曾依伶， 魏曉紅， 陳海博， 王星月， 王美佳

(1.四川省成都市上錦南府醫(yī)院血液內(nèi)科， 四川 成都 611700 2.四川大學(xué)華西醫(yī)院， 四川 成都 610041)

多發(fā)性骨髓瘤(MM)為惡性增殖性疾病，主要表現(xiàn)為骨髓中漿細(xì)胞異常增殖，隨后骨髓造血功能被破壞，多數(shù)患者伴隨單克隆免疫球蛋白(Ig)分泌、輕鏈，骨髓中漿細(xì)胞無(wú)限制增生，若控制不佳則會(huì)導(dǎo)致組織或器官損傷，威脅患者生命[1]，因此加強(qiáng)臨床診斷及早期干預(yù)是當(dāng)前研究重點(diǎn)。但骨髓中骨髓細(xì)胞呈灶性分布、細(xì)胞數(shù)量大及骨髓穿刺部位特殊等均會(huì)增加臨床區(qū)分正常漿細(xì)胞與骨髓瘤細(xì)胞的難度，增加臨床早期診斷難度[2]。當(dāng)前尚無(wú)研究具體分析MM病因，但隨著多參數(shù)流式細(xì)胞儀的推廣，針對(duì)MM免疫分型的研究逐漸增多，免疫分型指標(biāo)包括CD38+、CD138+、CD56+、HLA-DR、Kappa輕鏈、Lambda輕鏈、CD19+、CD20+，且已有研究分析分化抗體群在MM早期診斷中具有特異性指導(dǎo)價(jià)值[3,4]，但較少研究分析免疫分型在MM患者中的表現(xiàn)特征。

1 對(duì)象與方法

1.1研究對(duì)象：選取我院收治的116例MM患者為研究對(duì)象(觀察組)，另選取同期在我院治療的86例增生性貧血患者為對(duì)照組，兩組一般資料有可比性(P>0.05)，見表1。研究符合赫爾辛基宣言相關(guān)準(zhǔn)則。

表1 研究對(duì)象一般資料

1.2納排標(biāo)準(zhǔn)：納入：①觀察組診斷為MM[5]，對(duì)照組符合增生性貧血診斷標(biāo)準(zhǔn)[6]；②均知情并自愿參與本項(xiàng)研究。排除：①合并凝血功能異常者；②合并其他惡性腫瘤者；③精神異常，無(wú)法溝通者。

1.3方法及觀察指標(biāo)：①在無(wú)菌條件下，經(jīng)受試者骨髓穿刺取0.2mL骨髓液，涂片、染色，光學(xué)顯微鏡下觀察形態(tài)，根據(jù)患者粒細(xì)胞與紅細(xì)胞比值、淋巴細(xì)胞比例、骨髓增生、骨髓瘤細(xì)胞陽(yáng)性率分類骨髓細(xì)胞，另抽取2mL骨髓液放置在抗凝管中應(yīng)用四色流式細(xì)胞儀獲取10000個(gè)細(xì)胞分析，陽(yáng)性水平根據(jù)FITC-/PE-/APC-自發(fā)熒光范圍確定。熒光強(qiáng)度：陰性(低于102)，弱陽(yáng)性(102～103)、強(qiáng)陽(yáng)性(超過104)，陽(yáng)性(胞漿內(nèi)抗原及膜抗原超過20%)。②分析比較觀察組與對(duì)照組免疫分型的差異，指標(biāo)包含CD38+、CD138++、CD56+、HLA-DR、Kappa輕鏈、Lambda輕鏈、CD19+、CD20+。③根據(jù)患者骨髓瘤細(xì)胞陽(yáng)性率情況分為不同亞組。比較不同陽(yáng)性率情況患者骨髓細(xì)胞免疫分型情況。④免疫分型陽(yáng)性率與不同臨床特征關(guān)系，臨床特征指標(biāo)包括蛋白類型、臨床分期、貧血程度、骨破壞情況，其中蛋白類型包括IgG型、IgA型、IgD型、輕鏈型；臨床分期主要包含Ⅱ期、Ⅲ期；貧血程度為不貧血、輕度貧血、中度貧血重度貧血。對(duì)比不同蛋白類型、臨床分期、是否貧血患者CD38+、CD138+、CD56+、HLA-DR、Kappa輕鏈、Lambda輕鏈、CD19+、CD20+抗體水平，并探討免疫分型與臨床指征關(guān)系。

2 結(jié) 果

2.1骨髓細(xì)胞形態(tài)學(xué)：116例患者存在112例(96.55%)骨髓增生活躍，4例(3.45%)骨髓增生減低。光學(xué)顯微鏡骨髓結(jié)果顯示：存在形態(tài)及大小差異顯著的偏幼稚型漿細(xì)胞，呈火焰狀，核大，直徑>1010μm，且染色結(jié)果顯示發(fā)現(xiàn)質(zhì)地均勻，核仁亦顯示清晰，胞漿量亦較多，部分細(xì)胞還存在空泡或顆粒狀包涵體。鏡檢后將116例MM患者根據(jù)淋巴細(xì)胞比例、骨髓瘤細(xì)胞陽(yáng)性率、粒細(xì)胞與紅細(xì)胞比值及骨髓增生情況進(jìn)行分類：淋巴細(xì)胞比例：高于1～5∶1 16例(13.79%)，1～5∶1 91例(78.44%)，低于1～5∶1 9例(7.76%)；骨髓瘤細(xì)胞陽(yáng)性率：低于14% 15例(12.93%)，15%～29% 52例(44.83%)，30%～49% 37例(31.90%)，50%～90% 12例(10.34%)；粒細(xì)胞與紅細(xì)胞比值：比值低于20%的為例83(71.55%)，超過20%的有33例(28.45%)；骨髓增生情況：極度、明顯、增生活躍及增生減低各3例(2.59%)、64例(55.17%)、41例(35.34%)、8例(6.90%)。

2.2骨髓細(xì)胞免疫分型：116例患者免疫分型各亞型陽(yáng)性率均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，見表2。

表2 MM患者與對(duì)照組骨髓細(xì)胞免疫分型陽(yáng)性率比較n(%)

2.3MM患者骨髓細(xì)胞不同百分比陽(yáng)性率差異：MM患者不同比例骨髓瘤細(xì)胞亞組免疫分型陽(yáng)性率比較均無(wú)顯著差異(P>0.05)，見表3。

表3 MM患者骨髓細(xì)胞不同百分比陽(yáng)性率差異n(%)

2.4免疫分型陽(yáng)性率與MM患者蛋白類型、臨床分期、貧血、骨破壞關(guān)系：在不同蛋白類型、臨床分期、是否貧血及是否存在骨破壞患者中CD38+、CD138+、CD56+、HLA-DR、Kappa輕鏈、Lambda輕鏈、CD19+、CD20+抗體陽(yáng)性率比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)，見表4。

表4 免疫分型陽(yáng)性表達(dá)率與MM患者蛋白類型臨床分期貧血骨破壞關(guān)系n(%)

3 討 論

MM為臨床常見的惡性增殖性疾病，好發(fā)于中老年人，且男性發(fā)病率較女性更高，當(dāng)前缺乏對(duì)MM確切流行病學(xué)資料，但既往研究提出，MM發(fā)病率呈逐年升高趨勢(shì)，且骨髓增生程度不均勻，因骨髓瘤細(xì)胞灶性分布、惡性克隆增生，導(dǎo)致其形態(tài)及數(shù)量均有差異[7]。隨著人口老齡化的發(fā)展，MM發(fā)病率逐年升高，病死率亦隨之升高。近年來(lái)隨著醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)的發(fā)展，流式細(xì)胞術(shù)已逐漸成為MM診斷及分型的有效依據(jù)，可客觀、準(zhǔn)確反映骨髓瘤細(xì)胞生物學(xué)特征[8]。

盧姿[9]等研究中提出，在多發(fā)性骨髓瘤細(xì)胞診斷中骨髓瘤細(xì)胞形態(tài)學(xué)研究具有較高的應(yīng)用價(jià)值，且聯(lián)合免疫固定電泳則可準(zhǔn)確分型免疫蛋白，為多發(fā)性骨髓瘤的診斷提供依據(jù)。本研究發(fā)現(xiàn)，116例患者存在112例骨髓增生活躍，4例骨髓增生減低，提示骨髓漿細(xì)胞異常增生的檢出可作為臨床診斷MM的有效病理變化。MM患者骨髓片檢查中發(fā)現(xiàn)，有偏幼稚型漿細(xì)胞，形態(tài)、大小不同，部分呈火焰狀，核偏大，在10μm以上，可能與骨髓瘤細(xì)胞的異常克隆增生及灶性分布相關(guān)，提示臨床可結(jié)合患者骨髓瘤細(xì)胞形態(tài)結(jié)構(gòu)早期評(píng)估病情。

滑歡[10]等研究中提出，MM患者骨髓瘤細(xì)胞中CD138+、CD38+表達(dá)為97.5%，CD56+表達(dá)為66.7%，為表達(dá)較強(qiáng)的三種免疫蛋白。本研究發(fā)現(xiàn)116例患者中CD38+、CD138+、CD56+、HLA-DR、Kappa輕鏈、Lambda輕鏈、CD19+、CD20+陽(yáng)性率均顯著高于對(duì)照組，其中CD38+、CD138+、CD56+表達(dá)分別為99.14%、97.41%、75.86%，為表達(dá)率相對(duì)較高的三種分型，提示CD38+、CD138++、CD56+為三個(gè)特異性較高的骨髓瘤細(xì)胞表面標(biāo)記物。分析CD38表達(dá)在造血干細(xì)胞，CD138主要介導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞黏附，在淋巴細(xì)胞及骨髓造血前體細(xì)胞中均不表達(dá)，但在MM所有細(xì)胞中表達(dá)較強(qiáng)，為漿細(xì)胞特異性表面標(biāo)志物[11]。CD56介導(dǎo)骨髓瘤細(xì)胞黏附，是自然殺傷細(xì)胞標(biāo)志物，與基質(zhì)細(xì)胞及骨髓瘤細(xì)胞相互作用相關(guān)。在正常細(xì)胞中不表達(dá)，但在MM瘤細(xì)胞中呈高表達(dá)，介導(dǎo)瘤細(xì)胞歸巢[12]。因此筆者認(rèn)為在對(duì)骨髓瘤細(xì)胞免疫蛋白分型研究中，CD38+、CD138+、CD56+三種分型陽(yáng)性率最高，具有更高的指導(dǎo)性意義。但膜的免疫球蛋白不在正常漿細(xì)胞中表達(dá)，因此仍需檢測(cè)胞內(nèi)Lambda輕鏈抗原、Kappa輕鏈，對(duì)漿細(xì)胞克隆性進(jìn)行評(píng)估。

本研究發(fā)現(xiàn)MM患者不同比例骨髓瘤細(xì)胞亞組免疫分型比較均無(wú)顯著差異，提示骨髓瘤細(xì)胞免疫分型可能與其骨髓瘤細(xì)胞陽(yáng)性率無(wú)關(guān)，但考慮在本研究中，例數(shù)較少為局限性所在，在后期研究中可擴(kuò)大研究樣本量進(jìn)行以上驗(yàn)證。本研究還發(fā)現(xiàn)，在不同蛋白類型、臨床分期是否貧血及是否存在骨破壞患者中CD38+、CD138+、CD56+、HLA-DR、Kappa輕鏈、Lambda輕鏈、CD19+、CD20+抗體表達(dá)比較均無(wú)顯著差異，提示骨髓瘤細(xì)胞免疫分型與蛋白類型、臨床分期、貧血、骨破壞無(wú)直接相關(guān)性，但本研究局限在于研究例數(shù)相對(duì)較少，因此需擴(kuò)大樣本量對(duì)本研究結(jié)果進(jìn)行驗(yàn)證。

綜上所述，MM患者多存在骨髓增生活躍，骨髓瘤細(xì)胞的形態(tài)是其基本診斷方式，結(jié)合免疫分型檢測(cè)，在臨床診斷及干預(yù)中均具有指導(dǎo)意義。