張 瑞，周維強(qiáng)，馬 越，吳建平，雷趙民

（1.甘肅農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物科學(xué)技術(shù)學(xué)院，蘭州 730070；2.西北師范大學(xué)新農(nóng)村發(fā)展研究院，蘭州 730070）

機(jī)會(huì)豬是指出生時(shí)體重<1.20 kg的乳豬，一般占出生仔豬數(shù)的20%～30%，如果對(duì)這類仔豬不給予特殊的免疫增強(qiáng)、能量補(bǔ)給及飼養(yǎng)管理，其死亡率可達(dá)80%以上[1-2]。中國(guó)是生豬生產(chǎn)大國(guó)，飼養(yǎng)量和豬肉消費(fèi)量均占世界總量的50%以上。但根據(jù)中國(guó)目前的飼養(yǎng)標(biāo)準(zhǔn)，一般養(yǎng)殖戶的仔豬成活率在70%左右，因此要想獲得更高的經(jīng)濟(jì)效益，就要在提高機(jī)會(huì)豬成活率上尋找利潤(rùn)。

機(jī)會(huì)豬因體質(zhì)較弱、器官發(fā)育不完全等先天因素，攝入的初乳及常乳量都較少，在后期生長(zhǎng)過(guò)程中會(huì)影響自身免疫系統(tǒng)的發(fā)育；但這種缺陷可通過(guò)早期營(yíng)養(yǎng)管理促進(jìn)生長(zhǎng)獲得代償[3]。研究發(fā)現(xiàn)，胃腸道微生態(tài)環(huán)境的建立與仔豬后期健康密切相關(guān)。牛至精油因含較高的百里香酚和香芹芥酚而具有抗菌、抗氧化、促生長(zhǎng)和緩解應(yīng)激的作用。研究發(fā)現(xiàn)，牛至精油可通過(guò)增加動(dòng)物胃腸道有益菌（雙歧桿菌和乳酸等）的數(shù)量，抑制有害菌（大腸桿菌和金黃色葡萄球菌等）的繁殖促進(jìn)飼料的消化吸收，進(jìn)而提高動(dòng)物的生長(zhǎng)[4-6]。近年來(lái)，牛至精油在豬生產(chǎn)中被廣泛應(yīng)用。在繁育母豬飼糧中添加牛至精油可促進(jìn)其生長(zhǎng)，增加后代初生重和斷奶仔豬數(shù)[7]；在育肥豬飼糧中添加牛至精油可顯著提高肌肉的抗氧化能力[8]；在斷奶仔豬飼糧中添加牛至精油可降低斷奶應(yīng)激和腹瀉率[9]。然而有大量研究指出，雖然精油具有廣譜的抑菌和抗氧化活性，但在實(shí)際應(yīng)用中，精油的最低抑菌濃度與最佳飼喂量和飼喂成本間很難達(dá)到統(tǒng)一，因此建議將精油與其他成分相結(jié)合來(lái)提高飼喂效率[10]。初乳富含多種抗菌肽和免疫調(diào)節(jié)、生長(zhǎng)因子，可為機(jī)體提供必要的營(yíng)養(yǎng)成分，平衡腸道菌群，加強(qiáng)自然防御系統(tǒng)，促進(jìn)生長(zhǎng)[11-12]。多項(xiàng)研究表明，初乳有益于哺乳動(dòng)物健康：牛初乳可以促進(jìn)早產(chǎn)仔豬腸道結(jié)構(gòu)的完整性及對(duì)壞死性結(jié)腸炎的抵抗[13]；可以通過(guò)增加仔豬胃腸道中乳酸菌的數(shù)量調(diào)節(jié)腸道內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)[14]；可以通過(guò)增加食糜在仔豬腸道的停留時(shí)間來(lái)促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)吸收，促進(jìn)生長(zhǎng)[15]。

目前，牛至精油作為單一飼料添加劑的研究甚多，且很多學(xué)者將研究重點(diǎn)放在如何減小仔豬的斷奶應(yīng)激及促生長(zhǎng)方面，而對(duì)機(jī)會(huì)豬的關(guān)注較少。鑒于此，本試驗(yàn)給出生后的機(jī)會(huì)豬灌服不同劑量的牛至精油和初乳復(fù)合物，探討其對(duì)機(jī)會(huì)豬生長(zhǎng)性能、血清生化指標(biāo)、抗氧化及免疫指標(biāo)的影響，以期為機(jī)會(huì)豬的健康發(fā)展提供參考和試驗(yàn)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

試驗(yàn)所用牛至精油和初乳復(fù)合物由美國(guó)瑞科營(yíng)養(yǎng)公司提供，主要成分為牛至精油及牛初乳提取物。該產(chǎn)品為棕黃色液體，主要營(yíng)養(yǎng)成分含量為：粗蛋白質(zhì)2%，粗脂肪9%，粗纖維5%。

1.2 試驗(yàn)設(shè)計(jì)與動(dòng)物管理

試驗(yàn)在甘肅省定西市西泰養(yǎng)殖有限公司進(jìn)行，選擇128頭體況相近、胎次相近（2/3胎）且產(chǎn)仔數(shù)接近的大長(zhǎng)二元雜交母豬，采用杜洛克公豬精液進(jìn)行人工授精，確保配種成功后隨機(jī)分為4組，每組32頭母豬，所有母豬飼喂和管理水平相同，飼糧配方參照NRC（2012）妊娠和哺乳母豬營(yíng)養(yǎng)需要進(jìn)行配制。將初生體重<1.20 kg的仔豬定義為機(jī)會(huì)豬，對(duì)每組母豬所產(chǎn)仔豬中的機(jī)會(huì)豬根據(jù)試驗(yàn)設(shè)計(jì)做不同處理。EC2組：共104頭機(jī)會(huì)豬，出生后灌服2 mL EC，共灌服1次；EC4組：共119頭機(jī)會(huì)豬，出生后灌服2 mL EC，24 h后再灌服1次，連續(xù)灌服2 d；EC6組：共119頭機(jī)會(huì)豬，出生后灌服2 mL EC，每隔24 h灌服1次，連續(xù)灌服3 d；對(duì)照組（CON）：共125頭機(jī)會(huì)豬，出生后不灌服EC。試驗(yàn)期從出生到斷奶共21 d。灌服EC時(shí)，選擇2 mL按壓式定量出液泵，將泵頭放入機(jī)會(huì)豬口腔深處，每次灌服按壓1次。每窩仔豬中，除機(jī)會(huì)豬灌服EC處理外，其他管理均與正常仔豬相同，自由哺乳，自由飲水。

分娩母豬在預(yù)產(chǎn)期前第3天洗澡消毒后趕入產(chǎn)房等待生產(chǎn)，在此期間適當(dāng)減料，提供充足飲水。生產(chǎn)后清理干凈仔豬身上黏液，稱重后打上耳標(biāo)并記錄，協(xié)助所有仔豬吃母豬初乳，將機(jī)會(huì)豬固定于母豬的前側(cè)乳區(qū)，并不斷固定這種哺乳順序，確保機(jī)會(huì)豬補(bǔ)充足夠的母乳。

1.3 測(cè)定指標(biāo)及方法

1.3.1 生長(zhǎng)性能 分娩后對(duì)所有仔豬稱重，確定機(jī)會(huì)豬數(shù)量并計(jì)算其平均初生重，隨后對(duì)機(jī)會(huì)豬按照試驗(yàn)設(shè)計(jì)做不同處理。試驗(yàn)結(jié)束后記錄機(jī)會(huì)豬體重，用于計(jì)算斷奶重。

試驗(yàn)期間，每天08:00觀察機(jī)會(huì)豬排便情況，記錄腹瀉頭數(shù)，進(jìn)行腹瀉評(píng)分，計(jì)算腹瀉率、腹瀉頻率及腹瀉指數(shù)，仔豬腹瀉評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)見(jiàn)表1[16]；隨時(shí)觀察機(jī)會(huì)豬的健康、治療和死亡情況。腹瀉率、腹瀉頻率和腹瀉指數(shù)計(jì)算方法如下：

表1 仔豬腹瀉評(píng)分標(biāo)準(zhǔn)Table 1 Scoring criteria for piglet diarrhea

腹瀉率（%）=腹瀉頭數(shù)/試驗(yàn)豬總頭數(shù)×100%

腹瀉頻率（%）=Σ（腹瀉仔豬頭數(shù)×腹瀉天數(shù)）/（試驗(yàn)豬總頭數(shù)×試驗(yàn)天數(shù)）×100%

腹瀉指數(shù)=腹瀉評(píng)分之和/試驗(yàn)豬總頭數(shù)

1.3.2 血清生化、抗氧化及免疫指標(biāo) 試驗(yàn)結(jié)束當(dāng)天早晨,每窩選擇1頭接近平均體重的斷奶機(jī)會(huì)豬，前腔靜脈采血5 mL，室溫靜置1 h后，以3 000 r/min離心10 min，分離血清，-20 ℃保存待測(cè)以下指標(biāo)。

血清生化指標(biāo)：總蛋白（TP）采用雙縮脲法測(cè)定；白蛋白（ALB）采用溴甲酚綠法測(cè)定；球蛋白（GLB）和白球比（A/G）采用換算法；尿素氮（BUN）采用兩點(diǎn)動(dòng)力法測(cè)定；谷丙轉(zhuǎn)氨酶（ALT）和谷草轉(zhuǎn)氨酶（AST）活性采用連續(xù)監(jiān)測(cè)法測(cè)定。

血清抗氧化指標(biāo)：超氧化物歧化酶（SOD）活性采用黃嘌呤氧化酶法測(cè)定；谷胱甘肽過(guò)氧化酶（GSH-Px）活性采用二硫代二硝基苯甲酸法測(cè)定。

血清免疫指標(biāo)：免疫球蛋白A（IgA）、免疫球蛋白G（IgG）、免疫球蛋白M（IgM）均采用酶聯(lián)免疫吸附法測(cè)定；結(jié)合珠蛋白（Hp）采用免疫比濁法測(cè)定。

以上各指標(biāo)測(cè)定所用試劑盒均購(gòu)自南京建成生物工程研究所，測(cè)定方法按照試劑盒說(shuō)明進(jìn)行操作。

1.4 數(shù)據(jù)處理及分析

采用SPSS 21.0軟件單因素方差分析（One-Way ANOVA）不同處理對(duì)仔豬各項(xiàng)指標(biāo)的影響，差異顯著時(shí)采用Duncan氏法進(jìn)行多重比較，結(jié)果以平均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，P<0.05表示差異顯著。

2 結(jié) 果

2.1 EC處理對(duì)機(jī)會(huì)豬生長(zhǎng)性能的影響

由表2可知，各組母豬所產(chǎn)機(jī)會(huì)豬的平均窩產(chǎn)仔頭數(shù)和平均初生重均無(wú)顯著差異（P>0.05）。而灌服牛至精油后，EC2、EC4及EC6組平均斷奶重和平均日增重均顯著高于對(duì)照組（P<0.05），且分別提高了7.16%和9.69%、9.76%和12.56%、11.06%和14.29%。機(jī)會(huì)豬平均斷奶重和平均日增重在3個(gè)試驗(yàn)組之間無(wú)顯著差異（P>0.05）。

表2 各組機(jī)會(huì)豬生長(zhǎng)性能Table 2 Growth performance of opportunity piglets in different groups

2.2 EC處理對(duì)機(jī)會(huì)豬腹瀉和死亡率的影響

由表3可知，與對(duì)照組相比，EC2、EC4及EC6組各腹瀉指標(biāo)和EC4、EC6組死亡率均顯著低于對(duì)照組（P<0.05）。其中，EC4組腹瀉率比對(duì)照組降低68.25%，且EC4組腹瀉率和腹瀉頻率顯著低于EC2組（P<0.05）；EC4和EC6組的腹瀉指數(shù)和死亡率均顯著低于EC2組（P<0.05）。

表3 各組機(jī)會(huì)豬腹瀉指標(biāo)和死亡率Table 3 Diarrhea indexes and mortality of opportunity piglets in different groups

2.3 EC處理對(duì)機(jī)會(huì)豬血清生化指標(biāo)的影響

由表4可知，初生機(jī)會(huì)豬連續(xù)灌服3 d EC，血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性均顯著低于對(duì)照組（P<0.05），而EC2、EC4組與對(duì)照組間無(wú)顯著差異（P>0.05）；EC6組白蛋白含量顯著高于對(duì)照組，球蛋白含量顯著高于CON和EC2組（P<0.05）；EC6組總蛋白水平顯著高于對(duì)照組（P<0.05），并與EC2和EC4組間無(wú)顯著差異（P>0.05）。此外，尿素氮和白球比在各組間均無(wú)顯著差異（P>0.05）。

表4 各組機(jī)會(huì)豬血清生化指標(biāo)測(cè)定結(jié)果Table 4 Determination results of serum biochemical indicators of opportunity piglets in different groups

2.4 EC處理對(duì)機(jī)會(huì)豬血清抗氧化性能的影響

由表5可知，EC4和EC6組超氧化物歧化酶活性顯著高于CON和EC2組（P<0.05），且比對(duì)照組分別提高了31.31%和45.54%；同時(shí)，EC6組谷胱甘肽過(guò)氧化物酶活性顯著高于CON和EC2組，EC4組顯著高于對(duì)照組（P<0.05），EC4和EC6組較對(duì)照組分別提高了15.90%和20.46%。

表5 各組機(jī)會(huì)豬血清抗氧化酶活性Table 5 Serum antioxidant enzyme activities of opportunity piglets in different groups U/mL

2.5 EC處理對(duì)機(jī)會(huì)豬血清免疫性能的影響

由表6可知，E6組機(jī)會(huì)豬血清IgM和IgG水平均顯著高于CON和EC2組（P<0.05），且較對(duì)照組分別提高了18.43%和22.88%；IgA水平顯著高于CON、EC2和EC4組（P<0.05），且分別提高了3.46%、2.44%和14.94%。灌服EC對(duì)機(jī)會(huì)豬血清Hp含量無(wú)顯著影響（P>0.05），但隨著EC灌服量的增加，Hp含量呈一定降低趨勢(shì)。

表6 各組機(jī)會(huì)豬血清免疫免疫球蛋白含量Table 6 Serum immunoglobulin contents of opportunity piglets in different groups μg/mL

3 討 論

要想保證仔豬斷奶后的成活率及維持后期的生長(zhǎng)發(fā)育，就必須確保斷奶前的仔豬體格健壯、消化功能和免疫系統(tǒng)正常、快速發(fā)育。因此需要盡早對(duì)機(jī)會(huì)豬進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)干預(yù)，幫助其建立免疫消化系統(tǒng)，加強(qiáng)生長(zhǎng)發(fā)育追趕能力。有研究報(bào)道，精油作為綠色安全型的天然飼料添加劑，因其自身獨(dú)特的芳香和揮發(fā)性氣味，通過(guò)刺激動(dòng)物消化道，增加采食量；同時(shí)可增加動(dòng)物腸道絨毛長(zhǎng)度，擴(kuò)大與營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的接觸面積進(jìn)而促進(jìn)消化吸收[17]。初乳中富含胰島素樣生長(zhǎng)因子、表皮細(xì)胞生長(zhǎng)因子，這些因子與腸道組織形態(tài)、上皮細(xì)胞分化等顯著相關(guān)，對(duì)幼齡仔豬的生長(zhǎng)發(fā)育起重要作用[11]。此外，仔豬出生后第1天腸道黏膜細(xì)胞增加50%，第3天可增加1倍，在這一階段進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)干預(yù)顯得尤為重要[18]。因此，本研究選擇在機(jī)會(huì)豬出生后3 d內(nèi)進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)干預(yù)，盡可能幫助其建立消化免疫系統(tǒng)，結(jié)果表明，出生后3 d 內(nèi)灌服EC可增加機(jī)會(huì)豬的斷奶重和平均日增重。

腹瀉是造成仔豬生長(zhǎng)緩慢和高死亡率的主要原因，給養(yǎng)豬生產(chǎn)造成了嚴(yán)重?fù)p失。一般情況下，突然補(bǔ)飼、環(huán)境改變、腸道菌群失衡以及先天免疫系統(tǒng)發(fā)育不全容易造成仔豬腹瀉，而機(jī)會(huì)豬因體重小、免疫系統(tǒng)不健全等因素更容易受到腹瀉威脅。研究表明，牛至精油對(duì)新生犢牛具有良好的抗腹瀉作用[6]，這是因?yàn)榕Ｖ辆涂梢栽黾幽c道有益菌的數(shù)量，維持腸道菌群環(huán)境穩(wěn)定，進(jìn)而促進(jìn)機(jī)體對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收、抵抗致病微生物的入侵、刺激免疫系統(tǒng)成熟、降低腹瀉的發(fā)生[19]；此外，牛至精油還可以提高腸道中精胺的濃度，發(fā)揮調(diào)控腸道吸收和消化功能的作用[20]。本研究中，用腹瀉率表示試驗(yàn)期間發(fā)生腹瀉的機(jī)會(huì)豬頭數(shù)，用腹瀉頻率表示腹瀉發(fā)生的時(shí)間長(zhǎng)短，用腹瀉指數(shù)表示腹瀉的嚴(yán)重程度，結(jié)果表明，灌服EC顯著降低了初生機(jī)會(huì)豬的各項(xiàng)腹瀉指標(biāo)和死亡率，且連續(xù)灌服2 d的抗腹瀉效果優(yōu)于灌服1和3 d的。

血清生化指標(biāo)反映機(jī)體的營(yíng)養(yǎng)健康水平和生長(zhǎng)發(fā)育狀態(tài)，是檢測(cè)機(jī)體健康水平和環(huán)境適應(yīng)能力的重要手段。谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶是肝細(xì)胞內(nèi)酶，在氨基酸合成與分解代謝中發(fā)揮著重要作用，也是判斷肝臟受損程度最基本的指標(biāo)[21]。血清總蛋白可分為白蛋白和球蛋白兩類，主要功能是維持血液滲透壓、運(yùn)輸營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，可反映機(jī)體健康及免疫水平[22]。尿素氮主要通過(guò)鳥氨酸循環(huán)合成，是蛋白質(zhì)、氨基酸代謝的終產(chǎn)物，可以準(zhǔn)確反映動(dòng)物機(jī)體內(nèi)蛋白質(zhì)代謝和氨基酸之間的平衡狀況[23]。研究發(fā)現(xiàn)，精油有抑制肝損傷小鼠血液中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性升高的作用，具有保護(hù)肝臟的功能[21]；精油還可提高斷奶仔豬血清總蛋白水平、降低尿素氮含量[23]，這可能與其提高食欲，使采食量增加、蛋白質(zhì)攝入增加有關(guān)。此外，精油能通過(guò)刺激消化道及胃腸道消化酶活性而促進(jìn)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的消化吸收。本研究中，連續(xù)灌服3 d EC，機(jī)會(huì)豬血清中谷丙轉(zhuǎn)氨酶和谷草轉(zhuǎn)氨酶活性顯著低于對(duì)照組，而且白蛋白和球蛋白含量極顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明灌服EC促進(jìn)了機(jī)會(huì)豬對(duì)蛋白質(zhì)的利用效率。

氧化應(yīng)激是導(dǎo)致動(dòng)物組織和器官損傷的重要原因之一，組織損傷反過(guò)來(lái)又會(huì)影響其生長(zhǎng)性能及健康水平。機(jī)會(huì)豬較正常體重的仔豬而言，更易受到疾病和生存環(huán)境等方面的挑戰(zhàn)，這些應(yīng)激會(huì)增加體內(nèi)活性氧的產(chǎn)生，進(jìn)而出現(xiàn)氧化應(yīng)激反應(yīng)。精油的抗氧化作用主要體現(xiàn)在：①精油中的酚類物質(zhì)與自由基反應(yīng)生成相對(duì)穩(wěn)定的物質(zhì)；②精油中的酚類物質(zhì)可與金屬離子螯合，防止由金屬離子誘導(dǎo)的自由基產(chǎn)生；③精油中的酚類物質(zhì)可以阻斷脂質(zhì)過(guò)氧化鏈?zhǔn)椒磻?yīng)；④精油的抗氧化活性物質(zhì)通過(guò)信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)刺激抗氧化酶的分泌[24-25]。研究表明，牛至精油可以通過(guò)激活Nrf2-ARE信號(hào)通路增強(qiáng)仔豬小腸上皮細(xì)胞中SOD和GSH基因的表達(dá)，降低H2O2誘導(dǎo)的細(xì)胞損傷[26]；薰衣草精油可通過(guò)Nrf2/HO-1通路提高機(jī)體的抗氧化能力[27]。本研究中，給初生機(jī)會(huì)豬連續(xù)灌服3 d EC，其血清中SOD和GSH-Px活性顯著高于對(duì)照組，說(shuō)明連續(xù)灌服牛至精油可以提高機(jī)會(huì)豬血清中抗氧化酶水平。

機(jī)體的免疫系統(tǒng)包括免疫器官、免疫細(xì)胞和免疫分子，免疫球蛋白是免疫分子的一類，主要作用是活化補(bǔ)體，并結(jié)合細(xì)胞表面的Fc受體發(fā)揮一定的生物學(xué)作用。其中，IgG是唯一能夠通過(guò)胎盤，由母體轉(zhuǎn)移給胎兒的自然被動(dòng)免疫類型；IgM在機(jī)體發(fā)育過(guò)程中最早出現(xiàn)，最先發(fā)揮作用；IgA可以通過(guò)母體初乳傳遞給胎兒，增強(qiáng)自然被動(dòng)免疫能力[28-29]。研究發(fā)現(xiàn)，精油主要通過(guò)緩解炎癥反應(yīng)和提高抗氧化能力來(lái)增強(qiáng)動(dòng)物的免疫能力[30]；同時(shí)，初乳中富含免疫球蛋白，可以為新生兒提供充足的被動(dòng)免疫力，保護(hù)其免受感染[11]。Zeng等[31]在斷奶仔豬飼糧中添加精油發(fā)現(xiàn)，該處理可以提高仔豬血液中IgA和IgG水平。 本研究中，初生機(jī)會(huì)豬連續(xù)灌服3 d EC可提高血清中IgG、IgM、IgA含量，增強(qiáng)了自身免疫力。

4 結(jié) 論

本研究結(jié)果顯示，給初生機(jī)會(huì)豬灌服EC可顯著提高其生長(zhǎng)性能、免疫性能和抗氧化能力：出生后連續(xù)灌服2 d EC可顯著降低機(jī)會(huì)豬各腹瀉指標(biāo)和死亡率；而連續(xù)灌服3 d可提高機(jī)會(huì)豬的免疫性能和抗氧化性能。牛至精油和初乳復(fù)合物的應(yīng)用可以提高機(jī)會(huì)豬的生長(zhǎng)追趕能力，在豬生產(chǎn)中的應(yīng)用前景廣闊。