吳 昊，任艷玲，馬文奎，朱寬峰，王建軍，沈志強，徐 尚，周 強，富 強，富俊才，劉國世*

（1.中國農業(yè)大學動物科學技術學院，北京 100193；2.山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院，山東濱州 256600；3.北京田園奧瑞生物科技有限公司，北京 100096；4.內蒙古金草原生態(tài)科技集團有限公司，內蒙古巴彥淖爾 015115；5.察右前旗強禾生態(tài)種業(yè)有限公司，內蒙古烏蘭察布 012200）

東弗里升是世界著名的奶綿羊品種，原產德國，具有極佳的生產性能，體型結構良好，體軀寬長，優(yōu)秀個體泌乳量達1 200 kg 以上。我國現有綿羊品種基本以肉用和毛用品種為主，奶用綿羊存欄甚少。因此，培育乳肉兼用品種具有巨大的市場發(fā)展?jié)摿?。洼地綿羊是《山東省地方畜禽品種保護名錄》地方保護品種，羊肉鮮美，多胎，耐粗飼，哺乳能力強。陳其新等將東弗里升、杜泊羊與小尾寒羊進行經濟雜交對比試驗，東寒F代的平均初生重和成活率優(yōu)于杜寒雜交后代。因此，將東弗里升與洼地綿羊進行雜交，可以將東弗里升產奶性能和寬大體型結構的生產性能與洼地綿羊的多胎性狀和肉質鮮美的生產性能相結合，繼而培育出具有多種優(yōu)秀性狀的新品種，滿足市場需求。精液冷凍和腹腔內窺鏡輸精是進行種質資源保護和提高優(yōu)秀種公羊利用效率的重要途徑。王一明等利用細管凍精腹腔內窺鏡輸精技術進行哈薩克羊的品種改良，效果良好。本研究制備東弗里升細管凍精，利用腹腔內窺鏡技術對洼地綿羊進行輸精，以期獲得具有多種優(yōu)秀性狀的新品種。

1 材料與方法

1.1 實驗動物 2 只東弗里升種公羊選自內蒙古察右前旗強禾生態(tài)種業(yè)有限公司種羊場，年齡為2～3 歲，膘情上等，體質健壯；28 只洼地綿羊選自山東省濱州畜牧獸醫(yī)研究院羊場，所有母羊健康無病，膘情良好。所有羊按常規(guī)方式進行飼養(yǎng)管理。

1.2 藥品與試劑 孕馬血清促性腺激素（PMSG）購自寧波三生藥業(yè)有限公司；陰道栓（EAZI-BREED-CIDR）購自北京綠欣康農牧科技有限公司；精液冷凍稀釋液及0.25 mL 細管購自上?？ㄌK生物科技有限公司；新鮮雞蛋、酒精、碘酒、新潔爾滅、土霉素等為國產。

1.3 主要儀器 實驗儀器主要包括精液質量分析系統(tǒng)[CASAS-QH-III 型（TSINGHUATONGFANG）]、電熱數顯恒溫水浴鍋（JOANLAB，SYG）、冰箱（BCD-215DM，海爾）、光學顯微鏡（LV100ND，NiKon）、腹腔內窺鏡系統(tǒng)（K3EC-2358，德國KARL）、程序冷凍儀與全自動細管灌裝封口機為北京田園奧瑞生物科技有限公司自主研發(fā)。

1.4 實驗方法

1.4.1 東弗里升凍精制備 使用假陰道法采集公羊精液，立即于37℃下進行常規(guī)品質檢查。選擇活力在0.8 以上的精液，用精液冷凍稀釋液等比例稀釋至7 倍，每支0.25 mL凍精總精子數5.0×10個，即精子密度2.0×10個/mL。然后將稀釋好的精液放入4℃低溫操作柜中降溫平衡3～4 h 后灌裝封口。使用程序化冷凍儀進行冷凍，冷凍曲線（4～-10℃，-5℃/min；-10～-100℃，-55℃/min；-100～-140℃，-20℃/min）。

1.4.2 精液品質檢測 利用計算機輔助精液分析系統(tǒng)[CASAS-QH-III 型（TSINGHUATONGFANG，北京，中國]進行運動指標分析，運動指標包括活力、曲線速度（VCL）、直線速度（VSL）、平均路徑速度（VAP）、精子頭側擺幅度（ALH）、快速直線運動精子比例。

1.4.3 洼地綿羊同期發(fā)情處理 使用CIDR+PMSG 法對洼地綿羊進行同期發(fā)情處理。在發(fā)情周期內隨機選取1 d植入CIDR 栓（含0.3 g 孕酮），將其定為第0 天，第12 天撤去CIDR，注射280 IU 孕馬血清促性腺激素（PMSG），12 h 后用公羊試情，記錄發(fā)情時間。

1.4.4 腹腔內窺鏡輸精 將細管凍精取出，于37℃水浴1 min 解凍，立即取出備用。將經過同期發(fā)情處理且確認發(fā)情的洼地綿羊進行保定。采用腹部微創(chuàng)手術法進行微創(chuàng)開孔，腹腔內窺鏡觀察，單側卵巢卵泡1 個及以上則進行輸精或直接進行輸精。每只同期發(fā)情母羊輸解凍后細管凍精2 支，凍后精子活力0.5 左右，每側子宮角各輸精1 支。然后用少量磺胺處理創(chuàng)口后縫合1 針，注射黃體酮和土霉素。

1.4.5 東洼F代生長發(fā)育測定 東洼F代羔羊出生哺乳1 月后，進行常規(guī)舍飼圈養(yǎng)。使用卷尺分別于出生、6、12 月齡和18 月齡測定后代體重數據，并詳細記錄育肥期后代體重變化情況，計算耗料增重比。耗料增重比=消耗飼料總量/增重總量。

1.4.6 統(tǒng)計分析 精液冷凍前后相關指標檢測重復 3 次，數據使用SPSS 25.0 進行單因素方差分析（One-way ANOVA），結果均以平均值±標準差表示。>0.05 表示無顯著差異，<0.05 表示差異顯著。

2 結果

2.1 東弗里升綿羊鮮精理化特性分析 由表1 可知，2只東弗里升EF1（249）、EF2（239）精液的采精量、密度和顏色均無顯著差異。

表1 東弗里升鮮精質量檢測

2.2 東弗里升綿羊冷凍前后活力及運動能力分析 由表2 可知，EF1 個體的VCL、VAP、ALH 和快速運動精子比例均低于鮮精組（<0.05）。EF2 個體的 VCL、ALH 和快速直線運動精子比例均低于鮮精組（<0.05）。

表2 東弗里升綿羊精液運動能力分析

2.3 東弗里升凍精與洼地綿羊腹腔內窺鏡輸精 利用腹腔內窺鏡技術對28 只洼地綿羊母羊進行內窺鏡輸精，結果顯示妊娠率為71.43%（20/28），產羔率為128.57%（36/28）。

表3 東弗里升凍精與洼地綿羊輸精雜交統(tǒng)計

2.4 腹腔內窺鏡輸精產羔情況統(tǒng)計 如表4 所示，5 只母羊單產1 羔，8 只母羊單產2 羔，5 只母羊單產3 羔，2 只流產，窩產2～3 羔比例為72.22%（13/18）。隨窩產羔數增加，羔羊平均出生重降低。

表4 洼地綿羊單胎產數分布統(tǒng)計

2.5 東洼雜交F代生長發(fā)育及育肥效果分析 如表5 所示，東洼雜交F代同時期體重均高于洼地綿羊，18 月齡東洼雜交F代母羊高于洼地綿羊母羊（<0.05）。由表6 可知，東洼F代育肥期平均日增重、耗料增重比均高于洼地綿羊（>0.05）。

表5 東洼雜交羊與洼地綿羊不同月齡的體重

表6 東洼雜交羊與洼地綿羊育肥效果比較

3 討論

3.1 腹腔內窺鏡輸精 綿羊同期發(fā)情處理常用陰道栓法，包括CIDR 栓和海綿栓等。陰道栓法具有使用安全、發(fā)情率高、無不良反應等優(yōu)點。本次實驗中，為保證同期發(fā)情效果，使用CIDR 栓法進行埋植，同時準確保證了放栓、撤栓、輸精時間，因此保證了較高的發(fā)情率。綿羊凍精輸精的妊娠率目前無法超過50%，本實驗采用腹腔內窺鏡輸精方式進行輸精。腹腔內窺鏡輸精技術減少了精子的運動距離，能夠提高冷凍精液受胎率。張效生等對腹腔內窺鏡輸精效果的影響因素進行研究，篩選出最佳輸精時間為撤栓后48 h、最佳輸精部位為子宮角前、中段，最低有效輸精劑量為2×10個。在本研究中，腹腔內窺鏡輸精借鑒了以上技術要點，輸精時間采取撤栓后48 h，輸精部分為子宮角前段。為保證妊娠效果，輸精劑量達到3×10個。石國慶等用腹腔內窺鏡對活力僅0.2 的冷凍精液進行子宮角深部輸精，情期受胎率達72.73%。張朝玉等對135 只薩福克羊開展內窺鏡輸精配種試驗，一次輸精受胎率達到84%。本研究中洼地綿羊的妊娠率為71.43%，平均胎產羔1.8 只，取得較為理想的效果。

3.2 東洼雜交F代生長性能分析 家畜雜交改良可以把同一畜種內不同品種之間優(yōu)勢生產性狀整合到一起，培育出具有多種優(yōu)秀生產性能的個體。張永東等將澳大利亞白羊、杜泊羊和小尾寒羊進行雜交，后代繁殖性能好，生長率高。王志武應用薩?？搜蚋牧忌轿鞅镜匮?，雜交1 代的胴體重平均提高7.73 kg，羊單只利潤增加196.40 元，改良效果顯著。本研究將東弗里升綿羊與洼地綿羊進行雜交，預期將東弗里升的產奶性能和洼地綿羊的多胎性能相結合，培育出乳肉兼用新品種，測定發(fā)現東洼雜交F代的同時期體重均高于洼地綿羊，其中18 月齡F代母羊顯著高于洼地綿羊母羊；育肥處理后，東洼F代育肥期的平均日增重、耗料增重比均高于洼地綿羊，但差異不顯著。李義海等將東弗里升與湖羊雜交，發(fā)現F代的體長、體高、胸圍測定結果顯著優(yōu)于湖羊。因此，東弗里升可以作為優(yōu)質改良品種，提高綿羊的生長性能。

4 結論

本實驗通過細管凍精腹腔內窺鏡技術進行東弗里升與洼地綿羊雜交，產羔率為128.57%（36/28），F代育肥期的平均日增重、耗料增重比與洼地綿羊相比有所提高。