朱東波 吳雄杰項 楊 吳先鋒 高 江 姚 成

安徽省包裝印刷產(chǎn)品質(zhì)量監(jiān)督檢驗中心 國家高分子材料質(zhì)量檢驗檢測中心（安徽）（安徽桐城 231400）

CNAS CL01-2018（ISO/IEC17025:2017）《檢測和校準實驗室能力認可準則》和RB/T 214—2017《檢驗檢測機構(gòu)資質(zhì)認定能力評價 檢驗檢測機構(gòu)通用要求》中，明文規(guī)定了實驗室在引入方法前，應驗證能夠正確地應用該方法，以確保實現(xiàn)所需的方法性能，并應保存驗證記錄。如果方法標準發(fā)布機構(gòu)修訂了方法，應在所需的程度上重新進行驗證[1-2]?？梢?，方法驗證在今后檢驗檢測實驗室的資質(zhì)能力認可/評價中日益重要。GB/T 27417—2017《合格評定化學分析方法確認和驗證指南》定義了方法驗證，即實驗室通過試驗，提供客觀有效證據(jù)，證明滿足檢測方法規(guī)定的要求；對于定量分析的方法驗證過程中的關(guān)鍵參數(shù)，至少應測定正確度和精密度[3]。正確度是指測量結(jié)果的正確度用于表述無窮多次重復性測定結(jié)果的平均值與參考值之間的接近程度[3]。

在方法驗證過程中，常常通過測量參考物質(zhì)或標準物質(zhì)來獲取正確度的信息。此外，也可通過加標回收試驗，利用回收率驗證方法的正確度。回收率越低，偏倚對方法的影響越大，正確度就越低。但是，大多數(shù)檢測項目沒有參考或標準物質(zhì)，這種情況下，實驗室只能依賴于統(tǒng)計學評價（t-檢驗和F-檢驗）對分析方法的偏倚顯著性進行評估。精密度是指在規(guī)定條件下，對同一或類似被測對象重復測量所得示值的一致程度[3]。精密度僅依賴于隨機誤差的分布，與真值或參考值無關(guān)。測定精密度取決于規(guī)定的測量條件，重復性和再現(xiàn)性條件是測量條件的兩個極端情況，因此精密度通常可分為重現(xiàn)性精密度和再現(xiàn)性精密度。精密度通常有3種方式表示：用標準偏差和變異系數(shù)進行評價；通過方法比對評價重復性/再現(xiàn)性或重復性限/再現(xiàn)性限；當方法標準中沒有給出精密度或沒有比對方法時，實驗室可以通過采用Horwitz方程和HorRat方程計算的結(jié)果來評價精密度。

本研究以SH/T 1591—1994《乙烯-乙酸乙烯酯共聚物（E-VAC）中乙酸乙烯酯含量測定方法》的方法驗證為例，對方法的正確度和精密度進行數(shù)據(jù)分析及評價，利用t檢驗和HorRat方程建立相應的方法驗證評價方法。

1 實驗方法

按照SH/T 1591—1994要求，根據(jù)乙酸乙烯酯含量稱取m（g）樣品置于250 mL錐形瓶中，加50 mL二甲苯和25 mL氫氧化鉀-乙醇，將錐形瓶轉(zhuǎn)入回流冷凝器上，加熱至200℃并保持2 h，取下冷卻至室溫，加入25 mL 6 g/L硫酸溶液，加入酚酞溶液，用濃度為c（mol/L）的氫氧化鈉溶液進行滴定，記錄滴定消耗體積V1（mL），同時做空白試驗，記錄滴定消耗體積V2（mL）。根據(jù)公式wVAC( )=其中0.086 09表示與1.0 mL氫氧化鈉標準溶液[c( N aOH)=1.000 mol/L]反應的乙酸乙烯酯的質(zhì)量（g），計算乙酸乙烯酯的檢驗結(jié)果。

2 結(jié)果與分析

2.1 正確度

在無法獲取參考或標準物質(zhì)時，采用比對試驗進行正確度分析；當每組檢測的平行次數(shù)為n（n≥6）時，可先對兩組數(shù)據(jù)進行F檢驗，分析是否有顯著性差異，若無顯著性差異，再按照t-檢驗對試驗結(jié)果進行分析，若結(jié)果小于t臨界值，可認為測定結(jié)果與標準值之間無顯著性差異[4]。

兩位試驗人員在同一環(huán)境中，使用相同的試劑、標準溶液以及同一滴定管，在規(guī)定的時間內(nèi)，各自連續(xù)測定8次，結(jié)果如表1所示。

表1 兩組實驗結(jié)果%

依據(jù)GB/T 4883—2008《數(shù)據(jù)的統(tǒng)計處理和解釋正態(tài)樣本離群值的判斷和處理》要求，對兩組實驗結(jié)果是否有離群值或異常值進行判斷和處理，運用格拉布斯（Grubbs）檢驗法對檢驗結(jié)果進行顯著性偏差分析，取置信概率為95%，即α=0.05。

當Gn＞G1-α(n)時，判定xn為離群值，否則判未發(fā)現(xiàn)xn是離群值。格布拉斯公式：Gn=xn-ˉ( )s；其中和s分別為樣品均值和樣品標準偏差。查格布拉斯臨界值表可知G0.95(8)=2.032。

按升序順序?qū)θ藛T1的檢驗結(jié)果進行排序：6.03，6.15，6.19，6.23，6.32，6.45，6.57，6.61，樣本量平均值=6.32，樣品標準偏差s=0.21，則G(8)=1.381＜G0.95(8)=2.032。G(1)=1.381＜G0.95(8)=2.032。因此，未發(fā)現(xiàn)x(8)=6.03和x(1)=6.61是統(tǒng)計離群值，即該組檢測結(jié)果無離群值。

按升序順序?qū)θ藛T2的檢驗結(jié)果進行排序：6.21，6.30，6.34，6.53，6.61，6.66，6.68，6.84，樣本量平均值=6.52，s=0.22，G(8)=1.454＜G0.95(8)=2.032，G(1)=1.409＜G0.95(8)=2.032。因此未發(fā)現(xiàn)x(8)=6.84和x(1)=6.21是統(tǒng)計離群值，即該組檢測結(jié)果無離群值。

兩組檢測結(jié)果均無離群值，可進行下一步分析。

2.1.1 F檢驗

2.1.2 t檢驗

取置信區(qū)間p=0.95，α=0.05，查t分布表可知，tα,n1+n2-2=t0.05,14=2.14。t=1.88＜t0.05,14，可認為測量結(jié)果與標準值之間無顯著性差異，比對試驗結(jié)果滿意。

由上述統(tǒng)計學評價結(jié)果可知，其正確性滿足標準要求。

2.2 精密度

精密度包括重復性和再現(xiàn)性。根據(jù)食品法典委員會《微量元素標準化的轉(zhuǎn)化方法》和歐盟Commission Regulation（EC）No337/2007報告，采用Horwitz方程和HorRat方程來判斷精密度是否接受[5-6]。重復性值和再現(xiàn)性值分別為HorRatr和HorRatR，要求HorRat值小于2。再現(xiàn)性相對標準偏差期望值為RSDoR，重復性相對標準偏差期望值為0.66RSDoR。

式中：w為質(zhì)量分數(shù)，RSDoR為期望相對標準偏差，RSDR為實際相對標準偏差；

2.2.1 不同人員進行VAC含量的再現(xiàn)性實驗，進行精密度分析

兩組檢驗結(jié)果的平均值：

2.2.2 對人員1測量結(jié)果進行重復性精密度分析

由HorRat的結(jié)果可知，其精密度滿足要求。

3 結(jié)語

兩組實驗人員采用同一檢測方法，使用同一試劑及儀器進行檢測，兩組結(jié)果與標準值無顯著差異，即正確度符合要求；精密度的重復性和再現(xiàn)性實際標準偏差均小于標準偏差期望值，精密度符合要求?？芍?，大多數(shù)沒有參考或標準物質(zhì)的檢測項目，通過t檢驗和HorRat方程進行分析方法驗證確實可行，也為實驗室依照CNAS CL01-2018制定方法確認和驗證程序文件及作業(yè)指導書提供了參考。