楊建偉

（天津市寶坻區(qū)疾病預(yù)防控制中心理化檢驗科，天津 301800）

有機磷農(nóng)藥（pesticide）是目前我國應(yīng)用最廣泛、用量最大的農(nóng)藥，是一類有機磷酸酯類或硫代磷酸酯類化合物[1，2]。我國已于2007 年1 月1 日起，全面禁止銷售和使用5 種高毒有機磷農(nóng)藥，但是有些地方仍存在亂用和濫用的現(xiàn)象，以及引發(fā)的急性和慢性有機磷中毒事件[3]。目前，有機磷農(nóng)藥殘留是食品安全管控中的一項重要內(nèi)容[4]，也是確保食品安全的關(guān)鍵環(huán)節(jié)。隨著有機磷農(nóng)藥種類的不斷增多，食品中有機磷農(nóng)藥殘留現(xiàn)象越來越多，而有機磷農(nóng)藥殘留是食品安全管控工作面臨的新的挑戰(zhàn)[5]。不同檢測方法是樣品前處理過程中有效提高其選擇性和靈敏度的關(guān)鍵[6]。氣相色譜質(zhì)譜檢測已經(jīng)是一種較為成熟的技術(shù)，但是在食品有機磷農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用有效性、準確性尚存在爭議，還需要臨床進一步探究[7]。本研究結(jié)合已發(fā)生的突發(fā)食物中毒的樣本，研究氣相色譜質(zhì)譜法在食品有機磷農(nóng)藥殘留檢測中的應(yīng)用價值，現(xiàn)報道如下。

1 材料與方法

1.1 儀器與試劑 氣相色譜/質(zhì)譜聯(lián)用儀（美國Agilent 公司，7890B）、臺式高速冷凍離心機（北京時代北利離心機有限公司，TGL-16）、氮吹儀（美國Techne 公司，DC-12）、電子天平（上海生物科技有限公司、VORTEX-T）、食品料理機、色譜柱DB-1701柱（美國Agilent 公司，DB-624）、搗碎儀（北京中西華大科技有限公司，8011S）。試劑：氯化鈉（分析純，國藥化學(xué)試劑公司，規(guī)格：2 g）；乙腈（色譜純，北京生物科技有限公司，規(guī)格：0.1 g）、正己烷（色譜純，德國默克色譜純公司，規(guī)格：0.4 g）。農(nóng)殘標準溶液：甲胺磷、三唑磷、敵敵畏、殺螟松、馬拉硫磷、氧化樂果、甲基對硫磷，所有農(nóng)藥的濃度均為100 μg/ml[8]。

1.2 方法 樣品為米飯、生白菜、生活用水、燒肉4 食物（所有樣品均在中毒現(xiàn)場采集）。樣品處理：分別將10 g 樣品加入50 ml 離心管中，使用移液器給離心管中加入15 ml 水和10 ml 濃度為0.10%的乙酸與乙腈混合液，蓋好離心管，振蕩60 s 充分混合后，使用搗碎儀將食品搗碎，然后將加工處理好的離心管樣品倒入燒杯中，加入2 g 氯化鈉、10 ml 乙腈，采用0.2 mg/kg 加標試驗，分別在待測液中加入QuEChERS 粉末（1.2 g 無水硫酸鎂）和0.4 g SA 粉末（固相吸附劑），渦旋10 min 后超聲提取30 min，將上清液抽取加入到50 ml 的離心管中，加入10 ml乙腈重復(fù)提取，合并提取液，30 ℃氮吹至近干，最后用正己烷復(fù)溶至1.0 ml，待測[9]。二氯甲烷和氯化鈉提取方式均與乙腈相同。

1.3 氣相色譜條件 色譜柱：DB-1701；載氣：氦氣（純度＞99.999%）；恒流：1.0 ml/min，程序升溫，初溫60 ℃保持2 min，以25 ℃/min 升溫至150 ℃，2 ℃/min升溫至260 ℃，進樣口250 ℃，不分流進樣[10]。質(zhì)譜條件：離子源溫度：230 ℃；四級桿溫度：150 ℃；電子能量：70 eV；GC/MS 傳輸溫度：280 ℃；溶劑延遲5 min，選擇離子掃描模式[11]。每個化合物選擇1 個定量離子[12]。

1.4 方法學(xué)驗證 試驗結(jié)束后，使用丙酮稀釋農(nóng)藥標準溶液，在相同色譜條件下，同時采用外標法對溶液進行定量，對用丙酮配制的標準工作溶液進行測定[13]。在氣相色譜質(zhì)譜法檢測法下對食品中的有機磷農(nóng)藥殘留濃度展開檢測。取5 g 勻漿好的生白菜及食用油各15 份，分別加入高、中、低3 不同濃度水平的混合標準溶液，進行加標回收試驗，使加標量分別為0.02、0.2、0.8 mg/kg，每個水平平行檢測6 次取平均值。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法 運用SPSS 21.0 軟件對本研究的數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學(xué)處理，計量資料以（）表示，組間兩兩比較分析行t檢驗，計數(shù)資料以[n（%）]表示，組間比較行X2檢驗，多組間比較采用F檢驗；P＜0.05 說明差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 提取溶劑的選擇 采用乙腈提取米飯、水、生白菜、燒肉提取效率高于二氯甲烷和氯化鈉，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 不同提取液米飯、水、生白菜、燒肉提取效率比較（%）

2.2 不同提取方法的選擇提取率比較 米飯、水、生白菜、燒肉分別采用QuEChERS 和Carb/NH2 柱兩種凈化方式的回收率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 不同提取方法的選擇提取率比較（%）

2.3 氣相色譜質(zhì)譜法檢測法下食品中不同有機磷農(nóng)藥殘留時間、豐度比及特征離子情況比較 有機磷農(nóng)藥殘留靜置15 min 時有機農(nóng)藥豐度比和特征離子高于靜置12～14 min（P＜0.05），見表3。

表3 氣相色譜質(zhì)譜法檢測法下食品中有機磷農(nóng)藥殘留時間、豐度比及特征離子情況比較

2.4 方法學(xué)驗證

2.4.1 7 種有機磷農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限比較 有機磷的檢測方法的線性范圍為0.1～5.0 μg/ml，線性相關(guān)系數(shù)為0.98～0.99，檢出限為0.002～0.045 mg/kg，見表4。

表4 7 種有機磷農(nóng)藥的線性方程、相關(guān)系數(shù)、檢出限比較

2.4.2 生白菜和食用油中7 種有機磷的加標回收率與相對標準偏差比較 氣相色譜質(zhì)譜法檢測白菜、食用油有機磷回收率均高于82.30%，相對標準偏差均處于2.11%～16.70%，見表5。

表5 生白菜和食用油中7 種有機磷的加標回收率與相對標準偏差比較（%）

3 討論

有機磷農(nóng)藥通常被用于果蔬等農(nóng)作物，主要用于除蟲、除草，以防治蟲害，提高產(chǎn)品的質(zhì)量[14]。但是有機磷農(nóng)藥殘留超標會在人體內(nèi)蓄積，產(chǎn)生較大的危害。大部分的有機磷農(nóng)藥屬于高毒性的農(nóng)藥，會造成急性中毒[15]。部分有機磷農(nóng)藥會發(fā)生慢性中毒，甚至?xí){下一代的健康[16]。相關(guān)調(diào)查顯示[17]，逐漸上升的惡性腫瘤發(fā)病率與農(nóng)藥殘留有密切的關(guān)系。因此，有機磷農(nóng)藥殘留的準確檢測至關(guān)重要。

本研究結(jié)果顯示，采用乙腈提取米飯、水、生白菜、燒肉提取效率分別為91.21%、92.08%、98.45%、103.34%均高于二氯甲烷（81.02%、85.39%、89.06%、90.34%）和氯化鈉（82.44%、87.44%、88.94%～92.98%）（P＜0.05），提示采用乙腈提取有效率最高，是一種良好的提取液。分析認為可能是由于乙腈提取可降低基質(zhì)中的脂肪、蠟質(zhì)和一些親脂性色素的干擾，還有沉淀蛋白的作用，大大減少了提取液中的雜質(zhì)，進而作為提取液，可最大化提取有機磷殘留，進而提高檢測結(jié)果的準確性[18，19]。因此，與二氯甲烷、氯化鈉基質(zhì)干擾比較，選擇乙腈作為氣相色譜質(zhì)譜法在食品有機磷農(nóng)藥殘留檢測中的提取液最為合適。同時研究顯示，采用0.2 mg/kg 加標試驗，米飯、水、生白菜、燒肉分別采用QuEChERS 和Carb/NH2 柱兩種凈化方式的回收率比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），結(jié)果表明QuEChERS 和Carb/NH2 柱兩種凈化方式回收率基本一致，但是在燒肉前處理過程中，發(fā)現(xiàn)采用QuEChERS 凈化方式其回收率優(yōu)于Carb/NH2 柱凈化方式，且發(fā)現(xiàn)Carb/NH2 柱凈化液相對澄清，堵塞、額外加壓情況較少。因此，相對而言QuEChERS 凈化方式更具有應(yīng)用優(yōu)勢，該結(jié)論與邵天時[20]的報道相似。分析原因為QuEChERS 屬于吸水機，可促進水和有機相的分離，且在吸水的同時放熱，使萃取液溫度更利于有機磷農(nóng)藥的萃取，同時合適的溫度，凈化時可直接進行渦旋離心。因此，QuEChERS 凈化不僅操作簡單快速，而且更適用于食物樣品的凈化。同時研究顯示，有機磷農(nóng)藥殘留靜置15 min 時有機農(nóng)藥豐度比、特征離子高于靜置12～14 min（P＜0.05），提示不同靜置時間對氣相色譜質(zhì)譜法檢測食品有機磷農(nóng)藥殘留結(jié)果有影響，且15 min 時提取率最高。最后，氣相色譜質(zhì)譜法檢測白菜、食用油有機磷回收率均高于82.30%，相對標準偏差均處于2.11%～16.70%，進一步提示氣相色譜質(zhì)譜法檢測食品有機磷農(nóng)藥殘留具有相對較高的準確性。

綜上所述，氣相色譜質(zhì)譜法檢測食品有機磷農(nóng)藥殘留操作簡單，而且具有較高的靈敏度，可作為食品中有機磷農(nóng)藥殘留的首選檢測方法。