高鑫媛，趙紅玲，白茹玥，李 哲，魏金月，趙藍(lán)青青，趙春穎

(承德醫(yī)學(xué)院/河北省中藥研究與開發(fā)重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室，河北 承德 067000)

【研究意義】蒼術(shù)為菊科植物茅蒼術(shù)Atractylodeslancea(Thunb.)DC.或北蒼術(shù)Atractylodeschinensis(DC.)Koidz.的干燥根莖[1]，是常用的中藥材，其主要活性成分為蒼術(shù)素、β-桉葉油醇、蒼術(shù)酮等[2]，臨床上具有抗腫瘤[3]、調(diào)節(jié)腸胃[4]、抑制膽固醇合成[5]和免疫調(diào)節(jié)[6]等作用，并在治療新型冠狀病毒肺炎(Corona Virus Disease 19，COVID-19)中起到重要作用[7]。近年來(lái)，野生北蒼術(shù)逐漸減少，栽培北蒼術(shù)藥材在市場(chǎng)上的占有率不斷升高，北蒼術(shù)的野生變家種已成為必然趨勢(shì)，但在栽培的過程中遇到許多的土傳病害問題，其中根腐病較為嚴(yán)重。北蒼術(shù)植株根腐病初期的表現(xiàn)為葉片變黃、枯萎，隨之根莖開始腐爛，呈黑褐色，并散發(fā)的異味。有研究表明，根腐病是中藥材生長(zhǎng)過程中最為常見的土傳病害，其具有極大危害性[8]。導(dǎo)致中藥材根腐病的原因較為復(fù)雜，包括土壤酸堿度、溫度、濕度及植物連作等[9-10]。植物連作可導(dǎo)致植物根際土壤中的微生物群落結(jié)構(gòu)發(fā)生變化，而微生物群落又是土壤的重要組成部分，在代謝循環(huán)、生長(zhǎng)發(fā)育、抗病性、非生物脅迫耐受性及合成促生激素等方面發(fā)揮著不可或缺的作用[11-12]。真菌被認(rèn)為是植物患根腐病的主要原因之一[13]，人參的根腐病致病菌為尖孢鐮刀菌(Fusariumoxysporum)、腐皮鐮刀菌(F.solani)[14]；三七的根腐病致病菌為茄腐鐮刀菌(F.solani)、尖孢鐮刀菌等[15-16]。因此，研究北蒼術(shù)患根腐病植株與健康植株根際土壤真菌的多樣性，探索兩者之間的真菌群落結(jié)構(gòu)的變化，可以給解決北蒼術(shù)植株的根腐病問題提供理論依據(jù)?！厩叭搜芯窟M(jìn)展】郭蘭萍等[17]提取了一至二年生栽培茅蒼術(shù)根際土壤微生物的DNA，運(yùn)用ARDRA(amplified rDNA restriction analysis)技術(shù)對(duì)真菌進(jìn)行了鑒定與比較，發(fā)現(xiàn)二年生茅蒼術(shù)根際土壤中真菌相比一年生降低49.25%，所以判斷生長(zhǎng)多年的茅蒼術(shù)發(fā)生病蟲害多，可能與根際土壤微生物的數(shù)量及群落的變化有關(guān)?！颈狙芯壳腥朦c(diǎn)】有關(guān)北蒼術(shù)植株患根腐病的根際土壤微生物的多樣性尚未研究，差異菌群的功能多樣性與北蒼術(shù)植株根腐病根際土壤理化性質(zhì)及土壤酶活的互作關(guān)系尚待驗(yàn)證?！緮M解決的關(guān)鍵問題】利用高通量測(cè)序技術(shù)(High-throughput sequencing)[18-20]分析北蒼術(shù)根腐病與健康植株根際土壤微生物群落組成與變化特征，并對(duì)土壤理化性質(zhì)與酶活性進(jìn)行了定量分析，旨在了解北蒼術(shù)根腐病發(fā)病機(jī)理和為防治北蒼術(shù)根腐病提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 根際土壤樣品采集

土壤樣品2020年10月采集于河北省承德市隆化縣韓家店村(北蒼術(shù)種植基地科研實(shí)驗(yàn)基地，海拔：858.18 m；117°24′43″E，41°34′57″N)。隨機(jī)選取二年生北蒼術(shù)根腐病植株根際土壤及健康植株根際土壤分別記錄為CB和CJ。所選取的植株經(jīng)承德醫(yī)學(xué)院趙春穎教授鑒定為北蒼術(shù)。每個(gè)處理3次重復(fù)。取附著于根系的土壤作為根際土壤，裝入自封袋，低溫運(yùn)輸至實(shí)驗(yàn)室，將采集的土壤過80目篩，去除土壤根系枯葉等雜質(zhì)，分為2份，1份用于提取土壤微生物DNA，在-80 ℃條件下貯藏，1份用于檢測(cè)土壤酶活和理化性質(zhì)。

1.2 土壤理化性質(zhì)及酶活的測(cè)定

使用土壤速測(cè)儀進(jìn)行土壤速效N、速效P、速效K及土壤pH的測(cè)定(PR-3001-TRREC-N01 壤博士土壤檢測(cè)儀)。使用土壤堿性磷酸酶(S-AKP)試劑盒(BC0280 Solarbio)，土壤脲酶(S-UE)試劑盒(BC0152 Solarbio)，土壤蔗糖酶(S-SC)試劑盒(BC0240 Solarbio)按照說(shuō)明進(jìn)行土壤酶活的測(cè)定，酶標(biāo)儀(S/N 601-0725 BMG LABTECH 德國(guó))。

1.3 土壤微生物DNA提取

使用E.Z.N.A.?土壤DNA試劑盒(Omega Bio-tek，Norcross，GA，U.S.)提取土壤樣品微生物總DNA，DNA提取液在1%瓊脂糖凝膠上檢測(cè)提取質(zhì)量，DNA濃度和純度用NanoDrop 2000紫外可見分光光度計(jì)(Thermo Scientific，Wilmington，USA)測(cè)定。

1.4 土壤真菌 ITS 序列的 PCR 擴(kuò)增及高通量測(cè)序

采用真菌通用引物[ITS1FCTTGGTCATTTAG AGGAAGTAA/ITS2R(GCTGCGTTCTTCATCGATGC)]擴(kuò)增。通過ABI GeneAmp?9700 PCR熱循環(huán)儀(ABI，CA，USA)擴(kuò)增真菌ITS區(qū)域。PCR產(chǎn)物使用AxyPrepDNA凝膠提取試劑盒(Axygen Biosciences，Union City，CA，USA)進(jìn)行純化并使用定量TM熒光計(jì)(Promega，USA)進(jìn)行定量。

1.5 文庫(kù)制備與上機(jī)測(cè)序

采用Illumina 公司制備測(cè)序文庫(kù)，構(gòu)建的測(cè)序文庫(kù)經(jīng)檢測(cè)合格后，使用Illumina Miseq平臺(tái)測(cè)序(委托上海美吉生物醫(yī)藥科技有限公司完成)。

1.6 數(shù)據(jù)處理與分析

測(cè)序數(shù)據(jù)用fastp 0.20.0[21]對(duì)原始Reads進(jìn)行質(zhì)控過濾，用FLASH 1.2.7[22]進(jìn)行合并，使用Uparse(version 7.1.)對(duì)97%相似水平下的操作分類單元(OTU)進(jìn)行生物信息統(tǒng)計(jì)分析。用RDP分類器2.2版[23]基于Unite(Release 8.0 http://unite.ut.ee/index.php)真菌數(shù)據(jù)庫(kù)及0.7的置信度閾值對(duì)每個(gè)OTU代表序列的分類進(jìn)行分析，并分別在各個(gè)分類學(xué)平：門(Phylum)，綱(Class)，目(Order)，科(Family)，屬(Genus)，種(Species)統(tǒng)計(jì)各樣本的群落物種組成。選擇97%相似度的OTU或其他分類學(xué)水平，利用mothur(version v.1.30.2 http://www.mothur.org/wiki/Schloss_SOP#Alpha_diversity)進(jìn)行稀釋性曲線(Rarefaction curve)分析，R語(yǔ)言工具制作曲線圖?；贑hao1、Sobs、Shannon、Coverage指數(shù)估計(jì)群落Alpha多樣性，并運(yùn)用統(tǒng)計(jì)學(xué)T檢驗(yàn)進(jìn)行組間差異檢驗(yàn)?；谥髯鴺?biāo)分析PCoA(Principal co-ordinates analysis)及物種組成heatmap圖和樣本聚類樹來(lái)闡明不同樣本組成的差異性。使用SPSS 26.0及Origin 2021進(jìn)行數(shù)據(jù)相關(guān)性分析。

2 結(jié)果與分析

2.1 蒼術(shù)根際土壤中真菌多樣性分析

2.1.1 Alpha多樣性分析 在質(zhì)控后共得到463 991條ITS2序列，序列平均長(zhǎng)度為240 bp。抽平分析后，每個(gè)樣本包括70 223條序列，共產(chǎn)生2538個(gè)OTUs。其中444個(gè)OTUs為根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤樣品所有，574個(gè)OTUs為健康北蒼術(shù)植株根際土壤樣品所有，760個(gè)OTUs為樣品共有(圖1)。

圖1 不同北蒼術(shù)植株根際土壤的真菌群落的OTUs

以抽取的數(shù)據(jù)量為橫坐標(biāo)，以Alpha多樣性指數(shù)值為縱坐標(biāo)繪制稀釋性曲線(圖2)。曲線逐漸趨于平緩，說(shuō)明獲取的Reads可以代表真菌群落的多樣性。通過計(jì)算豐富度指數(shù)(Chao1、Sobs)、辛普森指數(shù)(Simpson)、香農(nóng)指數(shù)(Shannon)、覆蓋率(Coverage)等估計(jì)群落Alpha多樣性(表1)。根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤的Shannon、Chao1及Sob指數(shù)值低于健康土壤，Simpson 指數(shù)高于健康土壤，說(shuō)明根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤中真菌群落豐度低、多樣性小。并且利用統(tǒng)計(jì)學(xué)T檢驗(yàn)方法，檢測(cè)不同處理中真菌群落的差異性，結(jié)果顯示2個(gè)處理之間Chao1與Sobs指數(shù)無(wú)顯著差異，其余P值均≤0.05，說(shuō)明這根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤于健康植株根際土壤之間真菌群落的多樣性具有顯著性差異。

圖2 北蒼術(shù)土壤樣本的真菌群落基于OTU水平的稀釋性曲線

表1 北蒼術(shù)植株根際土壤真菌群落的Alpha多樣性指數(shù)統(tǒng)計(jì)

2.1.2 Beta多樣性分析 為能更直觀地反映不同處理間的差異程度，對(duì)樣本數(shù)據(jù)進(jìn)行PCoA主成分分析，基于 Bray-Cruits 相異度距離反應(yīng)不同處理差異性。如圖3所示，樣品點(diǎn)的排布代表了樣品之間的相異程度。CB主要分布在PC1及PC2軸的負(fù)端，CJ主要分布在PC1軸的正端及PC2軸的負(fù)端，兩者可明顯區(qū)分。

圖3 不同北蒼術(shù)根際土壤的真菌群落基于OTU水平的PCoA分析

對(duì)不同土壤樣本真菌群落屬水平物種組成Heatmap圖和樣本聚類樹進(jìn)行分析，不同樣本中TOP 50真菌群落屬類存在差異(圖4)，其中Heatmap圖中色塊顏色代表某一個(gè)屬相對(duì)豐度的大小，且將6個(gè)樣品聚為2支，CB與CJ樣品明顯分開，表明CB與CJ樣品優(yōu)勢(shì)屬組成存在差異。

圖4 不同北蒼術(shù)根際土壤真菌群落屬水平物種組成和樣本聚類樹

2.1.3 LEfSe多級(jí)物種差異辨別分析 利用LEfSe差異分析，篩選出不同處理的北蒼術(shù)植株根際土壤中具有顯著差異的微生物(LDA閾值為4)。由圖5可知，與CJ相比，CB樣本中子囊菌門(Ascomycota)、肉座菌目(Hypocreales)、糞殼菌綱(Sordariomycetes)、Netriaceae、赤霉屬(Gibberella)等顯著聚集。然而在CJ樣本中散囊菌綱(Eurotiomycetes)、暗殼腔菌科(Phaeosphaeriaceae)、Setophoma、Chaetothyriales、糞殼菌科(Sordariales)等菌群富集。

圖5 不同北蒼術(shù)根際土壤真菌群落多級(jí)物種差異辨別分析

2.2 蒼術(shù)根際土壤中真菌組成分析

2.2.1 門水平群落結(jié)構(gòu)分析 在北蒼術(shù)植株根際土壤樣品中共檢測(cè)到真菌10門42綱93目208科412屬669種。如圖6所示，子囊菌門(Ascomycota)、被孢霉亞門(Mortierellomycota)、擔(dān)子菌門(Basidiomycota)、壺菌門(Chytridiomycota)為優(yōu)勢(shì)菌門?；加懈〉谋鄙n術(shù)植株根際土壤及健康北蒼術(shù)植株根際土壤中子囊菌門的豐度最高，分別為75.81 %、69.94%。其次為孢霉亞門，在根腐病北蒼術(shù)植株的根際土壤中占比為14.22%，健康植株根際土壤中占17.48%。擔(dān)子菌門、壺菌門在根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤中分別占6.44%、1.10%，在健康北蒼術(shù)植株根際土壤中分別占6.88%、1.83%。

圖6 不同北蒼術(shù)根際土壤真菌門水平真菌群落結(jié)構(gòu)

2.2.2 綱水平結(jié)構(gòu)群落分析 如圖7所示，糞殼菌綱(Sordariomycetes)的相對(duì)豐度排在根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤及健康植株根際土壤的首位，其相對(duì)豐度的占比分別為45.21%、38.00%，差異較明顯。座囊菌綱(Dothideomycetes)的相對(duì)豐度在根腐病北蒼術(shù)植株根際中為18.56%，健康植株根際土壤中占比為16.20%。而排名第三、四、五的Mortierellomycetes、散囊菌綱(Eurotiomycetes)、Tremeiomycetes在2組樣本中的相對(duì)豐度均為健康植株根際土壤中占比高于根腐病植株根際土壤。這三個(gè)菌在健康植株根際土壤中比根腐病植株根際土壤分別高3.26%、4.89%、2.24%。其余的Leotiomycetes、傘菌綱(Agaricomycetes)、盤菌綱(Pezizomycetes)在這兩組處理中的相對(duì)豐度沒有明顯的差別。

圖7 不同北蒼術(shù)根際土壤真菌綱水平真菌群落結(jié)構(gòu)

2.2.3 目水平群落結(jié)構(gòu)分析 在這2組樣本中排名前十的目水平豐富度均有差異(圖8)，肉座菌目(Hypocreales)在根腐病植株根際土壤和健康植株根際土壤中均為優(yōu)勢(shì)種群，相對(duì)豐度較大。假球殼目(Pleosporales)在根腐病植株根際土壤的占比17.17%，而在健康植株根際土壤中占比15.28%，相差不大。排名第三的被孢霉目(Mortierellales)及排名第四的糞殼菌目(Sordariales)、排名第六的散囊菌目(Eurotiales)、排名第八的刺盾炱目(Chaetothyriales)、排名第九的線黑粉菌目(Filobasidiales)也均在健康植株根際土壤中占比高。排名第五的Microascales在根腐病植株根際土壤中土壤中占比高于健康植株根際土壤，在根腐病根際土壤中占比為5.77%，健康土壤中占比4.13%。排名第七的小叢殼目(Glomerellales)在根腐病土壤中占比高于健康土壤。由此可見，根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤中真菌目水平的相對(duì)豐度較高的為：肉座菌目(Hypocreales)、假球殼目(Pleosporales)、Microascales、小叢殼目(Glomerellales)。健康土壤中真菌目水平的優(yōu)勢(shì)群落為：被孢霉目(Mortierellales)、糞殼菌目(Sordariales)、散囊菌目(Eurotiales)、刺盾炱目(Chaetothyriales)、線黑粉菌目(Filobasidiales)。

圖8 不同北蒼術(shù)根際土壤真菌目水平真菌群落結(jié)構(gòu)

2.2.4 科水平群落結(jié)構(gòu)分析 叢赤殼科(Nectriaceae)的相對(duì)豐度在根腐病土壤中占比最高為18.48%(圖9)。被包霉科(Mortierellaceae)相對(duì)豐度在健康土壤中占比最高為17.44%。小雙腔菌科(Didymellaceae)在根腐病土壤和健康土壤中相對(duì)豐度差異較小，Plectosphaerellaceae菌在健康土壤中相對(duì)豐度較高分別為19.85%、12.81%。Chaetothyriaceae、Lasiosphaeriaceae、Piskurozymaceae在根腐病土壤中相對(duì)豐度較健康土壤中低，分別為5.62%、2.05%、1.94%。在這2個(gè)北蒼術(shù)土壤樣本中，排名前十的叢赤殼科(Nectriaceae)、Microascaceae、Plectosphaerellaceae、Trichocomaceae在科水平相對(duì)豐度群較健康土壤中豐度高。

圖9 不同北蒼術(shù)植株根際土壤真菌屬水平真菌群落結(jié)構(gòu)

2.2.5 屬水平群落結(jié)構(gòu)分析 如圖10所示，從屬水平分析，在根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤中鐮刀菌屬(Fusarium)，赤霉屬(Gibberella)豐度較健康土壤高，分別為9.50%、7.57%。在北蒼術(shù)的健康土壤中被孢霉屬(Mortierella)、亞隔孢殼屬(Didymella)、毛殼屬(Cheatomium)、Solicoccozyma、Kernia、Penicillium等菌群豐度相對(duì)于根腐病植株根際土壤的群落占比高分別為17.55%、6.67%、4.93%、3.39%、3.49%、3.26%。在本次分析中發(fā)現(xiàn)Tausonia為蒼術(shù)健康的根際土壤菌群，在根腐病植株根際土壤中沒有發(fā)現(xiàn)。Monodictys、Neocosmospora、Althrnaria、Gibellulopsis等菌群在蒼術(shù)健康土壤中亦未發(fā)現(xiàn)。

圖10 不同北蒼術(shù)植株根際土壤真菌屬水平真菌群落結(jié)構(gòu)

2.3 真菌群落與土壤理化性質(zhì)及土壤酶活分析

2.3.1 不同土壤的理化性質(zhì)及土壤酶活 由表2可知，CB中速效N、速效K和速效P顯著高于CJ。且相比CJ，CB的pH顯著降低，而水分含量及電導(dǎo)率顯著升高。在土壤的酶活檢測(cè)中，CJ處理組的酶活與CB處理組的酶活存在顯著性差異，CJ處理的S-AKP、S-UE、S-SC值顯著低與CB處理。

表2 不同樣本的土壤的化學(xué)性質(zhì)

2.3.2 不同土壤的真菌群落與土壤酶活的相關(guān)性 選擇真菌群落屬水平的排名前十的菌群與土壤酶活進(jìn)行相關(guān)性分析(圖11)。北蒼術(shù)植株根際土壤的pH與水分，速效N及3種土壤酶活含量呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.98、-0.936、-0.895、-0.954，與Kernia、Penicillium、Schizothecium、Setophoma的含量呈顯著正相關(guān)。土壤水分與土壤脲酶含量呈顯著正相關(guān)，與被孢霉屬(Mortierella)、Penicillium、Schizothecium、Setophoma含量呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.967、-0.954、-0.972、-0.820。毛殼屬(Cheatomium)的含量與速效P、速效K呈顯著負(fù)相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為-0.816。Setophoma屬含量與Solicoccozyma屬、Kernia屬、Schizothecium屬呈顯著正相關(guān)，相關(guān)系數(shù)為0.945、0.887、0.890。鐮刀菌屬(Fusarium)、亞隔孢殼屬(Didymella)、赤霉屬(Gibberella)與土壤理化性質(zhì)及酶活沒有顯著的相關(guān)關(guān)系。

*.在 0.05 水平(雙側(cè))上顯著相關(guān)

3 討 論

本研究采用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)二年生的根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤及健康北蒼術(shù)植株根際土壤根際真菌群落多樣性進(jìn)行初步研究，共獲得其根際在不同分類級(jí)別的優(yōu)勢(shì)分類群的總數(shù)及其相對(duì)豐度，包括門、綱、目、科、屬、種等。二年生根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤的真菌群落的多樣性及豐富度都低于健康北蒼術(shù)植株根際土壤真菌落，與茅蒼術(shù)根際微生物的變化相同[15]。

研究表明，子囊菌門和擔(dān)子菌門的微生物是主要的土壤真菌分解者[26]，在本研究中，所有土壤樣本中子囊菌門和擔(dān)子菌門的相對(duì)豐度最高，鐮刀菌能刺激植株內(nèi)酚酸物質(zhì)的積累，導(dǎo)致植物死亡[27-28]，酚酸類物質(zhì)能調(diào)節(jié)土壤微生物群落，促進(jìn)致病菌的增值，減少有益菌[29]，也有實(shí)驗(yàn)證明尖孢鐮刀菌為白術(shù)的主要致病菌[30]，本次研究發(fā)現(xiàn)根腐病北蒼術(shù)植株根際的土壤中豐度增多的菌群含有鐮刀菌，根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤中的子囊菌門占9.50%，也從側(cè)面印證了該結(jié)論。吳小強(qiáng)等[31]運(yùn)用高通量測(cè)序技術(shù)對(duì)不同生長(zhǎng)年限的蒼術(shù)健康植株根際土壤微生物進(jìn)行分析，發(fā)現(xiàn)隨著種植年限增長(zhǎng)，Tausonia屬豐度降低，本研究中在健康植株土壤中發(fā)現(xiàn)Tausonia屬的相對(duì)豐度為1.77%，在根腐病土壤中未發(fā)現(xiàn)。毛殼菌是一類重要的資源真菌，作為生防菌對(duì)植物病原菌具有很好的防治效果[32]，該類真菌含量與土壤的pH呈顯著相關(guān)，在健康土壤中含量較多，在根腐病土壤中含量較少。Setophoma屬被認(rèn)為是黃精根莖中的優(yōu)勢(shì)內(nèi)生菌屬[33]，在健康北蒼術(shù)植株的根際土壤中豐度也比根腐病植株根際土壤中豐度高。Solicoccozyma屬在重樓的健康植株根際土豐度占比較高[34]，Kernia屬是番茄的致病菌[35]，但是在健康北蒼術(shù)植株根際土壤中豐富高于根腐病植株根際土壤，說(shuō)明此類菌可能不是北蒼術(shù)植株患根腐病的主要致病菌，亦或者其他的生防菌對(duì)該菌屬起著抑制作用。特殊生境中的Schizothecium菌對(duì)促進(jìn)宿主植物生長(zhǎng)，提高耐受及環(huán)境脅迫能力等方面都發(fā)揮了重要影響[36-37]，本研究發(fā)現(xiàn)該菌群在健康北蒼術(shù)植株根際土壤中豐度亦相對(duì)高。所以北蒼術(shù)根腐病的發(fā)生和以上菌群的增加或減少可能有著一定聯(lián)系。但是要明確這些菌群對(duì)北蒼術(shù)根際土壤中真菌是促生或抑制，后續(xù)課題組將進(jìn)一步進(jìn)行驗(yàn)證。

土壤pH可以影響土壤的所有化學(xué)，物理和生物特性，也是影響根際土壤微生物群落組成的主要因素[38]。本研究中，根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤的pH小于健康土壤。當(dāng)pH小于6時(shí)，土壤微生物的群落多樣性會(huì)隨著pH的降低而減少[39]。本研究發(fā)現(xiàn)在根腐病植株根際土壤中的速效N、速效P、速效K及含水量都高于健康植株根際土壤，分析是植物根的腐爛導(dǎo)致植株吸收水分能力減弱，土壤含水量增加，長(zhǎng)時(shí)間的根腐病侵染會(huì)降低植株的活力和土壤微生物生物量，改變真菌群落組成和土壤功能，使其向更快的有機(jī)碳分解方向發(fā)展，這可能會(huì)增加土壤有機(jī)質(zhì)的消耗[40]。根腐病植株根際的土壤電導(dǎo)率高于健康植株根際土壤，表明根腐病可以導(dǎo)致細(xì)胞膜透性的增大，離子外滲量增加，細(xì)胞膜的完整性可能已經(jīng)被破壞[40]。要反應(yīng)土壤的質(zhì)量，酶活亦是重要指標(biāo)[24]。在生理代謝過程中，土壤酶活性增強(qiáng)可以加速有機(jī)物含量的增加，給與微生物生長(zhǎng)的養(yǎng)分，促使微生物的繁殖速度加快[41]。結(jié)合Acostamartinez等[42]、Liu等[43]研究證明：堿性磷酸酶是影響藥用植物連作的一種關(guān)鍵的胞外酶，與微生物群落結(jié)構(gòu)和組成的變化密切相關(guān)。在本次實(shí)驗(yàn)中，發(fā)現(xiàn)土壤堿性磷酸酶活性與土壤pH呈顯著相關(guān)性?？膳袛噙@可能亦是北蒼術(shù)患根腐病原因之一。

4 結(jié) 論

在北蒼術(shù)植株根際土壤微生物真菌群落豐度的研究中，常見生防菌毛殼屬(Cheatomium)在根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤中占比較少，Schizothecium菌在健康北蒼術(shù)植株根際土壤中占比豐度更高。常見致病菌鐮刀菌(Fusarium)在根腐病北蒼術(shù)植株根際土壤中占比多。在北蒼術(shù)的栽培過程中，為了降低北蒼術(shù)植株患根腐病的發(fā)病率，可以結(jié)合北蒼術(shù)健康植株根際土壤的微生物真菌群落豐度及土壤理化性質(zhì)與酶活的改變，對(duì)根腐病植株的根際土壤微生物的群落結(jié)構(gòu)進(jìn)行改善，從而減少北蒼術(shù)患根腐病的情況。但是，目前可以尋找到的指示菌是否能夠真正用于指導(dǎo)病害發(fā)生檢測(cè)和生防調(diào)控，還必須深入、全面地研究和驗(yàn)證。