李世明　胡燕杰　張麗

摘? 要：新生牛血清屬于疫苗、診斷試劑、單抗的重要原料以及各類血液制品生產(chǎn)用的重要原輔材料，其具備細(xì)胞培養(yǎng)、疫苗制備期間所需的各類必需的天然成分。在現(xiàn)代畜牧業(yè)迅速發(fā)展的同時(shí)，不同區(qū)域間的動物流動性有所提升，這也導(dǎo)致動物的患病概率逐漸增大。在此背景下，對動物疫苗生產(chǎn)用的新生牛血清管理策略展開研究尤為重要?；诖耍狙芯繌男律Ｑ遒|(zhì)量的重要性出發(fā)，指出了在新生牛血清生產(chǎn)管理期間出現(xiàn)的問題，并科學(xué)探討了管理策略，以加強(qiáng)對新生牛血清在動物疫苗生產(chǎn)中的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：動物疫苗;新生牛血清;管理策略

中圖分類號：Q813.11+R392-33 文獻(xiàn)標(biāo)志碼：B 文章編號：1001-0769（2022）04-0080-05

近些年來，隨著各類動物疾病的發(fā)病率不斷提高，諸如禽流感、布氏桿菌病、口蹄疫、非洲豬瘟等疫病，這對動物的健康構(gòu)成了嚴(yán)重威脅，在此背景下，也使畜牧業(yè)受到不小的經(jīng)濟(jì)損失。因此，加強(qiáng)對動物重大疫病的預(yù)防和管控已經(jīng)勢在必行，制備相應(yīng)的動物血清屬于開展實(shí)驗(yàn)室診斷的基礎(chǔ)，以新生牛血清為例，其屬于動物疫苗生產(chǎn)期間細(xì)胞培養(yǎng)基中的重要成分，只有添加相應(yīng)比例的血清成分，才能夠?yàn)榧?xì)胞生長提供所需的激素及生長因子[1]?，F(xiàn)階段，市場上使用的新生牛血清產(chǎn)品較為繁多，總體上具有質(zhì)量差異大、來源廣泛、檢驗(yàn)方式落后等問題，對后續(xù)動物疫苗的生產(chǎn)帶來不利影響，這也導(dǎo)致新生牛血清的應(yīng)用效果、動物來源的安全性存在隱患。因此，探討強(qiáng)化對動物血清制備的質(zhì)量控制極為關(guān)鍵。

1? 新生牛血清質(zhì)量的重要性分析

牛血清采自新鮮的牛血液，在經(jīng)過自然層析、離心后可得到去除了血細(xì)胞、纖維蛋白的淡黃色透明的上清液。上清液的這種制作方式主要目的是提供基本營養(yǎng)物質(zhì)、激素和各種生長因子、結(jié)合蛋白、促接觸和伸展因子，使細(xì)胞貼壁免受機(jī)械損傷，對培養(yǎng)中的細(xì)胞起到某些保護(hù)作用。牛血清屬于一種淺黃色澄清、無溶血、無異物，稍黏稠的液體，含有各種血漿蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生長因子、激素、無機(jī)物等，這些物質(zhì)對促進(jìn)細(xì)胞的生長或抑制生長活性起到生理平衡作用。在進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng)時(shí)，必須確保新生牛血清的質(zhì)量，基于牛血清的相關(guān)成分，要明確其對細(xì)胞所產(chǎn)生的影響。其中，結(jié)合動物血清的應(yīng)用狀況，以新生牛血清較為常見，它可以在組織培養(yǎng)、細(xì)胞培養(yǎng)中發(fā)揮重要作用[2]。

在醫(yī)學(xué)科學(xué)研究不斷進(jìn)步的前提下，對細(xì)胞培養(yǎng)所用的血清質(zhì)量提出了更為嚴(yán)格的要求，實(shí)踐階段更加重視相應(yīng)材料的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，遵循《中華人民共和國藥典》通則3604新生牛血清檢測要求。在對新生牛血清檢測期間，要關(guān)注pH、滲透壓、摩爾濃度、蛋白質(zhì)含量、血紅蛋白、細(xì)菌內(nèi)毒素等方面的檢查，基于《中華人民共和國獸藥典》（簡稱《中國獸藥典》）中“新生牛血清”規(guī)定，pH在7.00～8.50、滲透壓在250～330 mOsmol/kg、總蛋白含量在35～50 g/L、血紅蛋白≤200 mg/L、內(nèi)毒素≤10 EU/mL;在實(shí)施無菌檢測、支原體檢測時(shí)，需滿足陰性標(biāo)準(zhǔn);執(zhí)行病毒檢測時(shí)，不得檢出牛病毒性腹瀉病毒（bovine viral diarrhea virus，BVDV）、牛腺病毒（bovine adenovrus，BAV）、牛細(xì)小病毒（bovine parvovirus，BPV）、牛副流感病毒3型（bovine parainfluenza virus type 3，BPIV3）、牛呼腸病毒（bovine reoviruses，BReV）、牛輪狀病毒（bovine rotavirus，BRV）[3]。此外，新生牛血清能夠?yàn)榧?xì)胞增殖提供養(yǎng)分，在診斷試劑方面也有用武之地，例如，針對近些年來出現(xiàn)的非洲豬瘟病毒、新型冠狀病毒等，可以為對應(yīng)病毒的各類體外診斷試劑盒生產(chǎn)提供幫助。需要注意的是，針對國內(nèi)外牛血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，在實(shí)際應(yīng)用期間存在差異，國內(nèi)外牛血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)對比見表1。

2? 動物疫苗生產(chǎn)用的新生牛血清管理時(shí)出現(xiàn)的問題

基于“全國新生牛血清質(zhì)量管理研討會”的會議精神，相關(guān)管理部門明確了我國牛血清生產(chǎn)企業(yè)的現(xiàn)狀和未來的發(fā)展要求，并對《全國牛血清生產(chǎn)企業(yè)達(dá)標(biāo)檢查手冊》進(jìn)行修訂。調(diào)查發(fā)現(xiàn)，當(dāng)前市場上應(yīng)用到的新生牛血清來源并不固定，質(zhì)量也處于參差不齊的狀態(tài)，加上不同批次的質(zhì)量、檢測方法等存在明顯的差異，均會對動物疫苗的生產(chǎn)質(zhì)量帶來嚴(yán)重影響[4]。在較為嚴(yán)重的情況下，甚至?xí)捎诋a(chǎn)品污染、質(zhì)量不佳而導(dǎo)致實(shí)驗(yàn)不合格，會極大程度上增加生產(chǎn)成本，對動物疫苗質(zhì)量構(gòu)成威脅。因此，有效控制新生牛血清的質(zhì)量、保證應(yīng)用效果已經(jīng)成為解決動物疫苗安全問題的關(guān)鍵。

2.1 新生牛血清的來源廣泛且質(zhì)量差異大

結(jié)合應(yīng)用狀況，發(fā)現(xiàn)現(xiàn)階段使用的新生牛血清主要來自農(nóng)場或者奶牛場淘汰的公牛牛犢，受限于地域環(huán)境、采集時(shí)間、采集方法等，最終獲得的新生牛血清質(zhì)量存在較大差別[5]。即使是同一農(nóng)場，每頭牛的健康狀況也并不相同，在缺乏健康診斷及健康追溯的條件下，難以保證新生牛血清的質(zhì)量。此外，針對新生牛血清供應(yīng)、采集多應(yīng)用“初制血清”，對應(yīng)的地點(diǎn)、范圍并不固定，這在某種程度上表明國家監(jiān)管部門很難對其實(shí)施統(tǒng)一化管理，增大了血清采集規(guī)范化執(zhí)行的難度。另外，新生牛血清原料的供應(yīng)商整體上暴露出雜、亂、差的特點(diǎn)，并且缺乏嚴(yán)謹(jǐn)?shù)馁|(zhì)量控制、監(jiān)測等作為支持，加上生產(chǎn)人員技術(shù)能力不足、設(shè)備配置簡單等，均會對質(zhì)量控制造成負(fù)面干擾。

2.2 新生牛血清的生產(chǎn)質(zhì)量控制難度較大

第一，生產(chǎn)方式落后且操作不規(guī)范。整個(gè)過程較為粗放，所用設(shè)施設(shè)備較為簡單，也難以保證該區(qū)域環(huán)境的整潔度。即使在采用自動灌裝的條件下，也可能導(dǎo)致新生牛血清被微生物所污染。第二，新生牛血清的批次差異大。由于其采集源頭較為廣泛，并且獲得的血清成分明顯存在差別，不同批次甚至是相同批次的血清所具有的特征也具有誤差，其最終能夠維持或促進(jìn)細(xì)胞生長的效果存在差異。有時(shí)，生產(chǎn)廠家為了提高利潤，可能會將不同批次的血清簡單混合，這也會呈現(xiàn)出血清質(zhì)量存在明顯差異的狀況，增大了對動物疫苗生產(chǎn)質(zhì)量控制的難度。第三，有關(guān)新生牛血清質(zhì)量檢驗(yàn)項(xiàng)目并不完善。針對牛血清供應(yīng)的廠家而言，其中不乏有小型企業(yè)，這些企業(yè)沒有過硬的實(shí)力，配備的檢測設(shè)備并不完善，且很難控制新生牛血清的源頭質(zhì)量。第四，傳染源的檢測手段相對落后。由于對傳染源的檢測方式偏于落后，導(dǎo)致牛血清的供應(yīng)商很難及時(shí)診斷出血清中是否存在相關(guān)的病毒性抗體，這也對后期動物疫苗生產(chǎn)帶來隱患。第五，偶然存在的造假情況。在涉及到經(jīng)濟(jì)效益時(shí)，有些商家為了降低對應(yīng)的生產(chǎn)成本，不惜采用以次充好的手段，這也明顯降低了新生牛血清的質(zhì)量。同時(shí)，在實(shí)際使用期間，還可能存在相應(yīng)標(biāo)簽和質(zhì)量不符合的狀況。

2.3 使用新生牛血清時(shí)缺乏對供應(yīng)商進(jìn)行管理與檢測

第一，在采購新生牛血清時(shí)，部分企業(yè)更加注重從價(jià)格的低廉性出發(fā)，通常會對質(zhì)量有所忽視。涉及到對供應(yīng)商的檢測與控制時(shí)，主要停留在早期階段的物料檢驗(yàn)過程，未曾對生產(chǎn)期間的質(zhì)量加以控制。在具體實(shí)踐期間，很難及時(shí)、精確地掌握對應(yīng)廠家的血清采集過程，甚至包括源頭、生產(chǎn)質(zhì)量監(jiān)測都未曾進(jìn)行了解與監(jiān)督，對相關(guān)物料的質(zhì)量管理表現(xiàn)為被動性特點(diǎn)[6]。第二，當(dāng)前企業(yè)會按照《中華人民共和國生物制品原輔料質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)規(guī)程》來執(zhí)行，但涉及到的對應(yīng)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)屬于質(zhì)控的最低標(biāo)準(zhǔn)，如果企業(yè)直接將其視作依據(jù)，就可能會出現(xiàn)新生牛血清管理質(zhì)量不嚴(yán)格的問題，這也反映出企業(yè)可能存在缺乏完善性內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的情況。第三，部分新生牛血清的檢測周期較長，有關(guān)檢測項(xiàng)目較為復(fù)雜，導(dǎo)致成本偏高。因此，企業(yè)為了降低所需費(fèi)用，就可能會故意減少需檢測的項(xiàng)目，在此條件下，就難以滿足檢測的完善性需求，無法對關(guān)鍵環(huán)節(jié)實(shí)施嚴(yán)密把控。

3 動物疫苗生產(chǎn)用的新生牛血清管理策略

3.1 提升行業(yè)監(jiān)管力度，保證新生牛血清的生產(chǎn)、銷售及使用均滿足規(guī)范

在具體操作中，需要加強(qiáng)對新生牛血清的生產(chǎn)管理，從系統(tǒng)化、規(guī)范化建設(shè)方面出發(fā)，保證監(jiān)管控制的合理性與有效性。同時(shí)，維持好新生牛血清市場，在經(jīng)過全面檢查且滿足最終的資格條件后，才能向其發(fā)放對應(yīng)的資格認(rèn)證書。最終，生產(chǎn)新生牛血清的廠家只有獲得相應(yīng)的生產(chǎn)許可證、產(chǎn)品文號以后才有資格實(shí)施對新生牛血清的采集、生產(chǎn)與銷售。

3.2 積極提高對新生牛血清采集源頭的質(zhì)量? 管控

從源頭層面出發(fā)，重視對新生牛血清采集源頭的控制，對采集地點(diǎn)、范圍等予以確定，并按照相應(yīng)法律法規(guī)要求，確保該采集區(qū)已經(jīng)過獸藥監(jiān)管部門的登記與審核，并滿足批準(zhǔn)采集實(shí)施條件。同時(shí)，在對新生牛犢進(jìn)行血清采集前，還需要經(jīng)過健康統(tǒng)計(jì)與追溯調(diào)查，結(jié)合專業(yè)獸醫(yī)實(shí)施衛(wèi)生檢疫的結(jié)果，最終判斷其是否滿足條件。只有上述條件均滿足，并經(jīng)過完善化的檢疫流程、獲得相應(yīng)的檢測結(jié)果后，才具備提供新生牛血清的條件。

3.3 嚴(yán)格落實(shí)新生牛血清的質(zhì)量管理控制標(biāo)準(zhǔn)

研究發(fā)現(xiàn)，針對生產(chǎn)新生牛血清的廠家依舊存在未曾準(zhǔn)確執(zhí)行新生牛血清質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)的情況，在具體操作過程中，為了盡可能降低成本，有時(shí)甚至可能省略部分項(xiàng)目的檢查，這必然會增加新生牛血清質(zhì)量安全風(fēng)險(xiǎn)。因此，為了避免上述現(xiàn)象的發(fā)生，需要加強(qiáng)對其質(zhì)量的監(jiān)督，并制定出明確的處罰規(guī)定。在執(zhí)行期間，以《中國生物制品規(guī)程》《中國生物制品主要原輔材料質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)》為依據(jù)，加強(qiáng)對新生牛血清的質(zhì)量管控。從國家層面出發(fā)，則應(yīng)提升行業(yè)的監(jiān)管力度，嚴(yán)格按照操作規(guī)范去落實(shí)對新生牛血清生產(chǎn)過程的監(jiān)督與檢測。此外，在對新生牛血清展開研究時(shí)，要從其血清成分、是否存在病毒等方面出發(fā)，保證研究過程更為深入，不斷提升新生牛血清的質(zhì)量，使其滿足國家質(zhì)控標(biāo)準(zhǔn)要求。根據(jù)國內(nèi)牛血清的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，依據(jù)《中華人民共和國藥典》三部（2020版）通則（3604 新生牛血清檢測要求），對胎牛血清質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)主要參考第九版《歐洲藥典》（EP 9.0）和《美國藥典》（USP 40）胎牛血清相關(guān)規(guī)定。在對牛血清進(jìn)行檢測期間，包括以下項(xiàng)目：①理化檢測;②微生物檢測（細(xì)菌、真菌、支原體、噬菌體）;③病毒檢測;④細(xì)胞增殖檢測，保障血清品質(zhì)[7]。以牛血清中的常見病毒為例，其檢測項(xiàng)目見表2。

3.4 科學(xué)構(gòu)建供應(yīng)商審核機(jī)制、規(guī)范對血清供應(yīng)商的質(zhì)量管控

對使用新生牛血清的企業(yè)而言，則結(jié)合企業(yè)實(shí)際情況，科學(xué)建立起更為嚴(yán)格的供應(yīng)商管理機(jī)制，確保在選擇新生牛血清時(shí)做到有據(jù)可依。第一，在選擇和確定新生牛血清供應(yīng)商時(shí)，要確保物料采購、生產(chǎn)部門、質(zhì)量管理部門人員共同參與，完成篩選與審核。在對血清供應(yīng)商進(jìn)行審查時(shí)，從企業(yè)的生產(chǎn)能力、質(zhì)量管理、人員配置、物料管理等多方面出發(fā)，保證該供應(yīng)商足夠可靠且具備相關(guān)資質(zhì)，并盡可能與之建立起長久性的合作關(guān)系。第二，在確定好供應(yīng)商后，還需提前對相關(guān)樣品實(shí)施檢驗(yàn)和試用。通常來講，企業(yè)可向新生牛血清生產(chǎn)廠家獲取不同批次的樣品，用以檢驗(yàn)上述血清是否滿足質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，并依據(jù)最終的試用結(jié)果決定是否采購。第三，使用企業(yè)可優(yōu)先向牛血清供應(yīng)商提供自身所需標(biāo)準(zhǔn)，正常狀態(tài)下，企業(yè)自身使用的牛血清質(zhì)量甚至要超過國家規(guī)定的標(biāo)準(zhǔn)，為了保證生產(chǎn)出來的新生牛血清滿足使用要求，應(yīng)控制檢測、包裝儲存、運(yùn)轉(zhuǎn)等各個(gè)流程的質(zhì)量，積極消除生產(chǎn)及運(yùn)送過程中存在的隱患。第四，對新生牛血清的生產(chǎn)廠家實(shí)施定期或者不定期的檢查，通過前往現(xiàn)場對工作環(huán)境進(jìn)行監(jiān)督考察，了解生產(chǎn)企業(yè)的質(zhì)量保障體系，觀察生產(chǎn)記錄、質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)是否按照規(guī)范執(zhí)行，掌握客戶反饋意見的處理結(jié)果，并結(jié)合上述內(nèi)容予以綜合性評估，以便實(shí)現(xiàn)優(yōu)選供應(yīng)商、確定合理的采購比例。

3.5 建立健全血清質(zhì)量監(jiān)測項(xiàng)目、保證檢驗(yàn)流程的完善性

為了確保供動物疫苗生產(chǎn)所用的新生牛血清能夠滿足標(biāo)準(zhǔn)，要積極建立健全的血清質(zhì)量監(jiān)測項(xiàng)目，在操作期間嚴(yán)格遵從獸藥GMP的相關(guān)規(guī)定，確保隨機(jī)抽樣達(dá)到標(biāo)準(zhǔn)[8]。另外，從企業(yè)內(nèi)部而言，還應(yīng)當(dāng)建立起內(nèi)控質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，保證各檢測項(xiàng)目足夠完善。基于新生牛血清的檢驗(yàn)，主要涉及到蛋白質(zhì)含量、支原體、大腸桿菌等方面的檢測，并確保其擁有支持細(xì)胞增殖的能力。針對上述不同項(xiàng)目，可按照隨機(jī)抽樣方法分別檢查，不斷提高檢測水平并確保檢驗(yàn)的規(guī)范性。此外，針對已放置一定時(shí)間的新生牛血清，在使用前通常要進(jìn)行綜合性判斷，例如，先從外觀來判斷是否出現(xiàn)較多沉淀、血清過于渾濁等情況，若存在上述情況就應(yīng)舍棄。若外觀檢測沒有問題，則還需要實(shí)施蛋白質(zhì)變性檢測、振蕩后觀察液體變化等，有效確保檢驗(yàn)流程的完善性，為動物疫苗生產(chǎn)提供安全支持。

4? 結(jié)語

綜上所述，在明確新生牛血清的重要性后，為了強(qiáng)化其質(zhì)量控制，可以采用提升行業(yè)監(jiān)管力度，保證新生牛血清的生產(chǎn)、銷售及使用均能夠滿足規(guī)范，積極提高對新生牛血清采集源頭的質(zhì)量管控，嚴(yán)格落實(shí)新生牛血清的質(zhì)量管理控制標(biāo)準(zhǔn)，科學(xué)構(gòu)建供應(yīng)商審核機(jī)制、規(guī)范對血清供應(yīng)商的質(zhì)量管控，建立健全的血清質(zhì)量監(jiān)測項(xiàng)目、保證檢驗(yàn)流程的完善性等方法，充分確保新生牛血清質(zhì)量滿足要求，為動物疫苗生產(chǎn)帶來幫助。

參考文獻(xiàn)

[1] 張峰宇.口蹄疫滅活疫苗生產(chǎn)工藝中新生牛血清的應(yīng)用進(jìn)展[J].獸醫(yī)導(dǎo)刊，2020（14）：224-225.

[2] 李自良，王家敏，趙彩紅，等.不同類型牛血清對MDCK細(xì)胞培養(yǎng)效果研究[J].生物學(xué)雜志 ，2020，37（4）：21-25.

[3] ZIMMERMAN D H，KERN M.Differentiation of lymphoid cells.A selective anti-mitogenic component of normal serum which inhibits the induction of immunoglobulin production[J].The Journal of biological chemistry，2021，42（9）：1157-1160.

[4] 李乃順.淺論新生牛血清病毒檢測[J].畜牧獸醫(yī)科技信息，2017（4）：31.

[5] RIFFAULT S，HGGLUND S，GUZMAN E，et al.A single shot pre-fusion-stabilized bovine RSV F vaccine is safe and effective in newborn calves with maternally derived antibodies[J].Vaccines，2020，8（2）：43-45.

[6] 張豆，李月影，申碩，等.新生牛血清快速篩選方法的建立[J].中國生物制品學(xué)雜志，2022，35（2）：200-204.

[7] 李俊.新生牛血清在動物血清制備中的質(zhì)量管理[J].中獸醫(yī)學(xué)雜志，2017（2）：87-88.

[8] 馬春英，王美皓，馬花，等.不同批次新生牛血清對CHO細(xì)胞培養(yǎng)效果的研究[J].西北民族大學(xué)學(xué)報(bào)（自然科學(xué)版），2021，42（2）：67-73.