陳玉藍(lán)，林正全，拓陽(yáng)陽(yáng)，丁亞茹，李紅麗，王 巖

(1.四川省煙草公司涼山州公司，四川 西昌 615000；2.四川省煙草公司涼山州公司寧南分公司，四川 寧南 615400；3.四川省煙草公司涼山州公司德昌分公司，四川 德昌 615500；4.鄭州大學(xué)生態(tài)與環(huán)境學(xué)院，鄭州 450001)

【研究意義】煙草作為重要的經(jīng)濟(jì)作物，是涼山州的支柱產(chǎn)業(yè)，但是連續(xù)耕作使得土傳病害越來(lái)越嚴(yán)重[1]。土傳病害流行是土壤微生物群落結(jié)構(gòu)失衡和惡化的結(jié)果，煙草黑脛病、根黑腐病等都是煙田典型的真菌型土傳病害。土壤真菌是土壤中的分解者，能夠分解土壤中的有機(jī)物，為植物提供養(yǎng)分，尤其是土壤中植物殘?bào)w的降解，是土壤生態(tài)系統(tǒng)是否健康的指示物[2]。目前對(duì)于土傳病害的防治措施主要有物理、化學(xué)和生物三大類，相對(duì)于物理、化學(xué)方法，生物法更安全有效。通過(guò)施入抗病微生物等措施可以有效改善土壤微生物結(jié)構(gòu)，提高土壤自身的抗病作用，如假單胞菌、芽孢桿菌、鏈霉菌、青霉屬、曲霉屬和木霉屬等有促進(jìn)作物生長(zhǎng)和拮抗病原菌的功能[3]，也可以通過(guò)農(nóng)業(yè)措施改善土壤微生物群落結(jié)構(gòu)，最常用、效果最好的是輪作。輪作模式的差異可改變土壤微生物的生存環(huán)境，進(jìn)而改變土壤環(huán)境中微生物的群落結(jié)構(gòu)和活性[4]。【前人研究進(jìn)展】李星月等[5]研究連作栽培對(duì)草莓根際土壤真菌的影響表明，非連作土壤真菌群落豐度和多樣性明顯高于連作土壤，連作土壤有益真菌減低、病原真菌顯著增多。Mao等[6]研究表明連作條件下玉米的生物量和產(chǎn)量會(huì)由于土壤微生物的負(fù)反饋而降低；Hu等[7]和Liu等[8]研究連作大豆土壤表明減弱了根際土壤真菌群落結(jié)構(gòu)，加強(qiáng)了潛在病原真菌的生長(zhǎng)，導(dǎo)致土壤功能退化。輪作具有增強(qiáng)土壤生態(tài)系統(tǒng)功能的潛力，對(duì)維持農(nóng)業(yè)系統(tǒng)中土壤健康功能至關(guān)重要。涂勇等[9]研究發(fā)現(xiàn)大豆與烤煙套作顯著增加細(xì)菌和放線菌的數(shù)量，降低烤煙土傳病害的發(fā)生，且病害的發(fā)生與根際土壤細(xì)菌和放線菌的數(shù)量顯著負(fù)相關(guān)，與真菌數(shù)量極顯著正相關(guān)。陽(yáng)祥等[10]研究不同輪作模式的土壤真菌群落發(fā)現(xiàn)水旱輪作可提高土壤真菌群落的多樣性。靳海洋等[11]研究小麥與不同作物多樣化輪作對(duì)土壤真菌群落的影響，結(jié)果表明夏花生或夏大豆替代夏玉米進(jìn)行不同周期輪作，可增加土壤真菌群落豐富度和多樣性，顯著影響土壤真菌群落結(jié)構(gòu)，大豆茬口利于有益真菌的富集。因此，更多樣化的輪作增加了土壤微生物群落代謝多樣性和活性，增加作物產(chǎn)量[12]?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】目前的研究大多只檢測(cè)了實(shí)驗(yàn)室可培養(yǎng)微生物，沒(méi)有檢測(cè)土壤微生物群落結(jié)構(gòu)，對(duì)于煙蒜輪作或套作土壤的微生物群落結(jié)構(gòu)研究也較少，特別是針對(duì)土壤真菌型土傳病害的防治方面研究更少。【擬解決的關(guān)鍵問(wèn)題】本研究利用高通量測(cè)序技術(shù)，分析健康煙田和煙蒜輪作土壤真菌的群落結(jié)構(gòu)，以及種植大蒜對(duì)后期煙草生長(zhǎng)根際土壤真菌群落結(jié)構(gòu)和多樣性的影響，探討健康煙田土壤真菌的群落結(jié)構(gòu)特點(diǎn)以及大蒜對(duì)煙株根際土壤真菌的影響，為尋找煙草真菌型土傳病害有效的生物防治措施提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 煙田概況與取樣

試驗(yàn)田為四川涼山州德昌縣鳳凰煙站(102°11′17″E，27°25′40″N，海拔1560 m)。健康煙田(往年平均發(fā)病率5%)編號(hào)為2_1，種煙前空閑，移栽前土壤有機(jī)質(zhì)30.04 g/kg，全氮1.62 g/kg，堿解氮143.50 mg/kg，有效磷88.09 mg/kg，速效鉀147.21 mg/kg，pH 5.5。易感病煙田(往年平均發(fā)病率為50%)編號(hào)為2_2，主要是黑脛病及根腐病混合發(fā)病，前茬種植大蒜，移栽前土壤有機(jī)質(zhì)33.11 g/kg，全氮2.16 g/kg，堿解氮163.10 mg/kg，有效磷272.95 mg/kg，速效鉀495.17 mg/kg，pH 5.2。分別于煙草移栽前、旺長(zhǎng)期和成熟期采土樣，按5點(diǎn)取樣法，移栽前取5～30 cm土壤，旺長(zhǎng)期和成熟期取根際土壤，將土壤混勻取約1 kg，每個(gè)試驗(yàn)田取3個(gè)平行樣，分別編號(hào)。每個(gè)土樣的部分土壤風(fēng)干過(guò)篩用于土壤理化性狀及酶活的測(cè)定，部分土壤裝離心管-20 ℃冷凍保存，委托上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司進(jìn)行18S rRNA基因測(cè)序和分析。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 土壤理化性質(zhì)測(cè)定方法 按照土壤理化分析方法[13]檢測(cè)pH、含水率(Moisture content)、有機(jī)質(zhì)(Organic matter)、全氮(Total nitrogen)和土壤養(yǎng)分。

1.2.2 土壤微生物DNA提取及基因測(cè)序 根據(jù)陳乾錦等[14]研究的DNA提取和測(cè)序方法進(jìn)行18S rRNA基因測(cè)序。

1.3 數(shù)據(jù)處理

實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用SPSS 22軟件進(jìn)行方差分析?；驕y(cè)序結(jié)果利用上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司I-Sanger云平臺(tái)進(jìn)行分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 根際土壤真菌多樣性

Sobs指數(shù)顯示，移栽前健康和易感病煙田樣本呈極顯著性差異(圖1-a)，健康煙田在移栽前和成熟期之間有顯著性差異。從香農(nóng)(Shannon)指數(shù)差異分析(圖1-b)可以看出，移栽前健康和易感病煙田之間有極顯著差異。Ace指數(shù)顯示，健康煙田在移栽前和成熟期之間有顯著差異(圖1-c)。Alpha多樣性差異分析顯示，在移栽前健康和易感病之間有顯著性差異，說(shuō)明不同前茬對(duì)健康和易感病煙田真菌影響較大；健康煙田在移栽前和成熟期之間有顯著性差異，說(shuō)明煙草生長(zhǎng)對(duì)健康煙田真菌影響較大。

Y2_1和Y2_2為移栽前健康和易感病煙田樣本，W2_1和W2_2為旺長(zhǎng)期健康和易感病煙田樣本，C2_1和C2_2為成熟期健康和易感病煙田樣本，*表示0.01

2.2 土壤真菌群落結(jié)構(gòu)

如圖2所示，在門(mén)水平上(圖2-a)，子囊菌門(mén)(Ascomycota)、擔(dān)子菌門(mén)(Basidiomycota)、norank_k__Fungi、unclassified_k__Fungi、纖毛門(mén)(Ciliophora)和壺菌門(mén)(Chytridiomycota)6個(gè)菌門(mén)的相對(duì)豐度超過(guò)1%，占總菌數(shù)的98%以上。相對(duì)豐度含量高于5%的優(yōu)勢(shì)菌門(mén)有子囊菌門(mén)、擔(dān)子菌門(mén)和norank_k__Fungi，總含量在90.80%～94.59%，移栽前和成熟期健康煙田低于易感病煙田，旺長(zhǎng)期健康煙田稍高于易感病煙田。子囊菌門(mén)都是健康煙田低于易感病煙田，特別是移栽前，移栽前的易感病煙田相對(duì)豐度最高，其它時(shí)期則是隨著煙草的生長(zhǎng)都逐漸增加。擔(dān)子菌門(mén)在移栽前健康煙田稍高于易感病煙田，旺長(zhǎng)期健康煙田稍低，到成熟期二者趨于一致，即種上煙草后擔(dān)子菌門(mén)減少，健康煙田到成熟期又增加。norank_k__Fungi則在各個(gè)時(shí)期都是健康煙田顯著高于易感病煙田，在此菌門(mén)中可能含有抑制真菌性土傳病害發(fā)生的菌種，即健康煙田特有的菌種。

在綱水平上，相對(duì)含量大于1%的有13種(圖2-b)，占總菌數(shù)的98%以上，其中健康煙田相對(duì)豐度高于易感病煙田的優(yōu)勢(shì)菌綱是散囊菌綱(Eurotiomycetes)和座囊菌綱(Dothideomycetes)，健康煙田顯著低于易感病煙田的是子囊菌綱(Sordariomycetes)。在目水平上(圖2-c)，有18種菌相對(duì)含量高于1%，占總菌數(shù)的95%以上，含量在前5的菌是糞殼菌目(Sordariales)、肉座菌目(Hypocreales)、散囊菌目(Eurotiales)、銀耳目(Tremellales)和腔菌目(Pleosporales)，其中易感病煙田相對(duì)含量比健康煙田高的有糞殼菌目和 肉座菌目，都屬于子囊菌門(mén)，健康煙田相對(duì)豐度顯著高于易感病煙田的有散囊菌目和腔菌目，也都是子囊菌門(mén)。在科水平上(圖2-d)，有25種菌含量大于1%，占總菌數(shù)的94%以上，前5種菌為norank_o__Sordariales、發(fā)菌科(Trichocomaceae)、叢赤殼科(Nectriaceae)、norank_o__Hypocreales和norank_o__Tremellales，其中易感病煙田相對(duì)豐度高于健康煙田的有norank_o__Sordariales、叢赤殼科、norank_o__Hypocreales，低于健康煙田的是發(fā)菌科。在屬水平上(圖2-e)，有27種真菌相對(duì)豐度大于1%，占總菌數(shù)的93%以上，前5種菌屬為norank_o__Sordariales、unclassified_f__Trichocomaceae、鐮刀菌屬(Fusarium)、norank_o__Hypocreales、norank_o__Tremellales，前4種屬于子囊菌門(mén)，最后一個(gè)為擔(dān)子菌門(mén)。其中norank_o__Sordariales和Fusarium在易感病煙田顯著高于健康煙田土壤，在種上煙后都稍有增加，unclassified_f__Trichocomaceae則在健康煙田顯著高于易感病煙田，norank_o__Hypocreales在移栽前和旺長(zhǎng)期都是易感病煙田高于健康煙田，到成熟期二者相差不大，norank_o__Tremellales在健康煙田和易感病煙田幾乎一樣。

圖2 不同煙田不同時(shí)期根際土壤真菌在各個(gè)水平上的群落結(jié)構(gòu)

2.3 土壤真菌群落結(jié)構(gòu)Beta多樣性分析和差異分析

從圖3可以看出，健康煙田和易感病煙田樣本之間在橫坐標(biāo)上具有差異性，不同生長(zhǎng)期之間在縱坐標(biāo)上有差異性，移栽前和旺長(zhǎng)期相距稍近，差異較小，與成熟期之間相距較遠(yuǎn)，差異較大。

圖3 土壤樣本真菌在OTU水平上的主成分分析

健康和易感病煙田土壤真菌群落存在差異，具體分析3個(gè)時(shí)期前15種土壤真菌在門(mén)和屬水平上的差異菌種(圖4)。移栽前，優(yōu)勢(shì)菌門(mén)中子囊菌門(mén)(Ascomycota)、unclassified_k__Fungi、壺菌門(mén)(Chytridiomycota)、纖毛門(mén)(Ciliophora)具有極顯著差異，子囊菌門(mén)和纖毛門(mén)在易感病煙田相對(duì)豐度極顯著高于健康煙田，unclassified_k__Fungi和壺菌門(mén)在健康煙田相對(duì)豐度顯著高于易感病煙田，norank_k__Fungi在健康煙田相對(duì)豐度顯著高于易感病煙田(圖4-a)。優(yōu)勢(shì)菌屬中noranke_o__Sordariales、unclassified_f__Trichocomaceae、Fusarium具有極顯著差異，unclassified_f__Trichocomaceae在健康煙田極顯著高于易感病煙田，其余2種在易感病煙田極顯著高于健康煙田(圖4-b)。說(shuō)明種植大蒜的易感病煙田土壤有益菌增長(zhǎng)，且與健康煙田土壤差異顯著。旺長(zhǎng)期，優(yōu)勢(shì)真菌門(mén)在健康和易感病煙田之間沒(méi)有顯著差異菌種(圖4-c)；優(yōu)勢(shì)菌屬norank_o__Hypocreales具有極顯著差異(圖4-d)，F(xiàn)usarium具有顯著差異，這些菌都是易感病煙田土壤高于健康煙田土壤。成熟期，優(yōu)勢(shì)菌門(mén)中norank_k__Fungi、unclassified_k__Fungi、Chytridiomycota具有顯著差異，且都是健康煙田顯著高于非健康煙田(圖4-e)。優(yōu)勢(shì)菌屬中norank_o__Sordariales、Fusarium具有極顯著差異，且都是在易感病煙田極顯著高于健康煙田(圖4-f)。Fusarium是根腐病的病原菌，在煙株生長(zhǎng)過(guò)程中逐漸增多，健康煙田增加的較慢，移栽前都是最少，說(shuō)明種植大蒜后的易感病煙田土壤根腐病病原菌的數(shù)量減少。

a：移栽前門(mén)水平；b：移栽前屬水平；c：旺長(zhǎng)期門(mén)水平；d：旺長(zhǎng)期屬水平；e：成熟期門(mén)水平；f：旺長(zhǎng)期屬水平

2.4 土壤真菌群落結(jié)構(gòu)與土壤理化性質(zhì)和酶活的相關(guān)性

2.4.1 土壤理化性質(zhì)和酶活 由表1可以看出，易感病煙田土壤所有理化性質(zhì)，特別是整個(gè)時(shí)期的速效磷和移栽前的速效鉀都顯著高于健康煙田；除了移栽前的pH健康煙田顯著高于易感病煙田，旺長(zhǎng)期和成熟期的pH都是健康煙田稍高，但沒(méi)有顯著性。

表1 不同時(shí)期土壤養(yǎng)分和pH變化

如表2所示，移栽前，健康煙田蛋白酶、蔗糖酶活高于易感病煙田，其余酶活為易感病煙田較高，蛋白酶、脲酶活在健康與易感病煙田之間有顯著性差異。旺長(zhǎng)期，易感病煙田脲酶活顯著高于健康煙田，其余酶活都是健康煙田較高，蛋白酶、蔗糖酶、脲酶活在健康與易感病煙田之間有顯著性差異。成熟期，健康煙田土壤的過(guò)氧化氫酶、蛋白酶活高于易感病煙田，其余酶活性都是易感病煙田高于健康煙田，除了過(guò)氧化氫酶，其余酶活在健康與易感病煙田之間都有顯著性差異。從移栽前到成熟期有顯著性差異的酶活逐漸增多，說(shuō)明種植大蒜后減少了健康與易感病煙田之間的差距。整個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期，健康煙田的蛋白酶活一直顯著高于易感病煙田，脲酶活則一直是易感病煙田顯著高于健康煙田，蔗糖酶活在移栽前沒(méi)有顯著性差異，到旺長(zhǎng)期開(kāi)始有顯著性差異，在整個(gè)生長(zhǎng)期逐漸降低，酸性磷酸酶活則是到成熟期才有顯著性差異，在整個(gè)上漲時(shí)期先升高又降低。過(guò)氧化氫酶活在移栽前是易感病煙田稍高，從旺長(zhǎng)期開(kāi)始健康煙田稍高，但都不呈顯著差異。

表2 不同生長(zhǎng)時(shí)期煙田土壤酶活性變化

2.4.2 相關(guān)性分析 由圖5可以看出，酶活與真菌的相關(guān)性中，ACP只與norank_o__Sordariales呈顯著正相關(guān)；CAT與norank_p__Ascomycota呈顯著正相關(guān)，與norank_o___Sordariales、unclassified_p__Ascomycota呈顯著負(fù)相關(guān)，其余因子都與真菌屬呈極顯著相關(guān)，對(duì)真菌的群落結(jié)構(gòu)影響較大，特別是優(yōu)勢(shì)菌屬。PR與unclassified_o__Pleosporales呈極顯著正相關(guān)，與unclassified_f__Trichocomaceae、noran_k__Fungi呈顯著正相關(guān)，與norank_o__Sordariales、假霉樣真菌屬(Pseudallescheria)呈極顯著負(fù)相關(guān)，與枝孢屬(Cladosporium)、unclassified_o__Sordariales呈顯著負(fù)相關(guān)；URE與norank_o__Hypocreales、Fusarium呈極顯著正相關(guān)，與unclassified_o__Sordariales、unclassified_k__Fungi、枝孢屬呈極顯著負(fù)相關(guān)，與unclassified_c__Sordariomycetes呈顯著負(fù)相關(guān)；INV與枝孢屬、unclassified_c__Sordariomycetes呈極顯著正相關(guān)，與unclassified_p__Ascomycota、unclassified_o__Sordariales呈顯著正相關(guān)，與unclassified_o__Pleosporales、norank_o__Hypocreales、unclassified_f__Nectriaceae呈顯著負(fù)相關(guān)。而理化性質(zhì)與真菌都呈極顯著相關(guān)，對(duì)優(yōu)勢(shì)真菌屬影響較大，pH與unclassified_f__Trichocomaceae、noran_k__Fungi、unclassified_k__Fungi呈極顯著正相關(guān)，與unclassified_o__Sordariales呈顯著正相關(guān)，與鐮刀菌屬(Fusarium)、假霉樣真菌屬、norank_o__Sordariales呈極顯著負(fù)相關(guān)；OM與unclassified_c__Sordariomycetes、枝孢屬、假霉樣真菌屬呈極顯著正相關(guān)，與norank_o__Sordariales呈顯著正相關(guān)，與unclassified_o__Pleosporales呈極顯著負(fù)相關(guān)，與norank_o__Hypocreales、unclassified_f__Nectriaceae呈顯著負(fù)相關(guān)；TN與norank_o__Sordariales、假霉樣真菌屬呈極顯著正相關(guān)，與unclassified_c__Sordariomycetes、鐮刀菌屬呈顯著正相關(guān)，與unclassified_f__Trichocomaceae、noran_k__Fungi呈極顯著負(fù)相關(guān)，與unclassified_o__Pleosporales呈顯著負(fù)相關(guān)；AN與unclassified_c__Sordariomycetes、枝孢屬、假霉樣真菌屬呈極顯著正相關(guān)，與unclassified_o__Pleosporales呈極顯著負(fù)相關(guān)，與norank_o__Hypocreales、unclassified_f__Nectriaceae呈顯著負(fù)相關(guān)；AK與鐮刀菌屬呈極顯著正相關(guān)，與norank_o__Sordariales、假霉樣真菌屬呈顯著正相關(guān)，與unclassified_f__Trichocomaceae、

圖5 真菌屬水平上的群落結(jié)構(gòu)與土壤酶活和理化性質(zhì)的相關(guān)性分析

noran_k__Fungi、unclassified_k__Fungi、unclassified_o__Sordariales呈極顯著負(fù)相關(guān)；AP與norank_o__Sordariales、假霉樣真菌屬呈極顯著正相關(guān)，與unclassified_c__Sordariomycetes呈顯著正相關(guān)，與unclassified_f__Trichocomaceae、noran_k__Fungi、unclassified_o__Pleosporales呈顯著負(fù)相關(guān)。

相對(duì)豐度前5的優(yōu)勢(shì)菌屬中，norank_o_Sordariales與TN、AP呈極顯著正相關(guān)，與OM、AK、ACP呈顯著正相關(guān)，與pH、PR呈極顯著負(fù)相關(guān)，與CAT呈顯著負(fù)相關(guān)，unclassified_f__Trichocomaceae與pH呈極顯著正相關(guān)，與PR呈顯著正相關(guān)，與AK、TN呈極顯著負(fù)相關(guān)，與AP呈顯著負(fù)相關(guān)，含有病原菌的Fusarium與AK、URE呈極顯著正相關(guān)，與TN呈顯著正相關(guān)，與pH呈極顯著負(fù)相關(guān)，該菌屬與氮素和氮素轉(zhuǎn)化的脲酶呈顯著正相關(guān)，與酸堿性呈極顯著負(fù)相關(guān)，煙田酸化利于該菌屬的生長(zhǎng)繁殖，norank_o__Hypocreales與URE呈極顯著正相關(guān)，與OM、AN、INV呈顯著負(fù)相關(guān)，norank_o__Tremellales沒(méi)有相關(guān)性的環(huán)境因子。

2.5 煙田發(fā)病率

如表3所示，調(diào)查前一年和調(diào)查當(dāng)年健康煙田發(fā)病率均較低，而易感病煙田在調(diào)查前一年發(fā)病率較高為50.1%，種植大蒜后，發(fā)病率降為8.5%，說(shuō)明種植大蒜可一定程度上降低煙田發(fā)病率，主要是種植大蒜改變了土壤的微生物群落結(jié)構(gòu)和微環(huán)境，如前分析，種植大蒜增加了有益菌，降低了病原菌，改善了土壤環(huán)境因子，進(jìn)而降低了煙株的發(fā)病率。

表3 煙田黑根腐病發(fā)病情況

3 討 論

土傳病害病原菌也是土壤微生物群落的組成部分，健康土壤微生物群落一方面可抑制植物病原菌過(guò)度地繁殖，另一方面可產(chǎn)生誘導(dǎo)物質(zhì)誘導(dǎo)植物產(chǎn)生并積累大量次生抗病物質(zhì)，提高作物的抗病性[15]。易感病土壤微生物群落失衡，某些種類微生物大量繁殖，使土壤微生物多樣性降低，而土壤微生物多樣性對(duì)維持生態(tài)系統(tǒng)平衡具有重要作用。隨著高通量測(cè)序技術(shù)的發(fā)展，大規(guī)模的土壤微生物基因直接測(cè)序得以實(shí)現(xiàn)，有助于研究土壤微生物的豐富度和多樣性，為有效防控土傳病害提供理論依據(jù)[16]。

本研究發(fā)現(xiàn)土壤真菌的總數(shù)和多樣性有顯著差異，在移栽前健康煙田和易感病煙田樣本之間的總數(shù)和多樣性均有極顯著差異，前茬對(duì)土壤真菌的多樣性影響較大，易感病煙田土壤移栽前多樣性最高，種上煙后逐漸降低，而健康煙田經(jīng)過(guò)空閑后多樣性是2塊煙田整個(gè)生長(zhǎng)期最高的，種上煙后先降低后又增加，說(shuō)明健康煙田可以自行調(diào)節(jié)土壤真菌，使多樣性逐漸恢復(fù)，這與張笑宇等[17]研究相似；而易感病煙田通過(guò)種植大蒜使土壤真菌的多樣性得到一定的提高[18-19]，改善了土壤真菌群落結(jié)構(gòu)，趨于健康煙田，但種植大蒜沒(méi)有提高土壤真菌總數(shù)，這與陽(yáng)顯斌等[20]的研究結(jié)果一致。

優(yōu)勢(shì)菌門(mén)在移栽前和成熟期健康煙田低于易感病煙田。散囊菌綱在移栽前和旺長(zhǎng)期的健康煙田相對(duì)豐度顯著高于易感病煙田，子囊菌綱則正好相反；與成熟期相比，移栽前土壤，易感病煙田種植大蒜的土壤中散囊菌綱相對(duì)豐度降低，座囊菌綱增加，與禚其翠[21]的研究結(jié)果一致。優(yōu)勢(shì)菌屬的鐮刀菌屬在整個(gè)生長(zhǎng)時(shí)期都是易感病煙田高，且差異顯著，但移栽前比旺長(zhǎng)期和成熟期低，該菌屬為煙草根腐病的病原菌，所以前茬種植大蒜減少了病原菌的數(shù)量，非優(yōu)勢(shì)真菌屬的枝孢屬、假霉樣真菌屬則顯著增加，枝孢屬主要是腐生菌，可分解植物殘?bào)w。種植大蒜改變了土壤中真菌群落的組成比例，提高了有益真菌的比例，而降低了有害菌。這與張慧等[22]研究結(jié)果相似。

健康煙田和易感病煙田土壤真菌之間有顯著差異。移栽前由于前茬作物不同，優(yōu)勢(shì)菌門(mén)中的子囊菌門(mén)、壺菌門(mén)和纖毛門(mén)有極顯著(P≤0.001)差異，子囊菌門(mén)和纖毛門(mén)在易感病煙分別比健康煙田高15.4%和61.2%，noranke_o__Sordariales在易感病煙田比健康煙田高26.36%，說(shuō)明種植大蒜有益真菌門(mén)增加，有利于土壤真菌群落結(jié)構(gòu)的調(diào)整。種上煙草后雖然優(yōu)勢(shì)菌門(mén)種類不變，但是有差異的菌種與移栽前不同，旺長(zhǎng)期只有鐮刀菌屬具有顯著差異，易感病煙田比健康煙田高約56.7%，成熟期則是noranke_o__Sordariales和鐮刀菌屬有極顯著差異，且鐮刀菌屬比移栽前顯著增加，說(shuō)明易感病煙田種植大蒜后促進(jìn)煙草根際環(huán)境中有益菌的生長(zhǎng)，抑制病原菌生長(zhǎng)，最終使得這一年的發(fā)病率大大降低(僅為6.5%)。

土壤真菌優(yōu)勢(shì)菌門(mén)與環(huán)境因子的分析表明，pH、速效鉀和總氮是影響真菌群落變化的主要因子，這與李小林等[23]的研究一致，土壤中包括植物需要的主要養(yǎng)分是由微生物介導(dǎo)的，這些養(yǎng)分也影響著微生物的群落結(jié)構(gòu)組成，楊超等[24]研究認(rèn)為煙草土壤中真菌與土壤pH、有機(jī)質(zhì)、速效磷、堿解氮和速效鉀顯著相關(guān)，有益菌屬與堿解氮顯著正相關(guān)，煙蒜輪作提高了土壤的堿解氮，這與郭芳陽(yáng)[25]研究一致，輪作可以提高土壤堿解氮。而且煙草是喜鉀植物，鉀元素對(duì)煙草的生長(zhǎng)尤為重要。本研究表明煙蒜輪作與健康煙田空閑土壤相比顯著提高土壤速效鉀。pH沒(méi)有顯著提高，但是種植大蒜后的煙田土壤pH沒(méi)有降低，健康煙田稍有降低。norank_o__Sordariales、Pseudallescheria與速效鉀顯著正相關(guān)，這與微生物群落組成結(jié)果一致，移栽前這些菌種在種植大蒜后的土壤中顯著增加。但改善真菌群落結(jié)構(gòu)提高煙株抗病的機(jī)理研究，還需要進(jìn)一步比較分析煙草根際微生物種群的代謝變化才能真正揭示。

4 結(jié) 論

本文比較研究了易感病煙田前茬種植大蒜后于健康煙田土壤真菌的群落結(jié)構(gòu)變化，以及于土壤養(yǎng)分、pH、有機(jī)質(zhì)和酶活性的相關(guān)性。

(1)移栽前，種植大蒜的易感病煙田子囊菌門(mén)和擔(dān)子菌門(mén)優(yōu)勢(shì)真菌相對(duì)豐度高于健康煙田，鐮刀菌屬(Fusarium)等病原真菌相對(duì)豐度雖然高于健康煙田，但比煙草生長(zhǎng)時(shí)期已顯著下降。

(2)移栽前易感病煙田的真菌多樣性最高，種植大蒜提高了易感病煙田土壤有益真菌的種類和多樣性，且降低了病原菌的相對(duì)豐度，使發(fā)病率由往年的50.15%降到8.57%。

(3)種植大蒜可改變易感病煙田土壤真菌的群落結(jié)構(gòu)，使其趨于健康煙田。