張黎，徐秋霞，余成浩，李良文

子宮肌瘤雖然是一種良性腫瘤，但是病因復(fù)雜，除了目前普遍認(rèn)為它是激素依賴性腫瘤，還與各種細(xì)胞因子、趨化因子、生長(zhǎng)因子等有關(guān)，其中白介素IL-2、IL-6、IL-8、IL-11、IL-13、IL-17被證明與子宮肌瘤的發(fā)生發(fā)展有密切關(guān)系[1,2]，在本實(shí)驗(yàn)中，通過(guò)檢測(cè)子宮肌瘤大鼠血清中白介素的表達(dá)水平，探討三棱-莪術(shù)組分配伍對(duì)子宮肌瘤大鼠相關(guān)炎癥因子的調(diào)控機(jī)制。

1 材料

1.1 動(dòng)物

SD雌性大鼠，體重（180-220 g），由簡(jiǎn)陽(yáng)達(dá)碩動(dòng)物科技有限公司提供，許可證號(hào)：SCXK（川）2013-24。

1.2 藥品試驗(yàn)

用三棱飲片（四川皓博有限公司，批號(hào)：160301，），莪術(shù)油（陜西昊辰生物科技有限公司，批號(hào)：EZ150801），桂枝茯苓膠囊（江蘇康緣藥業(yè)股份有限公司，批號(hào)：15110611512，）。己烯雌酚（成都西亞化工股份有限公司，批號(hào)：K9212），黃體酮注射液（浙江仙琚制藥股份有限公司，批號(hào)：150610），鹽酸腎上腺素注射液（遠(yuǎn)大醫(yī)藥有限公司，批號(hào)：160401）。

用蒸餾水溶解桂枝茯苓膠囊中的內(nèi)容物，配制0.09 g生藥/mL藥液。按照文獻(xiàn)[1]方法提取三棱總黃酮，并用蒸餾水配制成1 g生藥/mL藥液。乳化莪術(shù)油，配制成1 g生藥/mL的藥液。將以上三棱總黃酮與莪術(shù)揮發(fā)油1:1進(jìn)行混合，分別配制三棱總黃酮-莪術(shù)揮發(fā)油組分配伍高、中、低組（66.7%、33.3%、16.7%）。

1.3 試劑與儀器

ELISA試劑盒，規(guī)格：96孔/盒，abcam生產(chǎn)，北京永輝生物科技有限公司進(jìn)口分裝，移液槍，大龍興創(chuàng)實(shí)驗(yàn)儀器（北京）有限公司生產(chǎn)，槍頭和EP管由美國(guó)Axygen公司生產(chǎn)。

2 方法

2.1 分組

大鼠隨機(jī)分為6個(gè)組，即空白組、模型組、陽(yáng)藥組（桂枝茯苓膠囊）、三棱-莪術(shù)組分配伍（高、中、低）組。

2.2 造模及給藥

本實(shí)驗(yàn)根據(jù)文獻(xiàn)[1]中的方法進(jìn)行造模，大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)后開(kāi)始造模。空白組大鼠每周一、三、五下肢外側(cè)肌肉注射生理鹽水0.05 mL/只?？瞻捉M外，各組大鼠灌胃己烯雌酚藥液（1.35 mg﹒(kg﹒d）-1，隔日肌注黃體酮注射液（1.0 mg/只），每周給予隨機(jī)外界刺激，第4周開(kāi)始，皮下注射鹽酸腎上腺素注射液0.9 mg﹒(kg﹒d）-1。造模后給予各組大鼠相應(yīng)受試物，陽(yáng)藥組給予桂枝茯苓膠囊藥液10 mL﹒kg-1，S-E高組、S-E中組和S-E低組分別以66.7%、33.3%、16.7%的S-E藥液10 mL﹒kg-1，共5周。

2.2 ELISA檢測(cè)

按試劑盒說(shuō)明書(shū)步驟，用ELISA法檢測(cè)大鼠血清中ⅠL‐1α、ⅠL‐1β、IL-2、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-18的濃度水平。

2.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

3 結(jié)果

與空白組比較，陽(yáng)藥組、S-E中組的IL-1a明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，陽(yáng)藥組ⅠL‐1α明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表1-1）。

與空白組比較，陽(yáng)藥組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-1b相近，無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，陽(yáng)藥組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-1b相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見(jiàn)表1-1）。

與空白組比較，陽(yáng)藥組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-2明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，S-E低組的IL-2明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表1-1）。

與空白組比較，S-E中組、S-E低組的IL-4明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，S-E中組、S-E低組的IL-4明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表1-1）。

表1 -1 各組大鼠白細(xì)胞介素的比較（±S）

表1 -1 各組大鼠白細(xì)胞介素的比較（±S）

注：與空白組比較，* P<0.05，** P<0.01；與模型組比較，?P<0.05，?? P <0.01。

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與空白組比較，模型組、陽(yáng)藥組、S-E中組、S-E低組的IL-5明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，各組間的IL-5相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見(jiàn)表1-2）。

與空白組比較，模型組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-6明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.01）；與模型組比較，各組間的IL-6相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見(jiàn)表1-2）。

與空白組比較，各組間的IL-7相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；與模型組比較，各組間的IL-7相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見(jiàn)表1-2）。

與空白組比較，模型組、陽(yáng)藥組、S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-10明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，S-E中組、S-E低組的IL-10明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表1-2）。

表1 -2 各組大鼠白細(xì)胞介素的比較（±S）

表1 -2 各組大鼠白細(xì)胞介素的比較（±S）

注：與空白組對(duì)比，* P<0.05，** P<0.01；與模型組對(duì)比，?P<0.05，?? P <0.01。

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與空白組比較，S-E中組、S-E低組的IL-12明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，各組間的IL-12相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見(jiàn)表1-3）。

與空白組比較，S-E中組、S-E低組的IL-13明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，各組間的IL-13相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見(jiàn)表1-3）。

與空白組比較，S-E高組、S-E中組、S-E低組的IL-17明顯升高，，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，各組間的IL-17相近，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）（見(jiàn)表1-3）。

與空白組比較，S-E中組、S-E低組的IL-18明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；與模型組比較，S-E中組的IL-18明顯升高，差異具有顯著統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）（見(jiàn)表1-3）。

表1 -3各組大鼠白細(xì)胞介素的比較（ ±S）

表1 -3各組大鼠白細(xì)胞介素的比較（ ±S）

注：與空白組對(duì)比，* P<0.05，** P<0.01；與模型組對(duì)比，?P<0.05，??P <0.01。

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4 討論

子宮肌瘤的病理除了與類固醇激素密切相關(guān)以外，與機(jī)體本身的免疫功能也有關(guān)聯(lián)[3]。其中，白介素細(xì)胞既能與血細(xì)胞共同作用完成造血，也能通過(guò)在白細(xì)胞之間傳遞信息，激活免疫細(xì)胞活性，達(dá)到調(diào)節(jié)免疫功能的作用。而是增強(qiáng)免疫細(xì)胞活性這一功能，被認(rèn)為具有抗腫瘤的作用。在劉曾晶[4]等人對(duì)抗腫瘤中藥方劑的規(guī)律總結(jié)中，三棱、莪術(shù)常相須為用來(lái)治療腫瘤，能調(diào)節(jié)機(jī)體免疫，改善炎性微環(huán)境，抗血管新生，協(xié)同作用于腫瘤環(huán)境，抑制腫瘤侵襲和轉(zhuǎn)移[5]。莪術(shù)、三棱相須使用首見(jiàn)于《經(jīng)驗(yàn)良方》 ，張錫純常用其治療癥瘕、積聚的婦科疾病?！皻庵e為積，陽(yáng)之所聚為聚，積者陰氣也，聚者陽(yáng)氣也”，《難經(jīng)》中認(rèn)為子宮肌瘤就屬于癥積、瘕聚，癥積是為有形之邪，多在血分，瘕聚是為無(wú)形之邪，多在氣分，治療此病當(dāng)以行氣活血消癥為主。三棱、莪術(shù)則為治療子宮肌瘤的常用藥對(duì)，在對(duì)三棱-莪術(shù)組分配伍的研究中，三棱-莪術(shù)組分配伍能通過(guò)多種途徑有效防治子宮肌瘤[6,7]。

子宮肌瘤與白介素細(xì)胞的相關(guān)研究報(bào)道比較少，子宮腫瘤的發(fā)展與某些炎性細(xì)胞因子的釋放有關(guān)，涉及到IL-1、IL-2、IL-6、IL-17等，IL-2有明顯的抗腫瘤的作用，IL-6同時(shí)具備促炎和抗炎的作用[1,8-10]，其中IL-17能促進(jìn)子宮肌瘤纖維化。在本實(shí)驗(yàn)中檢測(cè)到子宮肌瘤大鼠血清中，白細(xì)胞介素ⅠL‐1α、ⅠL‐1β、IL-4、IL-5、IL-6、IL-7、IL-10、IL-12、IL-13、IL-17、IL-18的表達(dá)水平在模型組中有明顯的不同程度的升高，說(shuō)明機(jī)體內(nèi)有強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，導(dǎo)致其中的炎癥因子濃度增加，說(shuō)明機(jī)體免疫功能發(fā)生改變與子宮肌瘤的發(fā)生有一定關(guān)系。用三棱-莪術(shù)組分配伍進(jìn)行干預(yù)后，S-E（高、中、低）組中的白細(xì)胞介素又有進(jìn)一步的升高，我們推測(cè)這可能因子宮肌瘤導(dǎo)致機(jī)體內(nèi)有強(qiáng)烈的炎癥反應(yīng)，三棱-莪術(shù)組分配伍具有激活免疫細(xì)胞活性的作用，提高相關(guān)免疫因子的表達(dá)水平，增強(qiáng)機(jī)體免疫能力。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示子宮肌瘤的發(fā)生可能與血清中白介素細(xì)胞因子的表達(dá)改變有關(guān)，三棱-莪術(shù)組分配伍能有效治療子宮肌瘤可能通過(guò)改善相關(guān)白介素細(xì)胞因子，促進(jìn)其分泌，調(diào)節(jié)免疫細(xì)胞，從而引發(fā)免疫應(yīng)答，提高免疫功能，達(dá)到抗腫瘤的效果，從而發(fā)揮治療子宮肌瘤的作用。