攪拌回流3 h。冷卻，過濾，通過控制溶劑揮發(fā)得到淡黃色晶體C1或C2。

圖1 配合物的合成線路Fig.1 Synthesis route of the complexes

配合物C1：產(chǎn)率70%。m.p.222～224 ℃(dec)。元素分析(C52H48Cl8N4O8Sn2)實(shí)測(cè)值(計(jì)算值，%)：C，45.31(45.32)；H，3.51(3.51)；N，4.06(4.07)。IR(KBr，cm-1)：3 063，2 920，1 614，1 582，1 472，1 389，1 317，1 290，1 204，1 179，1 157，1 107，1 070，1 024，918，841，818，748，727，653，592，540，449。1H NMR(500 MHz，CDCl3)：δ7.80(d，J=8.2 Hz，4H)，7.27(s，4H)，7.22(d，J=8.0 Hz，4H)，7.04(d，J=2.0 Hz，8H)，3.17(d，J=12.0 Hz，4H)，3.10(d，J=12.0 Hz，4H)，2.49(s，6H)，2.43(s，6H)。13C NMR(126 MHz，CDCl3)：δ174.77，163.69,155.10,143.49,133.34,132.85，132.28，130.81，129.07，128.88，128.46，127.43，50.92，27.62，21.79，13.77。119Sn NMR(187 MHz，CDCl3)：δ-243.58。HRMS(ESI)m/z：C25H21Cl4N2O3Sn+[M-CH3OH+H]+計(jì)算值 656.929 33，實(shí)驗(yàn)值 656.929 57；C50H41Cl8N4O6Sn2+[2M-2CH3OH+H]+計(jì)算值 1 314.850 79，實(shí)驗(yàn)值1 314.849 85。

配合物 C2：產(chǎn)率 72%。m.p.229～231 ℃(dec)。元素分析(C29H30Cl4N2O4Sn)實(shí)測(cè)值(計(jì)算值，%)：C，47.68(47.64)；H，4.16(4.14)；N，3.81(3.83)。IR(KBr，cm-1)：2 963，2 905，2 870，1 674，1 607，1 580，1 474，1 393，1 364，1 321，1 290，1 271，1 207，1 192，1 161,1 115，1 072，1 047，920，849，822，766，725，656，596，554，446。1H NMR(500 MHz，CDCl3)：δ7.74(dt，J1=8.5 Hz，J2=1.9 Hz，4H)，7.40(dt，J1=8.6 Hz，J2=1.9 Hz，4H)，7.21(d，J=2.2 Hz，4H)，7.05(d，J=8.3 Hz，4H)，6.95(dt，J1=8.3 Hz，J2=2.1 Hz，4H)，3.27(d，J=12.0 Hz，4H)，3.16(d，J=12.0 Hz，4H)，2.48(s，6H)，1.35(s,18H)。13C NMR(126 MHz，CDCl3)：δ174.76，164.60，156.21，154.22,133.35,133.22,132.07,131.09，129.19，128.76，128.27，127.23，125.18，50.85，35.09，31.13，29.39，13.68。119Sn NMR(187 MHz，CDCl3)：δ-282.87。HRMS(ESI)m/z：C28H27Cl4N2O3Sn+[M-CH3OH+H]+計(jì)算值 698.979 23，實(shí)驗(yàn)值 698.978 27；CHClNOSn+56538462[2M-2CH3OH+H]+計(jì)算值1 398.944 69，實(shí)驗(yàn)值1 398.947 51。

1.3 晶體結(jié)構(gòu)測(cè)定

選取尺寸分別為0.22 mm×0.20 mm×0.19 mm(C1)和0.23 mm×0.22 mm×0.20 mm(C2)的配合物單晶，在Bruker SMART APEXⅡCCD單晶衍射儀上，采用經(jīng)石墨單色化的MoKα射線(λ=0.071 073 nm)，以φ-ω掃描方式收集衍射數(shù)據(jù)。全部數(shù)據(jù)經(jīng)Lp因子和多重掃描吸收校正。晶體結(jié)構(gòu)由直接法解出，全部非氫原子坐標(biāo)在差值Fourier合成中陸續(xù)確定，理論加氫法給出氫原子在晶胞中的位置坐標(biāo)。對(duì)非氫原子坐標(biāo)及其各向異性熱參數(shù)和氫原子坐標(biāo)及其各向同性熱參數(shù)進(jìn)行全矩陣最小二乘法修正，全部結(jié)構(gòu)分析計(jì)算工作采用SHELX-97程序系統(tǒng)完成。

CCDC：2124763，C1；2124764，C2。

表1 配合物晶體學(xué)數(shù)據(jù)和精修參數(shù)Table 1 Crystallographic data and refinement parameters of the complexes

續(xù)表1

1.4 配合物對(duì)癌細(xì)胞的抑制活性

NCI-H460(人肺癌細(xì)胞)、HepG2(人肝癌細(xì)胞)和MCF7(人乳腺癌細(xì)胞)細(xì)胞株取自美國(guó)組織培養(yǎng)庫(ATCC)。HepG2、NCI-H460、MCF-7細(xì)胞株用含10%胎牛血清的RPMI 1640(GIBICO公司)培養(yǎng)基，在含CO2(體積分?jǐn)?shù)5%)的37℃飽和濕度培養(yǎng)箱內(nèi)進(jìn)行體外培養(yǎng)。體外抗癌藥敏試驗(yàn)是通過MTT(噻唑藍(lán))比色法測(cè)定。數(shù)據(jù)處理使用Graph Pad Prism version 7.0程序，配合物的半抑制濃度(IC50)通過程序中具有S形劑量響應(yīng)的非線性回歸模型進(jìn)行擬合得到。

1.5 配合物與DNA相互作用研究

熒光光譜法研究：在5 mL的容量瓶中分別加入EB、ct-DNA及不同濃度的配合物溶液，搖勻，在25℃下放置3.5 h，分別掃描熒光光譜。將激發(fā)波長(zhǎng)設(shè)為258 nm，測(cè)定540～700 nm范圍內(nèi)的熒光光譜，發(fā)射和激發(fā)光譜掃描狹縫均為5.0 nm。

UV-Vis光譜法研究：將配合物用DMSO配制成1 mmol·L-1儲(chǔ)備液。在5 mL容量瓶中分別加入配合物溶液(50 μmol·L-1)及不同濃度的 ct-DNA(0～100 μmol·L-1)，用Tris-HCl緩沖溶液定容，混勻，25 ℃下放置3.0 h，以不同濃度的ct-DNA溶液為參比，分別掃描230～800 nm范圍內(nèi)的UV-Vis光譜。

利用6孔板transwell將2D、3D培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞分別與背根神經(jīng)節(jié)共培養(yǎng)，為了保證加入的細(xì)胞量一致，將3D動(dòng)態(tài)培養(yǎng)的細(xì)胞球和2D培養(yǎng)的細(xì)胞各取50×104放到transwell上層，觀察背根神經(jīng)節(jié)軸突的生長(zhǎng)長(zhǎng)度。實(shí)驗(yàn)分為3組：?jiǎn)渭儽掣窠?jīng)在培養(yǎng)基中培養(yǎng)，加2D培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞、3D培養(yǎng)的脂肪干細(xì)胞分別與背根神經(jīng)節(jié)共培養(yǎng)。

黏度法研究：使用烏氏黏度計(jì)進(jìn)行黏度測(cè)量，整個(gè)測(cè)量實(shí)驗(yàn)在溫度恒定為(25.00±0.02)℃的超級(jí)恒溫水浴槽中進(jìn)行。用DMSO作為溶劑來配制1 mmol·L-1的配合物儲(chǔ)備液。向?yàn)跏橡ざ扔?jì)中加入ct-DNA(50 μmol·L-1)及不同濃度的配合物溶液(0～50 μmol·L-1)，用Tris-HCl緩沖溶液定容，混勻后分別測(cè)定該溶液流經(jīng)毛細(xì)管所需的時(shí)間，用精度為0.01 s的電子秒表測(cè)量時(shí)間，每次添加完溶液后測(cè)量3次時(shí)間，最后取平均值。按照公式η=(t-t0)/t0[19]來計(jì)算相對(duì)黏度，式中t0為Tris-HCl緩沖溶液流經(jīng)毛細(xì)管所需的時(shí)間，t為ct-DNA和配合物的混合溶液流經(jīng)毛細(xì)管所需時(shí)間。以η0表示沒有加入配合物時(shí)ct-DNA溶液的相對(duì)黏度，以(η/η0)1/3對(duì)(ccomplex/cDNA)作圖，得到不同濃度配合物對(duì)ct-DNA黏度的影響。

2 結(jié)果與討論

2.1 譜學(xué)表征

在配合物C1、C2的IR譜圖中，2個(gè)配合物分別在1 582、1 580 cm-1處的吸收峰歸屬為酰腙(C=N—N=C)鍵的特征吸收[20-21]，C1、C2分子中羧基的反對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰和對(duì)稱伸縮振動(dòng)峰分別在1 614和1 389 cm-1、1 608和 1 393 cm-1處，兩者頻率之差分別為225和215 cm-1，表明2個(gè)配合物中的羧酸根均是以單齒形式與Sn配位，這與X射線單晶衍射所得結(jié)果保持一致。此外，C1、C2配位鍵的特征峰ν(Sn—O—Sn)、ν(Sn—O)和ν(Sn—C)分別位于 653、592、449 cm-1和 656、596、446 cm-1處，與文獻(xiàn)[22-24]報(bào)道的類似化合物的出峰位置一致，由此證明2個(gè)目標(biāo)配合物的形成，并且從各個(gè)基團(tuán)的出峰位置可以得出，我們合成的2個(gè)二(2，4-二氯芐基)錫配合物具有相似的化學(xué)結(jié)構(gòu)。

在1H NMR譜中，C1和C2各組峰的積分面積之比與預(yù)期結(jié)構(gòu)的各組質(zhì)子數(shù)相對(duì)吻合。配合物C1和C2中芳環(huán)上氫的出峰位置分別在δ=7.04～7.80和δ=6.95～7.74；值得注意的是，2，4-二氯芐基的亞甲基上2個(gè)氫分別在δ=3.10附近呈現(xiàn)2組雙重峰，這是亞甲基上的2個(gè)氫質(zhì)子發(fā)生同碳耦合所致，說明這2個(gè)氫的化學(xué)環(huán)境不同。從譜圖中可以看到，2個(gè)配合物的氫出峰基本保持一致，說明2個(gè)配合物具有相似的最簡(jiǎn)結(jié)構(gòu)單元。

在13C NMR譜中，C1和C2各組峰與理論推測(cè)結(jié)構(gòu)的碳原子數(shù)相吻合。2個(gè)配合物中苯環(huán)上碳原子以及羧基碳、酰肼碳、亞氨基碳均在低場(chǎng)位置出峰，出峰位置均一一對(duì)應(yīng)。

在119Sn NMR譜中，C1和C2分別在δ=-243.58和-282.87處僅呈現(xiàn)一個(gè)單峰，表明2個(gè)配合物中均僅存在一種化學(xué)環(huán)境的中心錫原子。

2.2 晶體結(jié)構(gòu)

配合物的主要鍵長(zhǎng)和鍵角數(shù)據(jù)列于表2，分子結(jié)構(gòu)見圖2和3。C1和C2均為雙錫核分子，分子中心存在1個(gè)Sn2O2平面四元環(huán)，環(huán)的中心就是分子的對(duì)稱中心，Sn2O2四元環(huán)是由羧基氧原子以μ3-橋聯(lián)配位Sn原子構(gòu)成，四元環(huán)的2條邊長(zhǎng)不相等，在C1中Sn—O鍵長(zhǎng)：Sn1—O2 0.231 79(2)nm，Sn1—O2i0.269 6 nm；C2中Sn—O鍵長(zhǎng)：Sn1—O2 0.233 72(2)nm，Sn1—O2i0.269 6 nm；其中Sn1—O2均屬于正常Sn—O共價(jià)鍵長(zhǎng)，而Sn1—O2i均大于正常Sn—O共價(jià)鍵長(zhǎng)，但是小于錫原子與氧原子范德華半徑之和，與文獻(xiàn)報(bào)道[25-26]相似配合物的Sn—O相差不大。

圖2 配合物C1的橢球率30%的分子結(jié)構(gòu)圖Fig.2 Molecular structure of complex C1 with 30% probability ellipsoids

圖3 配合物C2的橢球率30%的分子結(jié)構(gòu)圖Fig.3 Molecular structure of complex C2 with 30% probability ellipsoids

表2 配合物的部分鍵長(zhǎng)和鍵角Table 2 Selected bond lengths(nm)and bond angles(°)of the complexes

在配合物C1中，Sn1與來自配體中的2個(gè)氧原子O1和O2、1個(gè)亞氨基氮原子N1、1個(gè)配位甲醇氧原子O4、來自2個(gè)2，4-二氯芐基中的亞甲基碳原子C12和C19以及來自另一個(gè)配體分子中的O2i配位，形成七配位五角雙錐構(gòu)型。O1、O2、O4、N1、O2i占據(jù)了赤道平面的5個(gè)位置，2個(gè)亞甲基碳原子C12和C19則占據(jù)了該平面兩側(cè)的軸向位置。配合物C2中心錫原子的配位模式與C1相同，均為七配位的五角雙錐構(gòu)型。對(duì)比2個(gè)配合物中的軸向夾角，C1中軸向C12—Sn1—C19鍵角為162.33°，C2中軸向C15—Sn1—C22鍵角為158.43°，分別相比180°偏離了17.67°和21.57°，初步說明配合物C2中心錫原子與配位原子所構(gòu)成的五角雙錐構(gòu)型的畸變程度大于配合物C1。在配合物C1中，赤道平面的5個(gè)原子與中心錫原子的鍵長(zhǎng)不等(Sn1—O1 0.216 34(2)nm，Sn1—O2 0.231 79(2)nm，Sn1—O4 0.244 8(2)nm，Sn1—N1 0.222 4(2)nm，Sn1—O2i0.269 6 nm)，且鍵角也不相等(O1—Sn1—O4 76.31(8)°，O1—Sn1—N1 70.58(7)°，N1—Sn1—O2 70.58(7)°，O2—Sn1—O2i65.75°，O4—Sn1—O2i76.81°)，這進(jìn)一步說明該配合物中心錫原子為七配位畸變五角雙錐構(gòu)型。配合物C2與C1分子結(jié)構(gòu)類似，鍵參數(shù)差異不大，中心錫原子也為七配位畸變五角雙錐構(gòu)型。此外，在2個(gè)配合物結(jié)構(gòu)中，Sn—N鍵長(zhǎng)為0.222 4(2)nm(C1)和0.222 9(2)nm(C2)，與文獻(xiàn)報(bào)道相似[25-26]。

2.3 熱穩(wěn)定性

圖4 配合物C1的TGA曲線Fig.4 TGA curve of complex C1

圖5 配合物C2的TGA曲線Fig.5 TGA curve of complex C2

2.4 體外抗癌活性

以臨床上應(yīng)用的抗癌藥物順鉑為對(duì)照藥物，測(cè)定了配合物C1、C2對(duì)NCI-H460、HepG2和MCF7的體外抑制活性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果見表3。不同配體、相同烴基錫形成的配合物中，對(duì)甲基苯甲酰肼縮丙酮酸烴基錫配合物(C1)具有更好的體外抑制活性，特別是對(duì)于 HepG2 和 MCF7，其 IC50分別為(6.64±0.26)μmol·L-1和(7.15±0.15)μmol·L-1。對(duì)比2個(gè)配合物，僅有酰腙配體上芳環(huán)的取代基不同，分別為甲基和叔丁基，結(jié)合表3中的IC50值可以看出二者對(duì)3種癌細(xì)胞的體外抑制活性大小均為甲基(C1)＞叔丁基(C2)。因此，推測(cè)配合物C1、C2的抗腫瘤活性可能與配合物的空間位阻有關(guān)，空間位阻越小，配合物越容易嵌入到DNA的雙螺旋鏈中改變和破壞DNA的結(jié)構(gòu)和功能，阻礙DNA復(fù)制和合成，從而抑制腫瘤細(xì)胞增殖。

表3 配合物對(duì)三種癌細(xì)胞的體外抑制活性Table 3 Inhibition activity of the complexes to three kinds of cancer cells in vitro

2.5 配合物與DNA的相互作用

圖6和7分別為不同濃度的配合物C1、C2對(duì)EB-DNA復(fù)合體系熒光光譜的影響。從圖上可以看出，隨著配合物C1、C2濃度的增加，EB-DNA復(fù)合物體系的熒光逐漸猝滅，說明配合物C1、C2與DNA作用后，同EB競(jìng)爭(zhēng)DNA的結(jié)合位點(diǎn)使EB從DNA分子中游離出來，由此可進(jìn)一步說明它們與DNA發(fā)生了嵌入作用；并且從猝滅程度上來看，配合物C1使復(fù)合體系熒光強(qiáng)度的下降趨勢(shì)更大，初步說明它與DNA的作用更強(qiáng)。為了定量地研究配合物與DNA的結(jié)合能力，采用經(jīng)典Stern-Volmer方程：I0/I=1+Ksqccomplex，由曲線擬合推斷其作用屬于靜態(tài)猝滅，并計(jì)算出配合物C1、C2與DNA作用的猝滅常數(shù)Ksq分別為6.8×104和3.1×104L·mol-1，與文獻(xiàn)[27-28]報(bào)道其他金屬配合物的結(jié)合常數(shù)在同一數(shù)量級(jí)，但是配合物C1的猝滅常數(shù)略大于C2，說明它的作用強(qiáng)度也略大。

圖6 配合物C1對(duì)EB-DNA體系熒光光譜的影響Fig.6 Effects of complex C1 on the fluorescent spectra of EB-DNA system

圖7 配合物C2對(duì)EB-DNA體系的熒光光譜的影響Fig.7 Effects of complex C2 on the fluorescent spectra of EB-DNA system

為了準(zhǔn)確表達(dá)配合物與DNA相互作用的強(qiáng)度，可以根據(jù)公式求得兩者間的結(jié)合常數(shù)(Kb)：cDNA/(εA-εF)=cDNA/(εB-εF)+1/[Kb(εB-εF)]，其中εA、εF、εB分別為任意DNA濃度下溶液的摩爾消光系數(shù)、自由配合物的摩爾消光系數(shù)、配合物被DNA完全結(jié)合時(shí)的摩爾消光系數(shù)。根據(jù)方程式，以cDNA/(εA-εF)對(duì)cDNA作圖并進(jìn)行線性擬合(圖8和9插圖)，通過直線的斜率和截距計(jì)算出2個(gè)配合物的結(jié)合常數(shù)Kb分別為1.3×104和8.2×103L·mol-1；并且該結(jié)合常數(shù)與文獻(xiàn)[29-30]報(bào)道的類似配合物與DNA作用的結(jié)合常數(shù)大小相近，均在同一數(shù)量級(jí)。配合物C1與DNA作用的結(jié)合常數(shù)略大于C2，由此說明，配合物C1和C2可與DNA結(jié)合，且C1與DNA的作用略強(qiáng)于C2。從圖8和9中可以看出當(dāng)配合物與DNA發(fā)生作用時(shí)，它們的UVVis光譜吸收峰均表現(xiàn)出了減色和紅移現(xiàn)象，減色率分別為55.5%和50.2%，紅移均為7 nm，減色越明顯表明配合物與DNA相互作用越強(qiáng)。出現(xiàn)這種現(xiàn)象的原因可能是配合物通過嵌入作用與DNA結(jié)合后與堿基對(duì)發(fā)生π電子堆積，配體的π*空軌道與DNA堿基對(duì)的π軌道發(fā)生偶合導(dǎo)致能級(jí)下降，偶合后的π*軌道部分填充電子，使其π-π*躍遷幾率減小，從而產(chǎn)生減色效應(yīng)。上述結(jié)果表明配合物C1、C2通過嵌入作用與雙鏈ct-DNA結(jié)合。

圖8 加入ct-DNA后配合物C1的UV-Vis譜圖Fig.8 UV-Vis spectra of C1 upon addition of ct-DNA

圖9 加入ct-DNA后配合物C2的UV-Vis譜圖Fig.9 UV-Vis spectra of C2 upon addition of ct-DNA

黏度測(cè)定是檢測(cè)配合物與DNA結(jié)合方式最有效的方法之一。當(dāng)平面小分子以嵌入方式與DNA作用時(shí)，DNA相鄰堿基對(duì)的距離會(huì)變大，以容納嵌入該分子，并導(dǎo)致DNA雙螺旋長(zhǎng)度增加，從而增大溶液的黏度[31]；當(dāng)小分子以部分嵌入方式進(jìn)入堿基對(duì)時(shí)，常產(chǎn)生DNA雙鏈的扭結(jié)，導(dǎo)致溶液黏度下降；而當(dāng)化合物分子以溝面或靜電方式與DNA作用時(shí)，則DNA溶液黏度變化不大，據(jù)此可區(qū)分不同的鍵合模式。圖10是DNA在不同濃度的C1、C2溶液存在下黏度的變化趨勢(shì)，從圖中可以看出，加入配合物后，DNA的相對(duì)黏度總體上都是隨著配合物濃度的增大呈現(xiàn)上升的趨勢(shì)，并且上升趨勢(shì)C1強(qiáng)于C2，說明配合物以嵌入的方式與DNA結(jié)合。

圖10 不同濃度的配合物C1、C2對(duì)ct-DNA黏度的影響Fig.10 Effect of increasing concentrations of complexes C1 and C2 on the relative viscosity of ct-DNA

3 結(jié)論

以二(2，4-二氯芐基)二氯化錫分別與對(duì)甲基苯甲酰肼縮丙酮酸及對(duì)叔丁基苯甲酰肼縮丙酮酸反應(yīng)，合成了2個(gè)2，4-二氯芐基配合物(C1、C2)。結(jié)構(gòu)分析表明，C1、C2均為雙錫核分子，2個(gè)中心錫原子均形成七配位畸變五角雙錐構(gòu)型。熱分析結(jié)果進(jìn)一步證明2個(gè)配合物中均含有配位的溶劑分子；在空氣中120℃以下，配合物C1、C2的骨架結(jié)構(gòu)可穩(wěn)定存在?？拱┗钚越Y(jié)果表明配合物C1對(duì)HepG2和MCF7兩種癌細(xì)胞的抑制效果優(yōu)于順鉑。利用UVVis光譜、熒光猝滅光譜以及黏度法研究了配合物C1、C2與ct-DNA之間的相互作用，結(jié)果表明配合物C1、C2均以嵌入模式與DNA結(jié)合，且配合物C1的作用力更強(qiáng)。

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