張雅惠，伍小英，何剛（廣州市胸科醫(yī)院二分所，廣東 廣州 510000）

肺結(jié)核屬于臨床發(fā)病率較高的傳染病，患者主要由結(jié)核分枝桿菌引起，能侵及諸多臟器，臨床多表現(xiàn)為低熱、乏力及消瘦等［1］。由于肺結(jié)核患者發(fā)病早期臨床癥狀缺乏典型性，多數(shù)患者在因胸痛、咳嗽或體檢時(shí)發(fā)現(xiàn)，增加臨床診療難度。痰涂片檢查或血培養(yǎng)是肺結(jié)核診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”，能確定患者是否感染結(jié)核桿菌，亦可指導(dǎo)患者臨床治療。但是，檢查周期較長(zhǎng)且難以動(dòng)態(tài)了解患者病情［2］。T 細(xì)胞斑點(diǎn)試驗(yàn)（T-SPOT.TB）是肺結(jié)核患者中常用的輔助診斷方法，借助試劑盒完成特異性T細(xì)胞測(cè)定，能完成潛伏期或疑似肺結(jié)核患者進(jìn)行篩查［3］；而結(jié)核分枝桿菌抗體（TB-Ab）則測(cè)定血液中IgG抗體，實(shí)現(xiàn)疾病的篩查。但是，該檢測(cè)方法存在明顯的局限性，臨床診斷假陽性率較高［4］。國(guó)外學(xué)者研究表明：將T-SPOT.TB、TB-Ab兩種診斷方法聯(lián)合用于肺結(jié)核患者中，能發(fā)揮不同診斷方法優(yōu)勢(shì)，可提高臨床確診率，但是該結(jié)論并未得到證實(shí)。因此，本研究以疑似肺結(jié)核患者為對(duì)象，探討T-SPOT.TB 及TB-Ab 在肺結(jié)核患者中的應(yīng)用效果。報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2019年2月至2021年2月疑似肺結(jié)核患者200例，其中男125例、女75例；年齡15～85（60.59±4.61）歲；臨床表現(xiàn)：低熱、盜汗1例、發(fā)熱2例，發(fā)熱、咳嗽5例，發(fā)熱、咳嗽、胸悶1例，咯血2例，咳嗽56例，咳嗽、低熱、盜汗1例，咳嗽、咳痰20例，咳嗽、咳痰、發(fā)熱1例，咳嗽、咳血痰4例，咳嗽、氣促1例，咳嗽、胸悶1例，咳嗽、胸痛4例，咳血痰6例，體檢發(fā)現(xiàn)、無癥狀81例，胸悶2例，胸痛12例。本研究經(jīng)我院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)審核批準(zhǔn)，患者及家屬簽署同意書。

1.2 納入與排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：（1）參考肺結(jié)核、肺部疾病診斷相關(guān)標(biāo)準(zhǔn)，并以“痰涂片及病原菌培養(yǎng)”作為“金標(biāo)準(zhǔn)”；（2）均完成T-SPOT.TB 及TB-Ab檢查，且患者均可耐受（3）具有較為完整的檢查資料和隨訪資料。排除標(biāo)準(zhǔn)：（1）精神異常、伴有自身免疫系統(tǒng)疾病者；（2）認(rèn)知功能異常、血液系統(tǒng)疾病或伴有先天性畸形者［5］。

1.3 方法 所有患者入院后均完成T-SPOT.TB 及TB-Ab檢查，具體方法如下：

1.3.1 T-SPOT.TB 檢查 （1）檢測(cè)方法。所有患者入院后次日空腹?fàn)顟B(tài)下，經(jīng)肘靜脈取外周空腹血8 ml，將其放置在含有肝素的抗凝管中，充分混合均勻（溫度控制在18℃～25℃）后4 h 內(nèi)完成檢測(cè)，所有操作均嚴(yán)格遵循操作說明書完成。檢測(cè)時(shí)分離單個(gè)核細(xì)胞（PBMCs），洗滌后計(jì)數(shù)，根據(jù)工作需要完成細(xì)胞懸液的制備，并與抗原混合，加入微孔培養(yǎng)板中。同時(shí)，患者監(jiān)測(cè)時(shí)常規(guī)選擇TB特異性ESAT-6（抗原A）和CFP-10（抗原B）肽段進(jìn)一步刺激，并常規(guī)孵化后PBS 沖洗，加入酶標(biāo)抗體，洗滌后置入反應(yīng)液；上述操作完畢后，借助ELISPOT 讀板儀完成斑點(diǎn)數(shù)閱讀和統(tǒng)計(jì)。（2）判斷標(biāo)準(zhǔn)。對(duì)于A 孔與B 孔中任意孔檢測(cè)出一下情況即可診斷為陽性：對(duì)照孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)草果6，抗原A/B 孔≥2×（空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）；對(duì)照組孔內(nèi)斑點(diǎn)數(shù)＜6 時(shí)，且（抗原A 或B 孔斑點(diǎn)數(shù)）-（空白對(duì)照孔斑點(diǎn)數(shù)）≥6，反之則為陰性［6］。

1.3.2 TB-Ab 檢查 （1）檢測(cè)方法。借助膠體金免疫層析技術(shù)完成血液標(biāo)本中結(jié)核分支桿菌抗體IgG，具體方法如下。向試劑盒、儀器中加入標(biāo)本及稀釋液，觀察標(biāo)本顯色情況。（2）判定標(biāo)本。對(duì)于反應(yīng)孔中空間紅色質(zhì)控線、紅線檢測(cè)線的為陽性說明標(biāo)本中檢出結(jié)核分支桿菌抗體IgG；反應(yīng)孔中僅出現(xiàn)紅色質(zhì)控線為陰性，對(duì)于反應(yīng)孔中未顯示紅色質(zhì)控線，結(jié)果無效［7］。

本研究中以“痰涂片及病原菌培養(yǎng)”作為“金標(biāo)準(zhǔn)”，并將T-SPOT.TB及TB-Ab檢查結(jié)果與金標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較（計(jì)算方法如下：靈敏度=真陽人數(shù)/（真陽人數(shù)+假陰人數(shù)）；特異度=真陰/（真陰人數(shù)+假陽人數(shù)）；陽性預(yù)測(cè)值=真陽人數(shù)/（真陽人數(shù)+真陰人數(shù)）；陰性預(yù)測(cè)值=假陽人數(shù)/（假陽人數(shù)+假陰人數(shù)））。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 24.0 統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行處理。計(jì)數(shù)資料采用例（百分率）表示，行χ2檢驗(yàn)。P＜0.05示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 T-SPOT.TB 在肺結(jié)核患者中的診斷價(jià)值分析疑似200例肺結(jié)核患者經(jīng)“痰涂片及病原菌培養(yǎng)”檢查確診57例，確診率為28.50%。T-SPOT.TB檢查確診51例，與金標(biāo)準(zhǔn)診斷符合率為89.47%。T-SPOT.TB檢查用于肺結(jié)核患者中診斷靈敏度為73.68%（42/57），特異度為93.71%（134/143）；陽性預(yù)測(cè)值為82.35%（42/51）、陰性預(yù)測(cè)值為89.93%（134/149）。見表1。

表1 T-SPOT.TB在肺結(jié)核患者中的診斷價(jià)值分析

2.2 TB-Ab 檢查在肺結(jié)核患者中的診斷價(jià)值分析TB-Ab 檢查用于肺結(jié)核患者中最終確診45例，與金標(biāo)準(zhǔn)診斷符合率為78.95%。TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中靈敏度為59.65%（34/57），特異度為92.31%（132/143），陽性預(yù)測(cè)值為75.56%（34/45）、陰性預(yù)測(cè)值為85.16%（132/155）。見表2。

表2 T-SPOT.TB在肺結(jié)核患者中的診斷價(jià)值分析

2.3 T-SPOT.TB 聯(lián)合TB-Ab 檢查在肺結(jié)核患者中的診斷價(jià)值分析 T-SPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中確診55例，與金標(biāo)準(zhǔn)診斷符合率為96.49%（P＞0.05）；T-SPOT.TB 聯(lián)合TB-Ab 檢查診斷靈敏度為85.96%（49/57），診斷特異度為95.80%（137/143）；陽性預(yù)測(cè)值為89.09%（49/55）、陰性預(yù)測(cè)值為94.48%（137/145）。見表3。

表3 T-SPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查在肺結(jié)核患者中的診斷價(jià)值分析

2.4 不同診斷方法在肺結(jié)核患者中的診斷效能比較 根據(jù)公式完成不同診斷方法靈敏度與特異度，結(jié)果表明：T-SPOT.TB、TB-Ab 檢查及二者聯(lián)合檢查診斷特異度比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；TSPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中診斷靈敏度、陽性預(yù)測(cè)值與陰性預(yù)測(cè)值均高于T-SPOT.TB、TB-Ab檢查，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表4。

表4 不同診斷方法在肺結(jié)核患者中的診斷效能

3 討論

肺結(jié)核是由于結(jié)核分枝桿菌感染引起，由于發(fā)病初期癥狀不明顯，導(dǎo)致臨床診斷、鑒別難度較大［8］。痰涂片及病原菌培養(yǎng)是肺結(jié)核患者診斷“金標(biāo)準(zhǔn)”，借助上述檢查能了解并判斷患者是否感染結(jié)核桿菌。本研究中，疑似200例肺結(jié)核患者經(jīng)“痰涂片及病原菌培養(yǎng)”檢查確診57例，確診率為28.50%，從本研究結(jié)果看出，痰涂片及病原菌培養(yǎng)能提高肺結(jié)核確診率，可指導(dǎo)臨床診療。但是，痰涂片及病原菌培養(yǎng)臨床使用時(shí)亦存在諸多局限性，該檢查方法出結(jié)果時(shí)間檢查，可重復(fù)性較差，難以動(dòng)態(tài)了解患者病情變化情況。

近年來，T-SPOT.TB 及TB-Ab 檢查在肺結(jié)核患者中得到應(yīng)用，且效果理想。本研究中，T-SPOT.TB檢查確診51例，診斷靈敏度為73.68%，特異度為93.71%，說明疑似肺結(jié)核患者臨床診斷確診率較高，且T-SPOT.TB檢查診斷符合率較高。T-SPOT.TB是肺結(jié)核患者中常用的篩查方法，通過測(cè)定機(jī)體T 細(xì)胞水平，能反映患者的免疫應(yīng)答狀態(tài)，并分泌γ-干擾素［9］。因此，T-SPOT.TB試驗(yàn)通過酶聯(lián)免疫斑點(diǎn)計(jì)數(shù)能判斷機(jī)體是否存在γ-干擾素效應(yīng)的T 淋巴細(xì)胞，且與傳統(tǒng)皮膚結(jié)核菌素試驗(yàn)相比，具有特異性好，不受卡介苗接種與環(huán)境分支桿菌的影響，具有檢出率、靈敏度高及快速的特點(diǎn)。而TB-Ab檢查屬于體液免疫檢查技術(shù)，患者受結(jié)核桿菌感染后，能產(chǎn)生一組免疫球蛋白。通過TB-Ab檢查則能通過免疫應(yīng)答機(jī)制檢測(cè)機(jī)體抗結(jié)核免疫反應(yīng)，判斷患者是否感染結(jié)合桿菌，可指導(dǎo)臨床早期診斷及治療［10］。本研究中，TB-Ab 檢查用于肺結(jié)核患者中最終確診45例，靈敏度為59.65%，特異度為92.31%。為了進(jìn)一步分析TSPOT.TB 及TB-Ab 檢查在肺結(jié)核患者中的診斷價(jià)值，本研究中對(duì)二者聯(lián)合檢查進(jìn)行分析，結(jié)果表明：T-SPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中確診55例，斷靈敏度為85.96%，診斷特異度為95.80%；TSPOT.TB聯(lián)合TB-Ab檢查用于肺結(jié)核患者中診斷靈敏度、陽性預(yù)測(cè)值與陰性預(yù)測(cè)值均高于T-SPOT.TB、TB-Ab 檢查（P＜0.05），由此看出，T-SPOT.TB 及TBAb 聯(lián)合檢查用于肺結(jié)核患者中靈敏度、特異度更高。因此，臨床上對(duì)于疑似肺結(jié)核患者，應(yīng)加強(qiáng)患者T-SPOT.TB及TB-Ab檢查，必要時(shí)二者聯(lián)合檢查，發(fā)揮不同檢查方法優(yōu)勢(shì)，幫助患者早期確診；對(duì)于確診的肺結(jié)核患者，則應(yīng)及時(shí)采取相應(yīng)的措施治療干預(yù)，并定期復(fù)查T-SPOT.TB 及TB-Ab，為臨床診療提供參考依據(jù)。

綜上所述，T-SPOT.TB 及TB-Ab 檢查用于肺結(jié)核患者中能獲得較高的檢出率，且兩種方法聯(lián)合測(cè)定能獲得較高的診斷效能，可指導(dǎo)臨床診療。