黃曉楠，劉玉林

（遂寧市中心醫(yī)院檢驗科，四川 遂寧 629000）

孕酮（PROG）和人絨毛膜促性腺激素（β-hCG）是目前臨床應(yīng)用最廣泛的激素檢測項目，在婦產(chǎn)科等科室得到廣泛的應(yīng)用。其檢測方法不斷變遷，從放射免疫測定法到酶聯(lián)免疫測定法再到化學(xué)發(fā)光免疫測定法。雅培i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光分析儀采用了化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法（CMIA）定量測定人血清的激素水平。依據(jù)ISO 15189:2012《醫(yī)學(xué)實驗室質(zhì)量和能力認(rèn)可準(zhǔn)則》[1]和《醫(yī)療機(jī)構(gòu)臨床實驗室管理辦法》[2]，雅培i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光分析儀在用于檢測項目前，須對其性能進(jìn)行驗證，確保其能夠滿足臨床需求，保證檢驗質(zhì)量。本研究參照美國臨床和實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）頒布的EP 系列文件及CNAS-GL037《臨床化學(xué)定量檢驗程序性性能驗證指南》[3]對i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀上檢測的PROG 和β-hCG 的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍進(jìn)行驗證和評價，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2021 年4 月1 日-30 日到遂寧市中心醫(yī)院進(jìn)行健康體檢人員的外觀正常的新鮮血清，-20 ℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.2 儀器與試劑 雅培i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光免疫分析儀；孕酮測定試劑盒（批號21450UI01）；人絨毛膜促性腺激素測定試劑盒（批號19561UI01）。

1.3 校準(zhǔn)品 美國雅培公司的原裝校準(zhǔn)品：孕酮校準(zhǔn)品（批號20003UI01）；人絨毛膜促性腺激素校準(zhǔn)品（批號20306UI01）。

1.4 質(zhì)控品 美國伯樂公司的免疫分析質(zhì)控品：水平1（批號40381），水平2（批號40382）；衛(wèi)生部臨床檢驗中心2021 年第一次內(nèi)分泌室間質(zhì)量評價質(zhì)控品5 份（樣本編號202111、202112、202113、202114、202115）。

1.5 方法

1.5.1 精密度驗證 選取2 個不同濃度的樣本，其中1 個樣本被測濃度水平在醫(yī)學(xué)決定水平左右或參考區(qū)間左右，每天測定1 次，每次重復(fù)測定4 次，連續(xù)測定5 d，分別計算總均值、批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差及實驗室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（中間）；根據(jù)廠家要求的標(biāo)準(zhǔn)差、有效自由度及C 值計算得到驗證值（V），如測量的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差、實驗室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差（中間）小于或等于驗證值，則驗證合格。

1.5.2 正確度驗證 參考CLSI EP15-A2 文件[4]，用20個血清標(biāo)本（高中低值，包含醫(yī)學(xué)決定水平）或5 個室間質(zhì)評樣本與通過ISO15189 認(rèn)證的檢驗機(jī)構(gòu)進(jìn)行比對試驗?！?0%的標(biāo)本偏移＜1/2 總允許誤差（TEA），其中包含醫(yī)學(xué)決定水平，則認(rèn)為正確度驗證通過。

1.5.3 線性范圍的驗證 參考CLSI EP6-A 文件[5]，選擇高值樣本（濃度接近廠家說明書標(biāo)示的高限值）和低值樣本進(jìn)行驗證。將高值樣本按0、0.2、0.4、0.6、0.8、1 稀釋度稀釋，每個濃度測定2 次。做線性回歸分析，得出實測值與理論值的線性關(guān)系Y＝aX+b，計算相關(guān)系數(shù)（R2），得到的線性范圍并與廠家聲稱的進(jìn)行比較。

1.5.4 臨床可報告范圍的驗證 選取已知濃度在分析測量范圍內(nèi)的高值樣本1 份（接近測量范圍上限），用廠家推薦的稀釋液按照廠家推薦的稀釋倍數(shù)對該樣本進(jìn)行稀釋，之后將樣本及稀釋樣本重復(fù)測定2 次，計算平均值。以樣品原倍結(jié)果平均值作為理論濃度，將樣品進(jìn)行稀釋后得出的結(jié)果的均值為還原濃度,再計算還原濃度與理論濃度的偏差，偏差小于或等于該項目TEA 時的最大稀釋倍數(shù)則為該項目的最大稀釋倍數(shù)?？蓤蟾娣秶呦迍t采用線性區(qū)間高限與最大稀釋倍數(shù)的乘積，低限采用線性范圍低限。

1.6 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 19.0 和Excel 2018 對數(shù)據(jù)進(jìn)行處理和分析。計量資料以（）表示，行t檢驗；計數(shù)資料以（%）表示，行X2檢驗；以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 精密度結(jié)果 PROG 和β-hCG 的批內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差和實驗室內(nèi)標(biāo)準(zhǔn)差均小于驗證值，驗證通過，見表1。

表1 PROG 和β-hCG 的精密度結(jié)果

2.2 正確度結(jié)果 PROG 和β-hCG 偏倚均小于1/2 TEA，驗證通過，見表2、表3。

表2 β-hCG 正確度結(jié)果

2.3 線性范圍結(jié)果 驗證項目的斜率a 值均在（1.00±0.03）范圍內(nèi)，R2＞0.99，且測定的線性范圍在廠家聲稱的范圍內(nèi)，驗證通過，圖1、表4、表5、圖2。

圖2 PROG 線性回歸

表4 β-hCG 線性范圍驗證

表5 PROG 線性范圍驗證

圖1 β-hCG 線性回歸

2.4 臨床可報告范圍 PROG 的臨床可報告范圍是0.1～389.3 nmol/L，β-hCG 的臨床可報告范圍是2.46～206 597.1 mIU/ml，見表6。

表6 PROG 和β-hCG 的臨床可報告范圍

3 討論

依據(jù)ISO15189 相關(guān)要求，參考美國臨床實驗室標(biāo)準(zhǔn)協(xié)會（CLSI）的系列文件和標(biāo)準(zhǔn)建立性能驗證方案[5-7]，檢測儀器在應(yīng)用于臨床前需要對其檢測的檢驗項目進(jìn)行性能驗證，以保證其質(zhì)量并滿足臨床需求。驗證內(nèi)容包括但不局限于精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍等。雅培i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光分析儀采用微粒子化學(xué)發(fā)光原理定量檢測標(biāo)本，與傳統(tǒng)方法相比檢測速度快、靈敏度高、操作簡單、故障率低[8]等特點，檢測血清標(biāo)志物的性能驗證已有相關(guān)報道[9-12]，結(jié)果均符合廠家聲明。但廠家給出的性能驗證及指標(biāo)參數(shù)僅代表廠家的實驗指標(biāo)，本實驗室的檢測環(huán)境，如溫濕度，實驗用水及儀器狀態(tài)等與廠家并非完全一致，故使用前須進(jìn)行性能驗證[13]。

精密度是重復(fù)測定值之間的一致性，是檢測系統(tǒng)的基本分析性能指標(biāo)之一，可反映檢測系統(tǒng)的隨機(jī)誤差[14，15]。本研究顯示，雅培i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光分析儀檢測PROG 和β-hCG 的批內(nèi)CV 和批間CV 均低于驗證值，符合廠家聲明，滿足臨床需求，說明該儀器檢測的重復(fù)性好。有研究證實[16]，雅培i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光分析儀性能穩(wěn)定。正確度是大批檢驗結(jié)果的均值與真值的一致程度，正確度驗證是與通過了ISO15189 的臨床試驗進(jìn)行比較。本研究選用自留標(biāo)本和衛(wèi)生部質(zhì)控樣本進(jìn)行測定，結(jié)果偏倚均小于12.5%，符合廠家聲明，與楊佳[17]的結(jié)論一致。線性范圍指測定值與稀釋倍數(shù)呈線性關(guān)系的范圍，采用線性稀釋回收法[9]，保證樣本的檢測結(jié)果在線性范圍內(nèi)準(zhǔn)確可靠。本次試驗結(jié)果顯示，驗證項目的斜率a 值均在（1.00±0.03）范圍內(nèi)，R2＞0.99，且測定的線性范圍在廠家聲稱的范圍內(nèi)，說明實測值與理論值具有良好的相關(guān)性，結(jié)果符合要求。黃學(xué)強(qiáng)等[18]也證明β-hCG 結(jié)果在線性范圍內(nèi)可靠。本次驗證通過稀釋的方法對臨床可報告范圍進(jìn)行測定，結(jié)果顯示PROG 的臨床可報告范圍為0.1～389.3 nmol/L；另外，β-hCG 的臨床可報告范圍在2.46～206 597.1 mIU/ml，與曾令恒等[19]報道的2.6～199000 mIU/ml 基本一致，證明雅培i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光分析儀的檢測能力符合要求。

綜上所述，雅培i2000SR 全自動化學(xué)發(fā)光分析儀檢測PROG 和β-hCG 的精密度、正確度、線性范圍、臨床可報告范圍符合ISO15189 要求并與廠家聲明一致，可滿足臨床需求。