孫 瑤， 孫 琨

(山東省淄博市中心醫(yī)院, 山東 淄博 255000)

慢性腎功能衰竭(chronic renal failure，CRF)是一種慢性腎臟系統(tǒng)疾病，早期發(fā)病較為隱匿，隨時(shí)間延長，腎功能進(jìn)行性增加損害，引起一系列并發(fā)癥，對患者生命健康安全產(chǎn)生嚴(yán)重威脅[1,2]。如果CRF患者病情未能得到有效控制，會(huì)發(fā)展為終末期腎病，因此需要尋找有效的指標(biāo)，早期進(jìn)行正確診斷預(yù)測[3]。血清β2-微量球蛋白(β2-microglobulin，β2-MG)是反映腎功能早期損傷的蛋白，當(dāng)腎臟發(fā)生損傷時(shí)，血清β2-MG水平升高，是反映腎臟損傷中的靈敏指標(biāo)。微小RNAs(microRNAs，miRNAs)可以調(diào)控基因的表達(dá)，miR-182是近年來發(fā)現(xiàn)的一種微小RNA，已有報(bào)道表明miR-182在多種惡性腫瘤組織中存在異常表達(dá)[4]。目前尚未有研究報(bào)道m(xù)iR-182在CRF中的表達(dá)情況。血尿素氮(Blood ureanitrogen，BUN)常用于檢查排尿功能是否正常[5]。臨床作為反映腎功能的常用指標(biāo)，在反映腎衰竭方面更為敏感臨床上尚未有研究探討β2-MG、miR-182、BUN聯(lián)合檢測在CRF中的應(yīng)用及其三者間的相關(guān)性[6]。鑒于此，本研究檢測β2-MG、miR-182、BUN在老年慢性腎衰竭患者中的表達(dá)，分析三者相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1一般資料:選取在我院接受治療的43例慢性腎功能衰竭患者于2019年3月至2020年12月，作為研究組，年齡60-78歲，男25例，女18例，病程3-12年；選取同時(shí)期于我院進(jìn)行健康體檢的正常人43例，作為對照組，其中男24例，女19例，年齡61-78歲，兩組受試者年齡、性別等一般資料比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)，研究組胱抑素C(Cystatin C,CYSC)、血清肌酐(serum creatinine，Scr)、視黃醇結(jié)合蛋白(Retinol-Binding Protein,RBP)表達(dá)均高于對照組(P<0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：所有患者均符合CRF診斷標(biāo)準(zhǔn)，腎小球?yàn)V過率(Glomerularfiltration rate，eGFR)32～92mL/min；腎小球?yàn)V過率大于70mL/min/1.73m2為早期，小于70mL/min/1.73m2為非早期，所有受試者均知情，簽署知情同意書，經(jīng)我院倫理會(huì)批準(zhǔn)通過。排除標(biāo)準(zhǔn)：患有嚴(yán)重的心腦血管、肝、腎等疾病的患者；精神異常者；患有感染性疾病者；接受過透析治療者。見表1。

表1 臨床基線資料

1.2檢測指標(biāo)

1.2.1標(biāo)本采集:采集5mL肘靜脈血液于所有受試者入組后次日清晨空腹抽取，3000r/min離心10min，離心半徑10cm，分離血清，置于-80℃冰箱保存待檢。

1.2.2β2-MG、BUN檢測:應(yīng)用免疫比濁法測定血清β2-MG、BUN水平，檢測儀器為Roche 8000全自動(dòng)生化分析儀(德國Roche公司)，嚴(yán)格按照試劑盒說明書進(jìn)行具體步驟操作。

1.2.3miR-182表達(dá):miR-182表達(dá)情況應(yīng)用熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)技術(shù)檢測。提取血漿總RNA，測定RNA濃度，進(jìn)行qRT-PCR反應(yīng)。合成cDNA，稀釋10倍。分別使用目的基因miR-182及內(nèi)參基因U6的特異性引物，引物序列：miR-182引物上游:5'-ACTACTTCGACTGAGACACG-3'，下游:5'-GTCTGCATGCTGTCCTTG-3'。采用386孔板20μL體系。50℃ 2min，1個(gè)循環(huán)；95℃ 10min，1個(gè)循環(huán)；95℃ 15s、60℃ 30s、72℃ 30s，40個(gè)循環(huán)；72℃ 10min，1個(gè)循環(huán)。以U6為內(nèi)參，采用2-ΔΔCt法進(jìn)行miR-182的相對定量。

1.2.4CYSC、Scr、RBP 檢測:應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附測定法測定CYSC、Scr、RBP水平，試劑盒購自武漢博士德生物工程有限公司，嚴(yán)格按照說明書操作。

2 結(jié) 果

2.1β2-MG、miR-182、BUN表達(dá)在各組中比較:研究組血清β2-MG、miR-182、BUN表達(dá)水平均高于對照組(P<0.05)，見表2。

表2 β2-MG miR-182 BUN表達(dá)在各組中比較

2.2β2-MG、miR-182、BUN三者相關(guān)性：研究組患者血清β2-MG與miR-182之間呈正相關(guān)(r=0.695，P=0.001)；血清β2-MG與BUN之間呈正相關(guān)(r=0.733，P=0.001)；血清miR-182與BUN之間呈正相關(guān)(r=0.778，P=0.001)(P<0.05)。見圖1。

圖1 β2-MG、miR-182、BUN三者相關(guān)性

2.3研究組疾病不同病理分期β2-MG、miR-182、BUN水平變化：研究組早期患者血清β2-MG、miR-182、BUN水平高于非早期患者(P<0.05)。見表3。

表3 研究組疾病不同病理分期β2-MG miR-182 BUN水平變化

2.4β2-MG、miR-182、BUN表達(dá)與老年慢性腎功能衰竭病理特征關(guān)系：患者血清β2-MG、miR-182、BUN水平與性別無關(guān)(P>0.05)，與年齡、少尿、水腫、大量尿蛋白有關(guān)(P<0.05)。年齡≥65歲、少尿、水腫、大量尿蛋白患者β2-MG、miR-182、BUN表達(dá)水平較高(P<0.05)。見表4。

表4 β2-MG miR-182 BUN表達(dá)與老年慢性腎功能衰竭病理特征關(guān)系

2.5β2-MG、miR-182、BUN對老年慢性腎功能衰竭的診斷價(jià)值:ROC分析β2-MG、miR-182、BUN診斷老年慢性腎功能衰竭靈敏度低于三項(xiàng)聯(lián)合，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.05)。三項(xiàng)聯(lián)合檢測對老年慢性腎功能衰竭患者診斷效能較高(P<0.05)。見表5、圖2。

表5 β2-MG miR-182 BUN對老年慢性腎功能衰竭的診斷價(jià)值

圖2 β2-MG、miR-182、BUN對老年慢性腎功能衰竭的診斷價(jià)值

3 討 論

CRF的特點(diǎn)是為尿液中肌酐和含氮廢物的濃度出現(xiàn)可逆性增加，并且不能通過腎臟合理調(diào)節(jié)體液和電解質(zhì)平衡，病理機(jī)制比較多變，因此，對于早期診斷CRF并預(yù)防并發(fā)癥具有深遠(yuǎn)意義[7]。

β2-MG為單鏈多肽，屬于組織相容性白細(xì)胞抗原的輕鏈或β鏈，可以自由通過腎小球?yàn)V過膜，腎小管被幾乎全部重吸收并降解在近端。目前，臨床上β2-MG在腎功能減退、自身免疫疾病、惡性腫瘤等中廣泛應(yīng)用于診斷，且診斷價(jià)值較好[8]。徐月霞等[9]的研究發(fā)現(xiàn)，β2-MG水平在CRF的病情發(fā)展中有一定的變化規(guī)律。miR-182屬于miR-183/96/182簇的一員，對生物體的生長、分化、發(fā)育有著重要調(diào)控作用，可通過調(diào)節(jié)不同的靶mRNA，在腫瘤的形成和發(fā)展中發(fā)揮重要作用。近年研究[10]顯示，miR-182在糖、脂代謝方面發(fā)揮著重要調(diào)控作用，若miR-182表達(dá)的紊亂，可能會(huì)導(dǎo)致代謝相關(guān)疾病的發(fā)生。BUN在臨床中作為評(píng)估腎臟功能指標(biāo)，其在反應(yīng)腎功能衰竭方面十分敏感。其升高多見于高蛋白飲食、高分解代謝狀態(tài)、缺水、腎缺血、血容量不足及各種腎功能衰竭的情況，特別是伴有血肌酐升高的時(shí)候。腎功能不全時(shí)，循環(huán)和組織中所潴留的具有毒性作用的物質(zhì)為尿毒素，與腎臟疾病的進(jìn)展和腎功能的衰退均密切相關(guān)。正常人體內(nèi)，BUN表達(dá)水平較低，當(dāng)患者腎功能發(fā)生損害時(shí)，BUN表達(dá)水平升高明顯，加劇疾病的發(fā)生進(jìn)展[11]。

基于此，本研究對β2-MG、miR-182和BUN在CRF患者血清中的表達(dá)意義展開研究。研究結(jié)果發(fā)現(xiàn)，在老年慢性腎功能衰竭患者血清中β2-MG、miR-182和BUN的表達(dá)均顯著升高，且隨著疾病的加重，其相對水平也逐漸升高。相比一般患者，當(dāng)患者年齡≥65歲或具有少尿、水腫、大量尿蛋白等癥狀時(shí)，血清β2-MG、miR-182和BUN的增高會(huì)更加顯著。相關(guān)性分析的結(jié)果進(jìn)一步說明，三者的表達(dá)水平之間呈正相關(guān)，說明其在CRF中具有一定的關(guān)聯(lián)性，可能進(jìn)行聯(lián)合檢測來對CRF進(jìn)行早期診斷篩查。

因此，本研究進(jìn)一步探索不同時(shí)期CRF患者血清β2-MG、miR-182和BUN的表達(dá)，以及三者聯(lián)合相較于單一檢測的靈敏度。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，早期CRF患者血清β2-MG、miR-182和BUN水平顯著高于非早期患者，該結(jié)果說明β2-MG、miR-182和BUN的高表達(dá)能及早反映腎功能的損害，對CRF的早期預(yù)測、診斷和治療有著重要意義，與現(xiàn)有研究結(jié)果[12]一致。ROC分析結(jié)果顯示，三者聯(lián)合檢測診斷對老年慢性腎功能衰竭的靈敏度和準(zhǔn)確度均顯著高于單一檢測，而特異度降低，說明β2-MG、miR-182和BUN可以進(jìn)行組合，來更好的在早期對CRF患者進(jìn)行診斷。

綜上所述，β2-MG、miR-182、BUN在老年慢性腎功能衰竭中呈現(xiàn)高表達(dá)，三者之間具有正相關(guān)性，β2-MG、miR-182、BUN聯(lián)合檢測對于老年慢性腎功能衰竭的診斷價(jià)值較高，對預(yù)后較為重要，可為臨床診斷和治療CRF提供新的思路和理論依據(jù)。本文不足之處在于病例數(shù)較少，結(jié)果存在一定的局限性，今后仍需要進(jìn)一步研究證實(shí)研究結(jié)論。