何東杰,衛(wèi)愛武,許麗綿,馮倩怡
1.河南中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,河南 鄭州 450000; 2.廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院,廣東 廣州 510006
不孕癥的發(fā)病率呈逐年上升趨勢(shì),能否成功妊娠是由胚胎質(zhì)量及具備接受胚胎能力的內(nèi)膜協(xié)同作用決定的。子宮內(nèi)膜容受性是指子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎的接受能力,每個(gè)月經(jīng)周期子宮內(nèi)膜僅在短暫的特殊時(shí)期具備允許胚胎植入的能力,這一時(shí)期稱為“種植窗期”[1]。隨著體外受精-胚胎移植助孕技術(shù)的迅猛發(fā)展,胚胎質(zhì)量得到明顯的提高,但低種植率仍是生殖醫(yī)學(xué)領(lǐng)域尚未解決的瓶頸問題。子宮內(nèi)膜容受性下降臨床主要表現(xiàn)為不孕癥、反復(fù)種植失敗等,因此,改善子宮內(nèi)膜容受性成為提高胚胎種植率的關(guān)鍵因素,但目前對(duì)于改善子宮內(nèi)膜容受性的治療尚缺少一致、公認(rèn)的理想藥物和明確的治療方案。中醫(yī)學(xué)者們臨證多采用補(bǔ)腎活血法改善子宮內(nèi)膜容受性,獲得良好的臨床療效[2-3]。同樣,大量的研究顯示,通過改善子宮內(nèi)膜厚度、血流、胞飲突及調(diào)控整合素αVβ3、白血病抑制因子(leukemia inhibitory factor,LIF)、同源盒基因A10(homoboxA10,HOXA10)、雌孕激素等的表達(dá)可提高內(nèi)膜容受性[4-13]。敲除Wnt7a基因時(shí)子宮內(nèi)膜不能生成腺體,上皮出現(xiàn)層疊現(xiàn)象,間質(zhì)中HOXA10基因表達(dá)缺失,引起不孕,因此推測(cè)Wnt7a可參與胚胎著床[14-19],但其作用機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。基于此,課題組進(jìn)行了補(bǔ)腎活血法調(diào)控Wnt7a/HOXA10改善內(nèi)膜容受性作用機(jī)理的探討,為該法在臨床中的應(yīng)用提供理論研究基礎(chǔ)。
1.1 動(dòng)物50只SPF級(jí)雌性SD大鼠,10~12周齡,體質(zhì)量為(220±20) g;20只SPF級(jí)雄性SD大鼠,8~10周齡,體質(zhì)量為(320±20) g,購買于廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心,動(dòng)物質(zhì)量合格許可證號(hào):SCXK(粵)2008-0020。大鼠飼養(yǎng)在廣州中醫(yī)藥大學(xué)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室,動(dòng)物實(shí)驗(yàn)環(huán)境設(shè)施合格許可證號(hào):SCXK(粵)2008-0001,室內(nèi)保持20~25 ℃,自由飲水、進(jìn)食,采用12 h/12 h 晝夜交替。
1.2 藥物益腎活血丸(廣州中醫(yī)藥大學(xué)第一附屬醫(yī)院院內(nèi)制劑,批準(zhǔn)文號(hào):粵Z20071211);羥基脲片(規(guī)格:每片500 mg,齊魯制藥有限公司,生產(chǎn)批號(hào):H37021289);腎上腺素注射液(規(guī)格:1 mL1 mg,天津金耀氨基酸有限公司,生產(chǎn)批號(hào):H12020526);米非司酮片(規(guī)格:每片10 mg,北京紫竹藥業(yè)有限公司,生產(chǎn)批號(hào):H20010633)。Trizol(美國(guó)Ambion公司,貨號(hào):15596-026);DEPC-treated 水(加拿大Fermentas公司,貨號(hào):R0603);RevertAid First Strand cDNA Synthesis 試劑盒(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司,貨號(hào):K1621);SYBR?Green Realtime PCR Master Mix[東洋紡(上海)生物科技有限公司,貨號(hào):QPK-201];蛋白標(biāo)準(zhǔn)品Marker、二喹啉甲酸(bicinchoninic acid,BCA)蛋白含量檢測(cè)試劑盒、十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺凝膠電泳(sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)凝膠配制試劑盒、蛋白質(zhì)考馬斯亮藍(lán)(R-250)染色檢測(cè)試劑盒、麗春紅染色液、PVDF膜(南京凱基生物科技發(fā)展有限公司,貨號(hào):KGM431、KGPBC、KGP113、KGP1003、KGP105、KGP114);放射性免疫沉淀法分析(radio immunoprecipitation assay,RIPA)裂解液(上海碧云天生物技術(shù)有限公司,貨號(hào):P0013C);化學(xué)發(fā)光試劑(A和B)(美國(guó)Millipore公司,貨號(hào):WBKLS0050);Wnt7a兔抗大鼠一抗、HOXA10兔抗大鼠一抗、通用型WB抗體稀釋液、兔抗大鼠IgG標(biāo)記二抗(北京博奧森生物技術(shù)有限公司,貨號(hào):bs-6645R、bs-2502R、C05-07001、C05-07002);Streptavidin-HRP試劑盒(康為世紀(jì)生物科技股份有限公司,貨號(hào):CW2069S)。
1.3 儀器ABI 3900型高通量DNA合成儀、AB7500型實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀(美國(guó)Applied Biosystems公司);NANO DROP 2000型超微量分光光度計(jì)(美國(guó)Thermo Fisher Scientific公司);9700型PCR擴(kuò)增儀(美國(guó)ABI公司);SW-CJ-1FD型超凈工作臺(tái)(蘇州凈化設(shè)備有限公司);Vortex-Genie 2型漩渦振蕩器(美國(guó)Scientific Industries公司);PB602-N型電子天平(瑞士Mettler-Toledo公司);pHS-2型pH計(jì)(上海分析儀器廠);LKB2127型恒壓恒流電泳儀(瑞典LKB公司);902型超低溫冰箱(美國(guó)Forma公司);PROTRAN Ⅱ型SDS-PAGE垂直電泳槽(美國(guó)Bio-Rad公司);DU800型核酸蛋白質(zhì)分析儀(美國(guó)Beckman公司);TS-2000A型多用脫色搖床(海門市其林貝爾儀器制造有限公司);BioPhotometer PLUS型生物分光光度計(jì)(德國(guó)Eppentoff公司);P70F23P-G5(SO)型微波爐(廣東格蘭仕集團(tuán)有限公司);BS-3000A型顯微鏡(日本OLUMPUS公司)。
2.1 藥物制備益腎活血丸的成人每日用量為 18 g,采用人與動(dòng)物的體表面積計(jì)算法換算,大鼠的用藥等效劑量是1.733 g·kg-1·d-1(人與大鼠的體表面積分別按照許文生氏公式和Meeh-Rubner氏公式計(jì)算,成人與大鼠的平均體質(zhì)量分別按55 kg和220 g計(jì)算)。將益腎活血丸研細(xì)粉溶于蒸餾水中,水浴加熱并攪拌至完全溶解,配成益腎活血丸溶液。米非司酮片研細(xì)粉后溶解于無水乙醇,然后懸浮于食用油溶液,配成米非司酮溶液。
2.2 動(dòng)物分組、造模及給藥SPF級(jí)雌性大鼠隨機(jī)分為正常組、模型組、益腎活血丸組、米非司酮組、米非司酮+益腎活血丸組,每組10只。行陰道涂片觀察雌性大鼠動(dòng)情周期,自動(dòng)情間期開始用藥造模。模型組及益腎活血丸組以450 mg·kg-1·d-1劑量灌胃給予羥基脲,每天1次,每次2 mL,連續(xù)給藥10天;并于第4天開始于大鼠的頭頸部多點(diǎn)皮下注射腎上腺素0.3 mg·kg-1·d-1,每天1次,連續(xù)7 d,復(fù)制腎虛血瘀-子宮內(nèi)膜容受性不良大鼠模型[20]。其余組大鼠首先給予同體積生理鹽水灌胃,每天1次,每次2 mL,共10 d,同樣第4天開始于大鼠頭頸部多點(diǎn)皮下注射等量生理鹽水,每天1次,共7天。第11天開始每晚1800雌雄大鼠11合籠,次晨800發(fā)現(xiàn)陰栓或陰道涂片發(fā)現(xiàn)精蟲者,確定為妊娠第1天。米非司酮組及米非司酮+益腎活血丸組大鼠于妊娠第3天上午900頭頸部多點(diǎn)皮下注射米非司酮溶液5 mg·kg-1,給藥體積 0.5 mL,復(fù)制胚胎著床障礙動(dòng)物模型[21]。其余組大鼠頭頸部多點(diǎn)皮下注射等體積的乙醇油溶劑。自妊娠第1天開始益腎活血丸組及米非司酮+益腎活血丸組大鼠以1.733 g·kg-1·d-1劑量給予益腎活血丸溶液灌胃,其余組給予蒸餾水灌胃,每天1次,每次 2 mL。于妊娠第5天上午900,各組隨機(jī)抽取8只大鼠麻醉后,取子宮組織并立即用無菌錫紙包裹后于-80 ℃冰箱冷凍保存?zhèn)溆谩?/p>
2.3 實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)子宮內(nèi)膜組織中HOXA10mRNA、Wnt7amRNA的水平采用Trizol試劑提取各組大鼠子宮組織的總RNA,取4 μg RNA 采用逆轉(zhuǎn)錄試劑盒轉(zhuǎn)錄為cDNA,實(shí)時(shí)熒光定量PCR儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增。反應(yīng)程序:95 ℃,60 s→PCR循環(huán)(×40循環(huán))→95 ℃,15 s→60 ℃,60 s→溶解曲線分析→70 ℃~95 ℃讀板,每0.25 ℃讀板一次。每個(gè)樣本均進(jìn)行三個(gè)復(fù)孔檢測(cè),根據(jù)PCR反應(yīng)信號(hào)強(qiáng)度的循環(huán)閾值 (threshold cycle,Ct)值進(jìn)行計(jì)算,目的基因相對(duì)表達(dá)量ΔCt=目的基因Ct-GAPDH Ct,每個(gè)樣本的ΔCt值為該樣本三個(gè)復(fù)孔ΔCt的平均值;ΔΔCt=實(shí)驗(yàn)組ΔCt-對(duì)照組ΔCt,本研究對(duì)照組ΔCt為正常組各樣本ΔCt平均值;目的基因的相對(duì)表達(dá)量=2-ΔΔCt。引物序列見表1。
表1 引物序列
2.4 Western Blot檢測(cè)子宮內(nèi)膜組織中HOXA10、Wnt7a的蛋白表達(dá)水平提取各組大鼠子宮組織總蛋白,按照BCA蛋白濃度檢測(cè)試劑盒說明書操作步驟測(cè)定各蛋白濃度,蛋白定量后,上樣進(jìn)行SDS-PAGE電泳,將蛋白轉(zhuǎn)移至PVDF膜上。采用TBS漂洗PVDF膜5 min后放入封閉液中,4 ℃孵育一抗(HOXA10、Wnt7a、GAPDH稀釋比例為1500、1500、11 500),置于搖床上過夜且平緩搖動(dòng)。置于搖床上室溫平緩搖動(dòng)2 h進(jìn)行二抗孵育(稀釋比例12 500),化學(xué)發(fā)光、顯影,定影并拍攝膠片,應(yīng)用凝膠圖像處理系統(tǒng)對(duì)圖片灰度進(jìn)行分析。目的蛋白相對(duì)表達(dá)量為目的蛋白條帶灰度值與內(nèi)參蛋白條帶灰度值的比值。
2.5 免疫組織化學(xué)技術(shù)檢測(cè)子宮內(nèi)膜組織Wnt7a、HOXA10蛋白的表達(dá)載玻片經(jīng)清潔液處理后沖洗干凈,55~60 ℃烤箱烘烤2 h備用。蠟塊制備及切片→石蠟切片常規(guī)脫蠟、水化→抗原修復(fù)→染色→滴加HOXA10或Wnt7a蛋白一抗工作液(1400),封閉室溫下孵育1 h后4 ℃過夜→加入適量的生物素標(biāo)記羊抗兔二抗工作液,在室溫下孵育10 min后采用PBS淋洗充分,滴加HRP標(biāo)記的鏈霉親和素,室溫下孵育10 min后PBS淋洗,加入100 μL現(xiàn)配的DAB顯色溶液,顯色3~5 min,蘇木精復(fù)染1~3 min,自來水沖洗并分色(1%鹽酸酒精),脫蠟、透明(75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、無水乙醇梯度浸泡)、脫水干燥片,二甲苯透明后進(jìn)行干燥,應(yīng)用中性樹膠封片。顯微鏡下進(jìn)行觀察并采用北航病理圖像分析軟件Med 6.0進(jìn)行圖像分析,選取陽性單位(positive unit,PU)值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。
3.1 益腎活血丸對(duì)各組大鼠子宮內(nèi)膜組織Wnt7amRNA、HOXA10mRNA表達(dá)的影響與正常組比較,模型組、米非司酮組大鼠子宮內(nèi)膜Wnt7amRNA、HOXA10mRNA的表達(dá)量均顯著下降(P<0.05)。與模型組比較,益腎活血丸組大鼠子宮內(nèi)膜Wnt7amRNA、HOXA10mRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05);米非司酮+益腎活血丸組大鼠子宮內(nèi)膜組織Wnt7amRNA表達(dá)量顯著升高(P<0.05)。見表2。
表2 益腎活血丸對(duì)各組大鼠子宮內(nèi)膜組織Wnt7a mRNA、HOXA10 mRNA表達(dá)的影響
3.2 益腎活血丸對(duì)各組大鼠子宮內(nèi)膜組織Wnt7a、HOXA10蛋白表達(dá)的影響與正常組比較,模型組、米非司酮組大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10、Wnt7a蛋白表達(dá)量顯著下降(P<0.05);與模型組比較,益腎活血丸組及米非司酮+益腎活血丸組大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10、Wnt7a蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.05);與米非司酮組比較,益腎活血丸組大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10、Wnt7a蛋白表達(dá)量顯著升高(P<0.05),而米非司酮+益腎活血丸組大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10、Wnt7a蛋白表達(dá)量有升高趨勢(shì),但無顯著差異(P>0.05)。見表3,圖1。
表3 益腎活血丸對(duì)各組大鼠子宮內(nèi)膜組織Wnt7a、HOXA10蛋白表達(dá)的影響
注:A:模型組;B:米非司酮組;C:益腎活血丸組;D:米非司酮+益腎活血丸組;E:正常組
3.3 益腎活血丸對(duì)各組大鼠子宮內(nèi)膜Wnt7a、HOXA10分布情況的影響著床期HOXA10在子宮內(nèi)膜腺體與間質(zhì)中表達(dá)豐富,以間質(zhì)為主,主要表現(xiàn)為細(xì)胞胞漿著色,部分胞核也有著色,以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性;Wnt7a在子宮內(nèi)膜腔上皮與腺體表達(dá),間質(zhì)幾乎沒有表達(dá),主要表現(xiàn)為細(xì)胞胞漿著色,胞核幾乎無著色,以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。正常組大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10與Wnt7a表達(dá)豐富。與正常組比較,模型組與米非司酮組大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10、Wnt7a蛋白陽性表達(dá)量明顯減少,PU值顯著下降(P<0.05)。與模型組比較,益腎活血丸組大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10、Wnt7a蛋白陽性表達(dá)量明顯增多,PU值明顯升高(P<0.05);米非司酮+益腎活血丸組大鼠子宮內(nèi)膜組織中HOXA10蛋白陽性表達(dá)增多,PU值明顯升高(P<0.05)。與米非司酮組比較,米非司酮+益腎活血丸組大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10與Wnt7a蛋白陽性表達(dá)量增多,PU值升高,但差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。見表4,圖2-圖3。
表4 各組大鼠免疫組化陽性目標(biāo)PU值
圖2 免疫組化檢測(cè)各組大鼠HOXA10的蛋白表達(dá)水平(×400)
圖3 免疫組化檢測(cè)各組大鼠Wnt7a的蛋白表達(dá)水平(×400)
3.4 子宮內(nèi)膜HOXA10與Wnt7a表達(dá)的相關(guān)性分析相關(guān)性分析結(jié)果顯示:子宮內(nèi)膜HOXA10mRNA與Wnt7amRNA之間呈高度正相關(guān)(r=0.885,P=0.000<0.01);HOXA10蛋白與Wnt7a蛋白表達(dá)呈正相關(guān)關(guān)系(r=0.883,P=0.000<0.01);HOXA10與Wnt7a蛋白陽性目標(biāo)PU值呈高度正相關(guān)關(guān)系(r=0.841,P=0.000<0.01)。見圖4-圖6。
圖4 HOXA10 mRNA與Wnt7a mRNA相對(duì)表達(dá)量的相關(guān)性分析
圖5 HOXA10與Wnt7a 蛋白相對(duì)灰度值相關(guān)性分析
圖6 HOXA10與Wnt7a 陽性目標(biāo)PU值相關(guān)性分析
子宮內(nèi)膜的發(fā)育依賴精血的充養(yǎng),正如《傅青主女科》云:“ 精滿則子宮易于攝精,血足則子宮易于容物”。腎為先天之本,元?dú)庵鞑鼐珰?,既藏先天之精,又藏后天水谷之精,為生殖發(fā)育之本源,能系胎載胎,固攝胎元。精血同源,《諸病源候論》曰:“腎藏精,精者,血之所成也”;《馮氏錦囊秘錄》云:“氣之根,腎中之真陽也;血之根,腎中之真陰也”,可見腎精是子宮內(nèi)膜生長(zhǎng)發(fā)育及發(fā)揮功能的物質(zhì)基礎(chǔ),在生殖中發(fā)揮著主導(dǎo)作用。臨證中亦發(fā)現(xiàn),子宮內(nèi)膜容受性不良患者以腎虛為多見,根據(jù)中醫(yī)腎主生殖及女子以血為本的理論,無論腎氣虛、腎陰虛、腎陽虛均可導(dǎo)致血行不暢而致血瘀,影響內(nèi)膜容受性,故認(rèn)為腎虛血瘀是子宮內(nèi)膜容受性不良患者的主要病理特征,因此,在臨床中應(yīng)采用補(bǔ)腎活血中藥進(jìn)行治療。益腎活血丸由枸杞子、益智仁、菟絲子、熟地黃、女貞子、金櫻子、桃仁、當(dāng)歸、茺蔚子、甘草組成,運(yùn)用補(bǔ)腎填精、滋陰生血之品促進(jìn)精血生成,充養(yǎng)內(nèi)膜,促進(jìn)內(nèi)膜發(fā)育,氣形生成;采用活血化瘀藥物改善胞宮微循環(huán),促進(jìn)血管分化,氣血充足。氣血充足,氣形生長(zhǎng),方能形成有能力接受胚胎的子宮內(nèi)膜。
每個(gè)月經(jīng)周期僅在短暫的特殊時(shí)期子宮內(nèi)膜具備允許胚胎植入的能力,在這特定窗口期前后,子宮內(nèi)膜對(duì)胚胎處于不容受階段。在子宮內(nèi)膜容受這一變化過程中,類生長(zhǎng)因子、細(xì)胞因子、黏附分子及蛋白等因素共同構(gòu)成了胚胎植入的分子基礎(chǔ)[22-24],這其中任何一個(gè)或幾個(gè)因素表達(dá)異常,都有可能引起子宮內(nèi)膜微環(huán)境發(fā)生改變,影響內(nèi)膜容受性,從而導(dǎo)致胚胎著床失敗、不孕等。
著床窗口期子宮內(nèi)膜HOXA10的表達(dá)可作為評(píng)價(jià)內(nèi)膜容受性的指標(biāo)。HOXA10基因是一種同源框轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子,主要在子宮內(nèi)膜上的腺細(xì)胞和基質(zhì)細(xì)胞中表達(dá),隨著月經(jīng)周期的變化呈周期性變化,在分泌中期、晚期的表達(dá)較增殖早期、晚期的表達(dá)明顯升高,且其在子宮內(nèi)膜基質(zhì)細(xì)胞的表達(dá)較腺細(xì)胞升高,是胚胎著床和子宮內(nèi)膜蛻膜化必不可少的基因。HOXA10基因主要通過與下游靶基因DNA結(jié)合激活或抑制目的基因而發(fā)揮作用,缺失HOXA10的小鼠正常排卵,但胚胎不能成功著床;缺失HOXA10的胚胎可在正常小鼠子宮內(nèi)成功著床,而正常小鼠的胚胎在缺失HOXA10小鼠的子宮內(nèi)膜上著床失?。蛔钄嘈∈驢OXA10的表達(dá)引起著床障礙[25]。由此可見,HOXA10參與胚胎著床,與子宮內(nèi)膜容受性關(guān)系密切,而與胚胎發(fā)育無關(guān)。研究表明,多囊卵巢綜合征、子宮腺肌癥及子宮內(nèi)膜息肉等不孕癥相關(guān)疾病患者子宮內(nèi)膜中HOXA10基因的表達(dá)均明顯低于正常人[26-28]。HOXA10基因通過調(diào)控靶基因LIF、EMX2、αvβ3 、IGFBP-1、FKBP52、PCAF、Calpain5等影響子宮內(nèi)膜容受性[29-37]。可見,HOXA10基因是調(diào)控子宮內(nèi)膜容受性、維持正常妊娠的關(guān)鍵基因。以HOXA10為切入點(diǎn)研究子宮內(nèi)膜容受性的機(jī)制已成為生殖界的熱點(diǎn)。本研究發(fā)現(xiàn),HOXA10在著床期子宮內(nèi)膜腺體與間質(zhì)中均表達(dá)豐富,以間質(zhì)為主;在子宮內(nèi)膜容受性不良模型大鼠子宮內(nèi)膜表達(dá)顯著降低,益腎活血丸能明顯提高腎虛血瘀子宮內(nèi)膜容受性不良模型大鼠子宮內(nèi)膜HOXA10的表達(dá)。推測(cè)益腎活血丸通過調(diào)控子宮內(nèi)膜HOXA10的表達(dá)改善子宮內(nèi)膜容受性。
同樣,著床窗口期子宮內(nèi)膜Wnt7a的表達(dá)亦可作為評(píng)價(jià)內(nèi)膜容受性的指標(biāo)。Wnt信號(hào)傳導(dǎo)途徑是調(diào)控細(xì)胞生長(zhǎng)、發(fā)育和分化的關(guān)鍵途徑,是一個(gè)多環(huán)節(jié)、多作用位點(diǎn)的生長(zhǎng)發(fā)育調(diào)控信號(hào)通路,在動(dòng)物胚胎發(fā)育和腫瘤發(fā)生中起著重要作用。Wnt家族中的Wnt7a在子宮內(nèi)膜的表達(dá)隨著月經(jīng)周期呈現(xiàn)周期性變化,分泌期呈現(xiàn)高表達(dá)[14]。Wnt7a在子宮內(nèi)膜中特征性表達(dá)及在種植窗口期的高表達(dá),提示W(wǎng)nt7a可能在胚胎著床中發(fā)揮重要作用。研究表明,Wnt7a可通過經(jīng)典的β-catenin途徑調(diào)控子宮內(nèi)膜容受性,Wnt7a基因敲除小鼠子宮內(nèi)膜無腺體生成,內(nèi)膜上皮呈現(xiàn)層疊現(xiàn)象,內(nèi)膜間質(zhì)中HOXA10基因表達(dá)缺失,最終導(dǎo)致不孕[15-16]。本研究發(fā)現(xiàn),Wnt7a在著床期子宮內(nèi)膜腔上皮與腺體表達(dá)豐富,間質(zhì)幾乎沒有表達(dá);在子宮內(nèi)膜容受性不良模型大鼠子宮內(nèi)膜表達(dá)顯著降低,益腎活血丸能明顯提高腎虛血瘀子宮內(nèi)膜容受性不良大鼠模型子宮內(nèi)膜Wnt7a的表達(dá)。推測(cè)益腎活血丸通過升高子宮內(nèi)膜Wnt7a的表達(dá)改善子宮內(nèi)膜容受性。此外,本研究還發(fā)現(xiàn)Wnt7a和HOXA10在著床期子宮內(nèi)膜的表達(dá)呈高度正相關(guān),結(jié)合后文獻(xiàn)研究推測(cè),益腎活血丸通過升高子宮內(nèi)膜Wnt7a的表達(dá),促進(jìn)HOXA10的表達(dá),進(jìn)而改善子宮內(nèi)膜容受性。
綜上,益腎活血丸能升高子宮內(nèi)膜容受性不良大鼠子宮內(nèi)膜Wnt7a、HOXA10的表達(dá),提高子宮內(nèi)膜容受性,療效確切,本研究為補(bǔ)腎活血法在臨床中的應(yīng)用提供實(shí)驗(yàn)研究基礎(chǔ)。