鄭 煒, 蔡文寶, 葉賢剛

(1.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院胃腸外科, 福建 福州 350005 2.福建省泉州市泉港區(qū)總醫(yī)院普外科， 福建 泉州 362800 3.福建醫(yī)科大學(xué)附屬第一醫(yī)院閩南分院普外科, 福建 泉州 362800)

胃癌是一種上消化道惡性腫瘤，在臨床極為常見(jiàn)，從胃黏膜上皮起源，在我國(guó)，在各類腫瘤發(fā)病率中，胃癌位居第一位。在全球范圍內(nèi)，在癌癥死亡原因中，胃癌位居第三位[1]。胃癌一方面會(huì)損害患者的消化系統(tǒng)，另一方面還可能對(duì)患者的呼吸功能、肝腎功能造成不良影響，嚴(yán)重的情況下還會(huì)有惡病質(zhì)出現(xiàn)，對(duì)患者的生命安全造成威脅[2]。早期胃癌患者具有較好的預(yù)后，但是由于早期具有隱匿的病情，確診時(shí)通常已經(jīng)處于晚期，患者具有較差的預(yù)后，極易轉(zhuǎn)移、復(fù)發(fā)?，F(xiàn)階段，臨床真正有效的靶向治療仍然缺乏。因此，需要對(duì)胃癌的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行研究，將早期診斷分子標(biāo)志物尋找出來(lái)，進(jìn)而將潛在新治療靶點(diǎn)尋找出來(lái)[3]。惡性腫瘤患者的ZFX表達(dá)水平高。Axin在腎、腦、心、肺、肝等正常組織中廣泛表達(dá)，但是在卵巢癌、乳腺癌等多種腫瘤中表達(dá)缺失或下降。目前，臨床還較少有相關(guān)研究報(bào)道ZFX、Axin在胃癌中的表達(dá)。本研究分析了胃癌組織中X染色體連鎖鋅指蛋白、軸蛋白表達(dá)水平及與臨床病理因素的相關(guān)性。

1 資料與方法

1.1一般資料：回顧性選取2018年2月至2021年2月本院胃癌患者300例，將其胃癌組織300例及癌旁組織(與胃癌組織相距5.0cm以上)140例手術(shù)切取下來(lái)，年齡36～70歲，平均(65.03±11.10)歲，女性138例，男性162例。在腫瘤直徑方面，<5cm164例，≥5cm136例；在腫瘤部位方面，胃體112例，近端胃104例，遠(yuǎn)端胃84例；在Duke分期方面，Ⅰ～Ⅱ期166例，Ⅲ～Ⅳ期134例；在分化程度方面，低分化126例，中分化138例，高分化36例；在浸潤(rùn)深度方面，黏膜外層238例，黏膜層32例，黏膜及其下層30例；在淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況方面，轉(zhuǎn)移192例，未轉(zhuǎn)移108例。兩組患者的一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。納入標(biāo)準(zhǔn)：①均具有完善的臨床資料；②均符合原發(fā)性胃癌的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：①有其他對(duì)生命造成威脅的器質(zhì)性病變；②合并其他臟器原發(fā)腫瘤。本研究通過(guò)醫(yī)院醫(yī)學(xué)倫理委員會(huì)批準(zhǔn)，患者均知情同意。

1.2方 法

1.2.1X染色體連鎖鋅指蛋白(ZFX)表達(dá)水平檢測(cè):切片、脫蠟、水化、抗原修復(fù)，用梯度乙醇水化，然后將ZFX一抗加入其中，在4℃的溫度下孵育過(guò)夜，第2天用PBS緩沖液洗滌，之后將二抗滴加其中，在37℃的溫度下孵育30min，最后用DAB、蘇木精、中性樹(shù)膠分別顯色、復(fù)染、封片。

1.2.2軸蛋白(Axin)檢測(cè):連續(xù)切片，厚度為3μm，免疫組化染色：用二甲苯、85%、90%、95%、100%梯度酒精、雙蒸水、枸櫞酸鈉溶液(pH=6.0)、羊血清分別脫蠟、浸泡水化、高溫高壓抗原修復(fù)3min、封閉1h，在4℃的溫度下孵育5μg/mL Axin一抗過(guò)夜，PBS洗滌3次，每次5min，將二抗(B液∶C液=50∶1)滴加其中，DAB法染色。

1.3結(jié)果判定:高倍鏡視野下將5個(gè)視野隨機(jī)從每張組織切片中選取出來(lái)，依據(jù)切片中陽(yáng)性細(xì)胞染色范圍與細(xì)胞染色強(qiáng)度對(duì)染色結(jié)果進(jìn)行判定，顯微鏡下運(yùn)用雙盲法閱片。染色強(qiáng)度：基本不著色、掐黃色、棕黃色、棕褐色分別為0分、1分、2分、3分；染色范圍：1%～5%、6%～25%、26%～50%、51%～75%、76%～100%分別評(píng)定為0分、1分、2分、3分、4分。二者相乘，0分、1～2分、3～4分、5～6分分別表示陰性、弱表達(dá)、中度表達(dá)、強(qiáng)表達(dá)，0～2分、3～6分分別表示陰性、陽(yáng)性[4]。

1.4統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:采用SPSS21.0，計(jì)數(shù)資料用率表示，用χ2檢驗(yàn)。檢驗(yàn)水準(zhǔn)α=0.05。

2 結(jié) 果

2.1胃癌組織和癌旁組織中ZFX、Axin表達(dá)情況比較:胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率84.33%(253/300)高于癌旁組織17.14%(24/140)(P<0.05)；Axin表達(dá)陽(yáng)性率34.00%(102/300)低于癌旁組織84.29%(118/140)(P<0.05)。見(jiàn)表1。

表1 胃癌組織和癌旁組織中ZFX Axin陽(yáng)性表達(dá)情況比較n(%)

2.2胃癌組織中ZFX表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性分析:Duke分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率逐漸降低(P<0.05)，浸潤(rùn)深度黏膜外層、黏膜層、黏膜及其下層患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率逐漸降低(P<0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，但不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表2。

表2 胃癌組織中ZFX表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系n(%)

2.3胃癌組織中Axin表達(dá)與臨床病理因素的相關(guān)性分析:Duke分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率逐漸升高(P<0.05)，浸潤(rùn)深度黏膜外層、黏膜層、黏膜及其下層患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率逐漸升高(P<0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率低于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，但不同性別、年齡、腫瘤直徑、腫瘤位置患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率之間的差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見(jiàn)表3。

表3 胃癌組織中Axin表達(dá)與臨床病理因素的關(guān)系n(%)

3 討 論

胃癌具有較高的惡性程度，患者缺乏顯著的早期癥狀，同時(shí)具有較為迅速的病情進(jìn)展，在評(píng)估患者預(yù)后的過(guò)程中，單純依靠臨床與病理分期的特異性與準(zhǔn)確性較低，因此需要將和腫瘤生長(zhǎng)及發(fā)展相關(guān)的分子標(biāo)志物尋找出來(lái)初步篩查、診斷、治療腫瘤疾病并判斷其預(yù)后[5]。ZFX歸屬于鋅指蛋白家族，在X染色體分布，在多種肝細(xì)胞的抗凋亡機(jī)制、自我更新過(guò)程中均發(fā)揮著極為重要的作用[6]。近年來(lái)，有研究表明[7]，惡性腫瘤患者的ZFX表達(dá)水平高。Axin是一種抑癌基因，現(xiàn)階段，有研究表明[8]，其對(duì)腫瘤進(jìn)行抑制的途徑主要為對(duì)Wnt信號(hào)通路進(jìn)行負(fù)調(diào)控，如果Axin表達(dá)反常，那么其就無(wú)法有效調(diào)控Wnt信號(hào)，進(jìn)而造成細(xì)胞增殖、分化、遷移失衡，從而造成腫瘤發(fā)生發(fā)展。有研究表明[9]，卵巢癌的組織學(xué)分級(jí)、臨床分期、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和Axin表達(dá)相關(guān)。

本研究結(jié)果表明，胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率84.33%(253/300)高于癌旁組織17.14%(24/140)，陰性率15.67%(47/300)低于癌旁組織82.86%(116/140)(P<0.05)；Axin表達(dá)陽(yáng)性率34.00%(102/300)低于癌旁組織84.29%(118/140)，陰性率66.00%(198/300)高于癌旁組織15.71%(22/140)(P<0.05)。Duke分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率低于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率逐漸降低(P<0.05)，浸潤(rùn)深度黏膜外層、黏膜層、黏膜及其下層患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率逐漸降低(P<0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者胃癌組織中ZFX表達(dá)陽(yáng)性率高于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，說(shuō)明胃癌疾病進(jìn)展、轉(zhuǎn)移、惡性程度和ZFX表達(dá)水平提升關(guān)系密切。原因可能為ZFX能夠?qū)δ[瘤細(xì)胞增殖、凋亡進(jìn)行調(diào)節(jié)，途徑為將下游一些基因表達(dá)修改[10]。有研究進(jìn)一步表明[11]，與ZFX陽(yáng)性患者相比，ZFX陰性患者具有較長(zhǎng)的平均生存時(shí)間，以此認(rèn)為在胃癌患者預(yù)后的評(píng)價(jià)中，ZFX可以作為一個(gè)潛在分子標(biāo)志物。

本研究結(jié)果還表明，Duke分期Ⅰ～Ⅱ期患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率高于Ⅲ～Ⅳ期患者(P<0.05)，分化程度低分化、中分化、高分化患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率逐漸升高(P<0.05)，浸潤(rùn)深度黏膜外層、黏膜層、黏膜及其下層患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率逐漸升高(P<0.05)，淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移患者胃癌組織中Axin表達(dá)陽(yáng)性率低于淋巴結(jié)未轉(zhuǎn)移患者(P<0.05)，說(shuō)明在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中，Axin可能是關(guān)鍵基因，胃癌的分化會(huì)在Axin表達(dá)水平下降的情況下下降，轉(zhuǎn)移性、侵襲性會(huì)在Axin表達(dá)水平下降的情況下提升，從而為胃癌的發(fā)生發(fā)展提供有利條件。Axin表達(dá)下調(diào)或缺失后就無(wú)法有效抑制腫瘤，有研究進(jìn)一步表明[12]，Axin會(huì)在β-cantenin作用，表達(dá)下調(diào)會(huì)為β-cantenin異常表達(dá)提供有利條件，可能在胃癌的發(fā)生發(fā)展過(guò)程中參與。

綜上所述，胃癌組織中X染色體連鎖鋅指蛋白表達(dá)陽(yáng)性率提升，軸蛋白表達(dá)陽(yáng)性率降低，均與臨床病理因素中Duke分期、分化程度、浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)，值得臨床重視。