全球癌癥報(bào)告顯示，結(jié)直腸癌的發(fā)病率和死亡率均位列前3，發(fā)病人群還有年輕化的趨勢。結(jié)直腸癌患者主要的死亡原因是繼發(fā)的轉(zhuǎn)移，研究報(bào)道轉(zhuǎn)移性結(jié)直腸癌患者5年生存率不足20%。因此，找到對(duì)結(jié)腸癌具有預(yù)后預(yù)測價(jià)值的生物標(biāo)志物是研究的重點(diǎn)。

RNA甲基化在癌癥的發(fā)展過程中起著十分重要的地位。隨著RNA測序技術(shù)的發(fā)展，許多RNA修飾不斷被發(fā)現(xiàn)，包括5-甲基胞嘧啶、N1-甲基腺苷、N6甲基腺苷、N7-甲基腺苷等。甲基化在結(jié)腸癌的適應(yīng)性免疫中起重要調(diào)節(jié)作用，甲基化狀態(tài)的改變能影響結(jié)腸癌患者對(duì)免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療的反應(yīng)性。此外，結(jié)腸癌的甲基化狀態(tài)受腫瘤內(nèi)部缺氧的環(huán)境影響發(fā)生改變，這種變化促進(jìn)了轉(zhuǎn)移的發(fā)生。以上研究表明甲基化影響結(jié)腸癌的發(fā)生以及結(jié)腸癌的腫瘤微環(huán)境。

“編規(guī)”對(duì)哪些材料進(jìn)行限價(jià)計(jì)費(fèi)是必須進(jìn)行研究的，因?yàn)樗粌H是概（估）算編制的依據(jù)，也是招標(biāo)投標(biāo)計(jì)價(jià)的參考。限價(jià)材料種類與工程類別、性質(zhì)密切相關(guān)，不同類別、性質(zhì)的工程，用到的主要材料及權(quán)重是不同的。

lncRNA的甲基化修飾對(duì)腫瘤的發(fā)展具有十分重要的影響，研究表明ALKBH5，一種去甲基化酶，通過去甲基化lncRNA NEAT1來促進(jìn)胃癌的侵襲和轉(zhuǎn)移。異常的甲基化導(dǎo)致HNF1A-AS1的減少可以通過促進(jìn)上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化行為，導(dǎo)致喉鱗狀細(xì)胞癌的惡性進(jìn)展。體內(nèi)和體外實(shí)驗(yàn)表明METTL14 的敲減能大幅抑制lncRNAXIST的甲基化，從而增強(qiáng)了結(jié)腸癌轉(zhuǎn)移能力。以上研究反映甲基化對(duì)lncRNAs的調(diào)控對(duì)腫瘤的進(jìn)程起到重要調(diào)節(jié)作用。

mG是一種最常發(fā)生在tRNA上的甲基化修飾，有助于維持tRNA的穩(wěn)定性。近來，研究表明mG也影響其他類型的RNA 的穩(wěn)定性。然而mG 對(duì)lncRNAs 的影響以及其在結(jié)腸癌中發(fā)揮的功能尚無研究報(bào)道。本研究根據(jù)TCGA 數(shù)據(jù)庫構(gòu)建了mGlncRNAs風(fēng)險(xiǎn)模型。隨后評(píng)估風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系。最后探究風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)結(jié)腸癌患者微衛(wèi)星不穩(wěn)定性、免疫微環(huán)境及免疫檢查點(diǎn)表達(dá)情況的影響，旨在為轉(zhuǎn)移性結(jié)腸癌患者的治療和管理提供一定的指導(dǎo)意義。

1 材料和方法

1.1 結(jié)腸組織及實(shí)驗(yàn)試劑

精養(yǎng)是超出一般粗放式和常規(guī)的、依據(jù)科學(xué)道理的、與時(shí)俱進(jìn)的行為。從現(xiàn)代汽車養(yǎng)護(hù)而言，科學(xué)養(yǎng)護(hù)就是遵循先檢測(如對(duì)發(fā)動(dòng)機(jī)在用油的檢測)，根據(jù)檢測結(jié)果實(shí)行有針對(duì)性的養(yǎng)護(hù)方案的養(yǎng)護(hù)理念和技術(shù)。針對(duì)傳統(tǒng)汽車維修而言，精養(yǎng)就是先診斷后維修，從科學(xué)檢測、經(jīng)制定科學(xué)維修方案、到實(shí)施科學(xué)工藝，從設(shè)計(jì)角度、工作原理分析、材料選擇、加工、以數(shù)據(jù)圖形集成和分析、結(jié)合經(jīng)驗(yàn)統(tǒng)籌到精裝配的維修全過程。精養(yǎng)是建立在“人、環(huán)境、設(shè)備工具、工藝、流程”等精細(xì)化、精致化基礎(chǔ)之上實(shí)現(xiàn)的結(jié)果。這也就是說我們執(zhí)行的所有工藝標(biāo)準(zhǔn)必須是可量化的，而不只是經(jīng)驗(yàn)值，所有的標(biāo)準(zhǔn)必須可追溯，既必須是符合國際標(biāo)準(zhǔn)、國家標(biāo)準(zhǔn)或企業(yè)標(biāo)準(zhǔn)。

1.2 數(shù)據(jù)來源及篩選m7G-lncRNAs

單因素及多因素Cox 篩選獨(dú)立預(yù)后的m7GlncRNAs。根據(jù)多因素Cox結(jié)果構(gòu)建風(fēng)險(xiǎn)模型，風(fēng)險(xiǎn)得分=（風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)1*lncRNA1 的表達(dá)量）+（風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)2*lncRNA2的表達(dá)量）+（風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)3*lncRNA3的表達(dá)量）+……+（風(fēng)險(xiǎn)指數(shù)n*lncRNAn的表達(dá)量）。

1.3 構(gòu)建m7G-lncRNAs風(fēng)險(xiǎn)模型

結(jié)合文獻(xiàn)［10］和GSEA 數(shù)據(jù)庫（http://www.gseamsigdb.org/gsea/index.jsp）的GOMF_M7G_5_PPPN_DIPHOSPHATASE_ACTIⅤITY、GOMF_RNA_7MET HYLGUANOSINE_CAP_BINDING、GOMF_RNA_CAP_BINDING基因集，獲取m7G基因。下載TCGA數(shù)據(jù)庫（https://portal.gdc.cancer.gov/）中結(jié)腸癌患者的轉(zhuǎn)錄組數(shù)據(jù)和臨床數(shù)據(jù)，使用Perl 腳本區(qū)分lncRNA 和mRNA。以|Pearson R|＞0.4，＜0.001 篩選mG-lncRNAs，使用“ggalluvial”包繪制共表達(dá)桑基圖。

1.4 驗(yàn)證m7G-lncRNAs風(fēng)險(xiǎn)模型

根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分的中位值，將患者分為高危和低危兩組。K-M生存曲線確定兩組間總生存的差異。使用“pheatmap”包繪制風(fēng)險(xiǎn)基因在風(fēng)險(xiǎn)模型中的表達(dá)量。使用“SurvivalROC”、“Survival”包繪制ROC 曲線、Cindex及諾莫圖對(duì)風(fēng)險(xiǎn)模型進(jìn)行驗(yàn)證。同時(shí)，分析風(fēng)險(xiǎn)得分與結(jié)腸癌患者臨床病理特征的關(guān)系，并使用“Survival”包分析風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)不同臨床亞組患者預(yù)后的預(yù)測意義。

1.5 風(fēng)險(xiǎn)模型與結(jié)腸癌微衛(wèi)星不穩(wěn)定性和免疫浸潤的聯(lián)系

比較風(fēng)險(xiǎn)得分與結(jié)腸癌患者的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性及細(xì)胞干性指數(shù)的關(guān)系。使用“l(fā)imma”，“org.Hs.eg.db”，“clusterProfiler”和“enrichplot”包分析高低風(fēng)險(xiǎn)組患者在分子水平上的功能差異。使用ESTIMATE分別計(jì)算結(jié)腸癌患者的基質(zhì)細(xì)胞打分，免疫細(xì)胞打分以及總打分。使用CIBERSORT分析結(jié)腸癌患者組織中免疫細(xì)胞含量。最后使用Pearson相關(guān)性分析探究風(fēng)險(xiǎn)得分與免疫細(xì)胞含量的相關(guān)性。

配對(duì)的結(jié)腸癌及癌旁正常組織來源于在蚌埠醫(yī)學(xué)院第一附屬醫(yī)院接受治療的患者（表1）。ATXN2、G3BP1及GAPDH一抗（武漢三鷹生物技術(shù)），二抗（武漢愛博泰科生物技術(shù)）。蛋白上樣緩沖液、蛋白分子量標(biāo)準(zhǔn)、RIPA裂解液（強(qiáng)）及蛋白酶抑制劑混合物（碧云天生物技術(shù)），PAGE凝膠快速制備試劑盒（10%）（上海雅酶生物醫(yī)藥）。所有實(shí)驗(yàn)均通過倫理審查（倫科批字【2020】第238號(hào)）。

使用組織剪剪碎病人的組織，PBS清洗2遍。使用RIPA裂解液充分裂解患者組織，離心獲取上清即為蛋白樣品。使用酶標(biāo)儀計(jì)算每個(gè)患者的蛋白樣品濃度，并使用RIPA按照濃度最低的樣品統(tǒng)一所有樣品的濃度。按說明書要求加入適量蛋白上樣緩沖液，在沸水中使蛋白變性，然后放入-20 ℃冰箱保存，之后每次使用時(shí)重新沸水浴10 min。按說明書配置分離膠和濃縮膠，加入蛋白Marker和蛋白樣品，120 Ⅴ電泳，隨后200 mA轉(zhuǎn)膜2 h，TBST清洗3次后使用5%脫脂奶粉室溫封閉2 h，TBST洗膜3次，一抗封閉過夜。TBST清洗3次后二抗室溫孵育1.5 h，TBST 再次洗膜后上機(jī)顯影。使用ImageJ軟件計(jì)算ATXN2、G3BP1和GAPDH的灰度值，使用GAPDH對(duì)ATXN2、G3BP1的表達(dá)量進(jìn)行校正，使用配對(duì)檢驗(yàn)比較癌旁組織與癌組織中ATXN2、G3BP1相對(duì)灰度值的差異。

所有的統(tǒng)計(jì)分析使用R版本4.1.0進(jìn)行。使用配對(duì)檢驗(yàn)對(duì)蛋白印跡結(jié)果進(jìn)行分析；使用Kaplan-Meier曲線比較高低風(fēng)險(xiǎn)組患者的生存；使用多因素Cox分析進(jìn)行模型的構(gòu)建及獨(dú)立預(yù)后分析；相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)性檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)為α=0.05。

1.6 模型lncRNAs調(diào)控的分子靶點(diǎn)

以|Pearson R| ＞0.6，＜0.001 篩選出與模型lncRNAs具有共表達(dá)關(guān)系的分子作為模型lncRNAs參與調(diào)節(jié)的靶分子。使用Metascape 在線網(wǎng)站（https://metascape.org/gp/index.html#/main/step1）繪制靶分子的蛋白-蛋白互作網(wǎng)絡(luò)。使用Cytoscape的cytoHubba插件以Degree值排名前十位的分子作為模型lncRNAs調(diào)節(jié)的核心分子。使用TCGA數(shù)據(jù)庫、臨床組織樣本及HPA數(shù)據(jù)庫（https://www.proteinatlas.org/）分析這些核心分子在結(jié)腸癌組織及癌旁正常組織的表達(dá)情況。

1.7 蛋白印跡實(shí)驗(yàn)

以上兩個(gè)實(shí)例說明兩個(gè)問題，前一事例說明為了診斷的標(biāo)準(zhǔn)化而制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)否定了人類疾病的復(fù)雜性問題，不考慮臨床醫(yī)生的體格檢查和患者的主訴，而以單一的檢驗(yàn)結(jié)果是否陽性作為考量的標(biāo)準(zhǔn)；后一事例說明，醫(yī)生更傾向于采用客觀的檢查依據(jù)而不采信即使是患者親自訴說的自我感受。兩者的共同點(diǎn)是，隨著科技的進(jìn)步及現(xiàn)代化檢查設(shè)備的廣泛使用，技術(shù)至上已成為全社會(huì)更加堅(jiān)信的觀念，人們更加相信客觀的或由儀器表述的結(jié)果，而不愿相信主觀的感受，尤其是對(duì)經(jīng)驗(yàn)的分享。

1.8 數(shù)據(jù)分析

其中，pi表示第i個(gè)粒子；bj,i表示第i個(gè)粒子、第j個(gè)基函數(shù)中心；σj,i表示第i個(gè)粒子、第j個(gè)基函數(shù)的閾值；wj,i表示第i個(gè)粒子、第j個(gè)輸出權(quán)值。將RBF神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)誤差評(píng)價(jià)指標(biāo)，即式(3)所示的均方誤差函數(shù)作為粒子優(yōu)化適應(yīng)度函數(shù)。

2 結(jié)果

2.1 風(fēng)險(xiǎn)模型的構(gòu)建

TCGA 數(shù)據(jù)庫中提取28 個(gè)mG 基因和14 057 個(gè)lncRNA 的表達(dá)譜數(shù)據(jù)。共發(fā)現(xiàn)1722 個(gè)mG 相關(guān)的lncRNAs使用?；鶊D對(duì)其進(jìn)行可視化（圖1A）。單因素Cox分析結(jié)果表明43個(gè)mG-lncRNAs與結(jié)腸癌患者的生存顯著相關(guān)。多因素Cox分析進(jìn)一步篩選出12個(gè)lncRNAs 并將這些lncRNAs 用于風(fēng)險(xiǎn)模型的構(gòu)建（表2）。其中AC003101.2、AC005014.2、AC008760.1、AC092944.1、AL1161729.4、AL301422.4、AP001619.1、AP003355.1 和ZEB1-AS1 為高風(fēng)險(xiǎn)lncRNAs，AC025171.4、AC073957.3及TNFRSF10A-AS1為低風(fēng)險(xiǎn)lncRNAs。根據(jù)風(fēng)險(xiǎn)得分的中位值將結(jié)腸癌患者分為高低風(fēng)險(xiǎn)兩組。K-M曲線顯示，高風(fēng)險(xiǎn)組患者的總生存期明顯低于低風(fēng)險(xiǎn)組（圖1B）。風(fēng)險(xiǎn)曲線和風(fēng)險(xiǎn)散點(diǎn)圖顯示，隨著風(fēng)險(xiǎn)得分的增高，患者的死亡率也不斷增高（圖1C、D）。風(fēng)險(xiǎn)熱圖顯示風(fēng)險(xiǎn)基因的表達(dá)與風(fēng)險(xiǎn)得分的關(guān)系（圖1E）。最后，使用Cytoscape構(gòu)建mG基因與模型lncRNAs的共表達(dá)網(wǎng)絡(luò)，其中紅色節(jié)點(diǎn)為模型lncRNAs，藍(lán)色節(jié)點(diǎn)為mG 基因（圖1F）。使用?；鶊D對(duì)模型lncRNAs對(duì)結(jié)腸癌患者預(yù)后的影響及其與mG基因的共表達(dá)關(guān)系進(jìn)行可視化（圖1G）。

2.2 風(fēng)險(xiǎn)模型的驗(yàn)證

本研究進(jìn)一步分析風(fēng)險(xiǎn)得分與結(jié)腸癌患者微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)的聯(lián)系，結(jié)果風(fēng)險(xiǎn)得分較高的患者具有高微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)（MSS vs MSI-H：=0.034，圖4A、B）。風(fēng)險(xiǎn)得分與結(jié)腸癌患者的干細(xì)胞指數(shù)呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)關(guān)系（圖4C）。GSEA 富集分析顯示高低風(fēng)險(xiǎn)組患者間多數(shù)免疫相關(guān)通路存在明顯差異（圖4D、E）。結(jié)果表明風(fēng)險(xiǎn)得分與激活的肥大細(xì)胞（=-0.11，=0.045）和靜息CD4T細(xì)胞（=-0.14，=0.01，圖4F、G）。ESTIMATE結(jié)果顯示高風(fēng)險(xiǎn)組患者的基質(zhì)細(xì)胞打分和總打分均較高（圖4H）。多數(shù)免疫檢查點(diǎn)基因在高低風(fēng)險(xiǎn)組患者的表達(dá)也存在顯著差異（＜0.05，圖4I）。

2.3 風(fēng)險(xiǎn)得分可以預(yù)測結(jié)腸癌患者的臨床病理分期和預(yù)后

風(fēng)險(xiǎn)得分的高低與結(jié)腸癌患者較高的T分期，N分期以及M分期相關(guān)（圖3A、B）。同時(shí)風(fēng)險(xiǎn)得分也能預(yù)測不同亞組如T3～T4期，所有的N分期以及M0期結(jié)腸癌患者的預(yù)后（圖3D～G）。

將普通顯微鏡的聚光器換成一個(gè)特制的、中央有一遮光黑板的暗視野聚光器，使光線不能直接進(jìn)入視野而造成黑暗的背景；而從聚光器外周射入的光線可使玻片上的細(xì)菌因光線散射而發(fā)出亮光，表現(xiàn)為黑色背景中看到發(fā)亮的菌體。暗視野顯微鏡的分辨率是普通顯微鏡的50倍，可觀察到大于0.004 μm的微粒的存在和運(yùn)動(dòng)[2]。在病原生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課上主要用于觀察具有運(yùn)動(dòng)能力的、活的、未經(jīng)染色的細(xì)菌和螺旋體等。

2.4 風(fēng)險(xiǎn)得分影響患者的微衛(wèi)星不穩(wěn)定性和免疫微環(huán)境

單因素Cox回歸分析中，風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分和95%的危險(xiǎn)比（HR）分別為1.336和1.246～1.433（＜0.001，圖2A），多因素Cox回歸分析的風(fēng)險(xiǎn)評(píng)分和95%的危險(xiǎn)比（HR）分別為1.302和1.198～1.414（＜0.001，圖2B）。結(jié)腸癌患者1年、3年和5年的ROC值分別為0.727,0.747和0.794（圖2C）。C-index曲線表明，相較于常見的臨床指標(biāo)，如TNM分期，風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)結(jié)腸癌患者預(yù)后的預(yù)測具有更高的敏感性和準(zhǔn)確性（圖2D）。接著本研究構(gòu)建了一個(gè)預(yù)測患者預(yù)后的列線圖（圖2E），列線圖ROC曲線的AUC值為0.794（圖2F），校準(zhǔn)曲線顯示諾莫圖對(duì)患者1、3及5年生存時(shí)間的預(yù)測幾乎與實(shí)際生存時(shí)間一致（圖2G）。

2.5 模型lncRNAs調(diào)控多種致癌分子的表達(dá)

本研究首先使用Cytoscape的cytoHubba插件篩選模型lncRNAs調(diào)節(jié)的核心分子（圖5A）。TCGA數(shù)據(jù)庫表明這些核心分子多數(shù)在結(jié)腸癌癌旁和癌組織中存在差異表達(dá)（圖5B）。Western blot實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，與癌旁正常組織相比，ATXN2（=0.006）和G3BP1（=0.007）在結(jié)腸癌組織中的表達(dá)量增高（圖5C～E）。

3 討論

本研究發(fā)現(xiàn)多數(shù)的lncRNAs與mG基因存在共表達(dá)的關(guān)系。隨后，使用與mG 具有共表達(dá)關(guān)系的lncRNAs 構(gòu)建了用于預(yù)測結(jié)腸癌患者預(yù)后的風(fēng)險(xiǎn)模型。模 型lncRNAs 中AC003101.2、AP001619.1 和AC008760.1被報(bào)道與結(jié)腸癌的預(yù)后相關(guān)。此外，ZEB1-AS1也參與乳腺癌、肝癌、胰腺癌及結(jié)直腸癌等多種腫瘤的惡性進(jìn)展和耐藥。我們使用多種方法進(jìn)行進(jìn)一步探究風(fēng)險(xiǎn)模型對(duì)結(jié)腸癌患者預(yù)后的預(yù)測作用。K-M曲線顯示高風(fēng)險(xiǎn)組患者的五年生存率明顯高于低風(fēng)險(xiǎn)患者，ROC曲線、C-index曲線、諾莫圖及諾莫圖的校準(zhǔn)曲線和ROC曲線進(jìn)一步驗(yàn)證了模型的準(zhǔn)確性。風(fēng)險(xiǎn)模型還與結(jié)腸癌患者的分期分級(jí)相關(guān)，且對(duì)不同臨床亞組結(jié)腸癌患者的預(yù)后也具有較好的預(yù)測作用。

免疫治療在結(jié)腸癌的治療中大放異彩，本研究探究了高低風(fēng)險(xiǎn)兩組患者免疫細(xì)胞浸潤以及腫瘤微環(huán)境打分的差異。我們發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn)組患者的基質(zhì)細(xì)胞打分和總打分均高于高風(fēng)險(xiǎn)患者，這說明高風(fēng)險(xiǎn)患者的腫瘤純度較低。低腫瘤純度與腫瘤的惡性進(jìn)展，治療耐藥性和預(yù)后評(píng)估密切相關(guān)。這反映了高低風(fēng)險(xiǎn)組患者預(yù)后的差異的內(nèi)在原因可能是兩者腫瘤微環(huán)境的不同。微衛(wèi)星是分布人類基因組中包含1～4個(gè)堿基對(duì)的短串聯(lián)重復(fù)DNA序列，微衛(wèi)星不穩(wěn)定被認(rèn)為是結(jié)直腸癌的主要致癌途徑之一，與MSS/MSI-L腫瘤的結(jié)腸癌患者相比，MSI-H的結(jié)腸癌患者顯著受益于免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療。本研究發(fā)現(xiàn)低風(fēng)險(xiǎn)組患者的微衛(wèi)星不穩(wěn)定狀態(tài)更高，同時(shí)低風(fēng)險(xiǎn)組患者多種免疫檢查點(diǎn)的表達(dá)量更低，以上結(jié)果表明低危組患者可能比高風(fēng)險(xiǎn)組患者更得益于免疫檢查點(diǎn)抑制劑治療。

為探究模型lncRNAs參與調(diào)節(jié)的功能，我們使用共表達(dá)分析以及蛋白蛋白互作網(wǎng)絡(luò)篩選出模型lncRNAs 調(diào)節(jié)的核心基因。磷酸酶和張力素同源物（PTEN）是一種腫瘤抑制因子，研究報(bào)道其丟失可促進(jìn)結(jié)腸癌的惡性進(jìn)展。靶向結(jié)腸癌中的PTEN是一種重要的結(jié)腸癌治療策略。SOS1也是結(jié)腸癌治療中的重要靶點(diǎn)，研究表明SOS1和MEK的聯(lián)合抑制可能對(duì)KRAS 驅(qū)動(dòng)的惡性腫瘤有一定的治療效果。由于ATXN2 和G3BP1 在結(jié)腸癌中尚無報(bào)道，因此我們對(duì)ATXN2和G3BP1進(jìn)行了臨床樣本的驗(yàn)證，結(jié)果表明此兩者在結(jié)腸癌中表達(dá)增高，可能與結(jié)腸癌的惡性發(fā)展有關(guān)。模型的lncRNAs參與多種與結(jié)腸癌密切相關(guān)的分子的調(diào)控，這進(jìn)一步證實(shí)了本研究構(gòu)建的風(fēng)險(xiǎn)模型在結(jié)直腸癌的應(yīng)用中可能會(huì)發(fā)揮重要作用。

由圖6 b)可知，通過數(shù)值計(jì)算模擬、Peck公式計(jì)算與實(shí)地監(jiān)測得到的地表沉降曲線變化趨勢基本一致，均呈 W形分布。其中左線隧洞上方的地表沉降值略大于右線位置，因?yàn)樽缶€開挖時(shí)，土體應(yīng)力再次發(fā)生變化，地基進(jìn)一步發(fā)生沉降，且由于右線通過壁后注漿等支護(hù)措施，已基本彌補(bǔ)地層損失，故右線位置二次沉降值略小。同時(shí)隨著盾構(gòu)機(jī)向前推進(jìn)，各測點(diǎn)的沉降值均逐漸增大。

雖然本研究獲得了一定喜人的結(jié)果，但本研究也存在一定的不足之處。首先，由于本研究的分析是基于公共數(shù)據(jù)庫的挖掘，因此使用的所有樣本都是回顧性數(shù)據(jù)，故存在一定數(shù)據(jù)選擇的主觀性。此外，需要有更進(jìn)一步的體內(nèi)體外實(shí)驗(yàn)來探究模型lncRNAs與PTEN及SOS1等分子之間的關(guān)系。