申滬 李春蘭 魯偉 龍燕華 張廷梅

550003 貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心門(mén)急診，貴州 貴陽(yáng)

結(jié)核病是由結(jié)核分枝桿菌感染引起的慢性疾病，其死亡率居單一病原體感染的疾病之首，隨著耐藥病菌的出現(xiàn)，對(duì)人類(lèi)生命安全造成重大威脅。目前結(jié)核病的診斷仍有局限[1]，除外病原學(xué)和病理學(xué)檢查為金指標(biāo)外，其他檢查均為輔助診斷手段。近年來(lái)國(guó)內(nèi)外很多結(jié)核病免疫方面研究，希望能從根本上找到結(jié)核病控制的辦法，故發(fā)現(xiàn)新的有助于診斷肺結(jié)核的檢查手段成為必然。研究證實(shí)，白介素-27(IL-27)在結(jié)核感染中發(fā)揮重要作用[2]，但參與結(jié)核的相關(guān)免疫機(jī)制尚未完全闡明。IL-27 是機(jī)體參與結(jié)核免疫過(guò)程，降低結(jié)核桿菌殺傷力的重要因子，若證實(shí)肺結(jié)核中IL-27濃度明顯高于其他肺部感染患者，則IL-27將逐步成為結(jié)核感染研究的新方向。支氣管鏡為肺結(jié)核常用檢查手段，探討肺結(jié)核肺泡灌洗液(BALF)中IL-27 含量，有一定臨床價(jià)值。

資料與方法

收集2017年1月-2019年9月110 例貴陽(yáng)市公共衛(wèi)生救治中心診治的肺部疾病患者的BALF。年齡18～80 歲，肺結(jié)核80 例，其他肺部疾病30 例。根據(jù)《肺結(jié)核診斷標(biāo)準(zhǔn)》WS288-2008 選擇活動(dòng)性肺結(jié)核患者入組，按痰或纖刷物抗酸涂片結(jié)果分成肺結(jié)核痰陽(yáng)組31 例(第1 組)，肺結(jié)核痰陰組49 例(第2 組)，同期收集其他肺部疾病但為非肺結(jié)核組共30 例(第3組)，未開(kāi)始規(guī)范抗感染治療。第1 組男19 例，女12例；年齡32～52 歲。第2 組男31 例，女18 例；年齡30～50 歲。第3 組男19 例，女11 例；年齡34～52歲。兩組一般資料比較，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)，具有可比性。

納入標(biāo)準(zhǔn)：①活動(dòng)性肺結(jié)核、肺炎、肺癌患者；②能行纖支鏡肺泡灌洗檢查；③年齡18～80歲。

排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并肺外結(jié)核、合并其他系統(tǒng)疾病(艾滋病、糖尿病、甲狀腺疾病等免疫系統(tǒng)疾病或全身性疾病)；②不能行纖維支氣管鏡檢查；③肺部有活動(dòng)性出血；④氣道使用過(guò)抗結(jié)核藥物局部治療；⑤間質(zhì)性肺疾病、職業(yè)性肺疾病。

方法：試劑及儀器選?。喝薎L-27 酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(ELISA)試劑盒購(gòu)自南京森貝伽生物科技有限公司，DNM-9602G 型酶標(biāo)分析儀，孵育器MKF-6，KJ-201A型振蕩器。標(biāo)本采集及處理：支氣管鏡檢查時(shí)先吸凈氣道分泌物，將支氣管鏡前端置于病灶開(kāi)口部位，用生理鹽水灌洗，30 mL/次，總量100 mL，分次負(fù)壓吸出，回收量占總量的30%～40%，盡量避免大氣道分泌物混入、紅細(xì)胞小于20%的BALF 標(biāo)本視為合適標(biāo)本，取15 mL 的BALF，均用4 000 r/min 離心10 min 后取上清液1.5 mL 封蓋冷凍保存(-200C)備用，第1 份灌洗液送檢病原學(xué)檢查，第2 份灌洗液送檢IL-27 濃度檢測(cè)。檢測(cè)方法采用ELISA 試劑盒檢測(cè)IL-27濃度水平，嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)操作，DNM-9602G型酶標(biāo)分析儀檢測(cè)標(biāo)本的吸光度、OD值。

觀察指標(biāo)：對(duì)比分析3組樣本IL-27濃度變化。

統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS 20.0 軟件數(shù)據(jù)分析，先對(duì)資料進(jìn)行正態(tài)分布檢驗(yàn)，資料均不符合正態(tài)分布，行秩和檢驗(yàn)(Kruskal-Wallis)檢驗(yàn)和秩和多重分析檢驗(yàn)(LSD)，以P＜0.05 為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01 為差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。繪制ROC曲線(xiàn)，計(jì)算得出曲線(xiàn)下面積、最佳截?cái)嘀?、靈敏度、特異度、約登指數(shù)。

結(jié) 果

三組IL-27 濃度比較：第1 組濃度最高，第2 組次之，第3 組最低，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。見(jiàn)表1。

表1 第1組、第2組、第3組IL-27濃度(ng/mL)水平比較分析

各組間LSD 檢驗(yàn)，第1 組與第2 組對(duì)比，差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)；第1組與第3組、第2組與第3組對(duì)比，差異有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。提示通過(guò)檢測(cè)BALF 中IL-27 濃度可區(qū)別肺結(jié)核與非肺結(jié)核，特別是痰陰肺結(jié)核。見(jiàn)表2。

表2 第1組、第2組、第3組IL-27濃度(ng/mL)水平多重比較

根據(jù)ROC曲線(xiàn)得出4組結(jié)果(見(jiàn)表3)：①將第1組和第2組合并為活動(dòng)性肺結(jié)核組，與第3組比較(見(jiàn)圖1)：提示BALF 中IL-27 濃度對(duì)于診斷肺結(jié)核有較高敏感性，但特異性不高。②第1組和第3組比較(見(jiàn)圖2)：提升了特異性的同時(shí)，靈敏度降低。③第2 組和第3組比較(見(jiàn)圖3)：進(jìn)一步證實(shí)當(dāng)肺結(jié)核痰抗酸桿菌檢查為陰性時(shí)，可以得到和痰陽(yáng)肺結(jié)核檢測(cè)時(shí)類(lèi)似的結(jié)果。④第1 組和第2 組比較(見(jiàn)圖4)：提示用于區(qū)別痰檢結(jié)果不同的肺結(jié)核的臨床價(jià)值較小。

圖1 活動(dòng)性肺結(jié)核組和非肺結(jié)核組IL-27濃度特異性、敏感性分析

圖2 第1 組和第3 組IL-27濃度特異性、敏感性分析

圖3 第2組和第3組IL-27濃度特異性、敏感性分析

圖4 第1 組和第2 組IL-27濃度特異性、敏感性分析

表3 第1組、第2組、第3組IL-27濃度(ng/ml)ROC曲線(xiàn)結(jié)果

討 論

IL-27 來(lái)源于IL-12 細(xì)胞因子家族[1]，主要來(lái)源于激活的抗原遞呈細(xì)胞，有促炎、抗炎的雙重作用，機(jī)體受結(jié)核桿菌感染，以Th1 型免疫反應(yīng)為主，IL-27能限制Th1型免疫反應(yīng)強(qiáng)度，抑制結(jié)核桿菌生長(zhǎng)，而巨噬細(xì)胞是殺傷結(jié)核桿菌的主要效應(yīng)細(xì)胞，IL-27 使機(jī)體在結(jié)核桿菌感染過(guò)程中，防御性免疫及過(guò)度免疫反應(yīng)引起的病理性損傷保持平衡，因此，IL-27 是機(jī)體參與結(jié)核免疫過(guò)程，降低結(jié)核桿菌殺傷力的又一重要因子。近年來(lái)，學(xué)者們已進(jìn)行了IL-27 和結(jié)核性胸膜炎方面的相關(guān)性研究分析，且證實(shí)IL-27 水平明顯高于非結(jié)核性胸腔積液[3]。一項(xiàng)Meta 分析研究顯示，檢測(cè)胸腔積液中IL-27 水平總體特異性為97%，靈敏性為93%[4]。BALF 中IL-27 的研究也不少[5]。本研究提示，肺結(jié)核BALF 中IL-27 濃度高于非肺結(jié)核肺部疾病，痰陽(yáng)肺結(jié)核中濃度最高，痰陰肺結(jié)核次之，檢測(cè)敏感度較高，輔助診斷肺結(jié)核有一定臨床價(jià)值，但特異性指數(shù)不高，會(huì)有假陽(yáng)性可能。

綜上所述，通過(guò)該研究初步考慮通過(guò)檢測(cè)BALF中IL-27 濃度對(duì)于輔助診斷肺結(jié)核有一定的臨床意義，檢查時(shí)間短，能及時(shí)快速地給出結(jié)果，對(duì)于早期輔助診斷肺結(jié)核有意義。