藍 莉，黃英舉

（1.欽州市第二人民醫(yī)院病理科；2.欽州市第二人民醫(yī)院腫瘤外科，廣西 欽州 535000）

目前隨著人們生活方式的改變和生活節(jié)奏的加快，甲狀腺癌的發(fā)病率逐年上升，女性和男性的患病率之比為3∶1[1]。甲狀腺乳頭狀癌是甲狀腺癌中最常見的病理類型，占比較高，一般甲狀腺乳頭狀癌的病情發(fā)展緩慢，惡性程度較低，預(yù)后較好，若淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移超過30%，患者術(shù)后5年內(nèi)復(fù)發(fā)率極高，預(yù)后較差[2]。目前臨床有研究顯示，腫瘤的免疫微環(huán)境與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移、預(yù)后等都有緊密聯(lián)系[3]?；诖?，本研究探討了淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌免疫微環(huán)境的變化與預(yù)后的相關(guān)性，為臨床提供參考，現(xiàn)報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2020年1月至2021年4月欽州市第二人民醫(yī)院收治的31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者為研究對象進行回顧性分析，其中男性10例，女性21例；年齡30～69歲，平均年齡（48.52±2.34）歲；腺外浸潤20例，非腺外浸潤11例。本研究經(jīng)欽州市第二人民醫(yī)院倫理委員會批準。納入標準：①符合《甲狀腺疾病外科學(xué)》[4]中甲狀腺乳頭狀癌的診斷標準；②臨床資料完整；③經(jīng)病理檢查確診為淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌；④mRNA測序數(shù)據(jù)完整。排除標準：①同時合并其他惡性腫瘤；②隨訪時間不足60 d；③認知、精神存在障礙。

1.2 研究方法 采用TIMER軟件對31例淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌的樣本進行處理，主要是計算22種免疫細胞的浸潤百分比，幼稚CD4+T細胞浸潤程度均是0，對剩下21種免疫細胞均進行浸潤百分比計算，之后進行排列。以淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者術(shù)后病情加重或死亡作為觀察終點，再應(yīng)用Perl語言對免疫細胞含量矩陣和相關(guān)臨床信息作相應(yīng)的整合。采用Wilcoxon檢驗對不同臨床病理特征中的每個免疫細胞浸潤程度的差異進行計算和分析。得出的每種免疫細胞含量相對百分數(shù)中位值作為界線，然后把淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者分為低浸潤組和高浸潤組。應(yīng)用TIMER軟件分析各個免疫細胞和淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況，采用Log-rank檢驗生存分析評價甲狀腺乳頭狀癌患者的無進展生存時間，評估免疫微環(huán)境的改變與預(yù)后相關(guān)性。

1.3 觀察指標 ①比較免疫細胞浸潤豐度情況。②分析免疫細胞與性別的相關(guān)性。③分析免疫細胞與腫瘤外浸潤的相關(guān)性。④分析免疫細胞與預(yù)后的關(guān)系。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析 采用SPSS 19.0軟件進行數(shù)據(jù)處理。計量資料以（x）表示，組間比較采用獨立樣本t檢驗；計數(shù)資料以[例(%)]表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 免疫細胞浸潤豐度情況比較 幼稚CD4+T細胞的浸潤程度為0，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者的M0巨噬細胞、M2巨噬細胞、靜息狀態(tài)下肥大細胞、靜息狀態(tài)下樹突狀細胞、活化樹突狀細胞的浸潤豐度高于正常細胞，記憶B細胞、幼稚B細胞、M1巨噬細胞、CD8+T細胞、活化肥大細胞、嗜酸粒細胞的浸潤豐度低于正常細胞，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表1。

表1 免疫細胞浸潤豐度情況比較（x）

2.2 免疫細胞浸潤豐度與性別的相關(guān)性分析 不同性別患者M0巨噬細胞、M1巨噬細胞、M2巨噬細胞、靜息狀態(tài)樹突狀細胞、靜息狀態(tài)肥大細胞、活化樹突狀細胞、記憶B細胞、幼稚B細胞、CD8+T細胞、嗜酸粒細胞、活化的肥大細胞浸潤豐度比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表2。

表2 免疫細胞浸潤豐度與性別的相關(guān)性分析（x）

2.3 免疫細胞浸潤豐度與腫瘤外浸潤的相關(guān)性分析 腫瘤腺外浸潤患者的靜息狀態(tài)樹突狀細胞、M0和M2巨噬細胞的浸潤豐度較未出現(xiàn)腺外浸潤患者高，幼稚B細胞和CD8+T細胞的浸潤豐度低于未出現(xiàn)腺外浸潤患者，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05），見表3。

表3 免疫細胞浸潤豐度與腫瘤外浸潤的相關(guān)性分析（x）

2.4 分免疫細胞與預(yù)后的相關(guān)性分析 以患者病情嚴重或死亡作為觀察的終點，將出現(xiàn)差異的11種免疫細胞含量相對百分數(shù)中位值作為界線，把患者分為高浸潤組和低浸潤組，M0巨噬細胞（P=0.042）、M2巨噬細胞（P=0.023）、CD8+T細胞（P=0.043）、靜息狀態(tài)樹突狀細胞（P=0.045）、幼稚B細胞（P=0.032）與患者的預(yù)后相關(guān)（P＜0.05），見表4。M0巨噬細胞、M2巨噬細胞、靜息狀態(tài)樹突狀細胞高浸潤組患者的無進展生存時間比較短，幼稚B細胞、CD8+T細胞高浸潤組患者的無進展生存時間較長。

表4 免疫細胞與預(yù)后的相關(guān)性分析（x）

3 討論

腫瘤微環(huán)境主要組成成分有腫瘤細胞和周圍的各種免疫細胞、膠質(zhì)細胞、成纖維細胞及炎癥細胞因子、細胞間質(zhì)微血管等。有研究顯示，腫瘤在增殖生長與轉(zhuǎn)移時都離不開腫瘤微環(huán)境[5]，并且微環(huán)境中的免疫細胞浸潤與腫瘤發(fā)生發(fā)展更有緊密聯(lián)系。在腫瘤剛開始形成的時候，免疫細胞能夠?qū)ζ溥M行監(jiān)視和抗擊，但是隨著腫瘤不斷增多增大，免疫細胞就會與其產(chǎn)生協(xié)同作用，協(xié)助其完成免疫逃逸[6]。

腫瘤微環(huán)境中免疫和巨噬細胞是最常見的，其中巨噬細胞分為M0、M1和M2型，M0型的未活化狀態(tài)主要為幼稚細胞，受到M1和M2特異性的信號激活后活化，進而形成M1和M2型巨噬細胞[7]。M1型巨噬細胞主要作用是釋放出NO等物質(zhì)，并直接將其殺死，還能合成腫瘤壞死因子、白細胞介素-12白細胞介素-18、白細胞介素-1β等細胞因子，對Th1型細胞免疫應(yīng)答進行調(diào)節(jié)并有促進作用，進而產(chǎn)生有效的抗腫瘤效果[8]。M2型巨噬細胞能夠分泌白細胞介素-10、轉(zhuǎn)化生長因子-β1等細胞因子和免疫因子等，對Th2型細胞免疫應(yīng)答進行調(diào)節(jié)并促進，進而產(chǎn)生免疫抑制功能，促進腫瘤細胞因子的生長、遷移、增殖等[9]。有研究顯示，腎乳頭狀癌中的M2巨噬細胞浸潤度比較高，并且該細胞與病情進展有密切聯(lián)系[10]。還有研究發(fā)現(xiàn)，在甲狀腺乳頭狀癌中刺激M0型巨噬細胞，使其分化成M2型，該過程會對腫瘤的生長和轉(zhuǎn)移產(chǎn)生促進作用[11]。本研究結(jié)果結(jié)果顯示，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者的M0巨噬細胞、M2巨噬細胞、靜息狀態(tài)下肥大細胞、靜息狀態(tài)下樹突狀細胞、活化樹突狀細胞的浸潤豐度高于正常細胞，記憶B細胞、幼稚B細胞、M1巨噬細胞、CD8+T細胞、活化肥大細胞、嗜酸粒細胞的浸潤豐度低于正常細胞；腫瘤腺外浸潤患者的靜息狀態(tài)樹突狀細胞和M0、M2巨噬細胞浸潤豐度較高，幼稚B細胞和CD8+T細胞的浸潤豐富較低；M0巨噬細胞、M2巨噬細胞、靜息狀態(tài)樹突狀細胞高浸潤組患者的無進展生存時間較短，幼稚B細胞、CD8+T細胞高浸潤組患者的無進展生存時間較長。樹突狀細胞是人體抗原提呈細胞中活化效果最好的，能夠有效激活CD8+和CD4+T細胞，在免疫應(yīng)答中主要起到啟動和調(diào)控的作用[12-13]。本研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，靜息狀態(tài)樹突狀細胞含量高的患者預(yù)后相對更差，并且腫瘤出現(xiàn)周圍浸潤和轉(zhuǎn)移的概率也更高。淋巴細胞是免疫細胞重要的組成部分，在本研究中CD8+T細胞在無腫瘤腺外浸潤組的浸潤豐度更高，與患者的預(yù)后呈正相關(guān)。

綜上所述，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移性甲狀腺乳頭狀癌患者的免疫微環(huán)境具有一定的特異性，與預(yù)后有緊密聯(lián)系，該結(jié)果也為臨床的免疫治療提供新方向。