陸瀅 鄧鑫州 宋仕茂 駱志國

湖北醫(yī)藥學(xué)院附屬太和醫(yī)院腫瘤防治中心，十堰 442099

肺癌是全球范圍內(nèi)最常見的惡性腫瘤之一，嚴(yán)重影響人類健康[1]。非小細胞肺癌（non-small cell lung cancer，NSCLC）占肺癌的85%[2]。放療是其主要的非手術(shù)治療方法，但放射抵抗往往會導(dǎo)致局部腫瘤復(fù)發(fā)和預(yù)后不良[3-4]，目前尚無逆轉(zhuǎn)NSCLC放射抵抗的有效靶點，亟需探究。

環(huán)狀RNA（circular RNA，circRNA）是一類在真核生物中廣泛表達的環(huán)狀非編碼RNA，其由mRNA 前體通過反向剪接產(chǎn)生。不同于其他線性非編碼RNA，circRNA 不具備5′端帽和3′端尾結(jié)構(gòu)，對核酸外切酶具有抵抗性，故circRNA 極具穩(wěn)定性[5-6]。2011 年，Salmena 等[7]提出，circRNA 具有微小RNA（microRNA，miRNA）反應(yīng)元件，可作為競爭性內(nèi)源性RNA 海綿吸附并抑制miRNA，從而改變細胞的基因表達。circRNA 還可以通過結(jié)合RNA 結(jié)合蛋白、調(diào)節(jié)基因轉(zhuǎn)錄等方式來發(fā)揮作用，故其可參與基因轉(zhuǎn)錄、轉(zhuǎn)錄后調(diào)控、細胞內(nèi)RNA調(diào)控網(wǎng)絡(luò)及蛋白質(zhì)翻譯等生理過程，進而影響細胞周期進程、細胞衰老和凋亡等多種生物學(xué)過程[8]。

研究結(jié)果證實，circRNA 在肺癌、胃癌、膀胱癌和乳腺癌等多種腫瘤中表達異常，其參與調(diào)控腫瘤細胞增殖、侵襲和轉(zhuǎn)移等多種生物學(xué)過程，因此circRNA 被認為是一種潛在的腫瘤生物標(biāo)志物及治療靶點[9]。Wang 等[10]發(fā)現(xiàn)，circRNA_0008305可誘導(dǎo)NSCLC 細胞發(fā)生上皮間充質(zhì)轉(zhuǎn)化，進而促進肺癌轉(zhuǎn)移。circRNA_0000199 通過抑制miR-198上調(diào)磷脂酰肌醇-3 激酶調(diào)節(jié)亞基1，以此增強胃癌細胞對鉑類藥物的耐藥性[11]。另有研究結(jié)果證實，circRNA 可能參與腫瘤的放射抵抗過程[12]。Ma 等[13]發(fā)現(xiàn)，circRNA_0122683 在食管癌組織中高表達，其通過調(diào)控miR-186-5p/腺苷二磷酸核糖聚合酶9（PARP9）軸調(diào)控細胞惡性程度并促進放射抵抗。circRNA_100367 通過吸附miR-217 增強食管癌細胞的放射抗性[14]。目前，針對circRNA 與NSCLC細胞放射敏感性關(guān)系的研究尚不多見，circRNA_0128846 對NSCLC 細胞放射敏感性的影響不清楚。本研究探討circRNA_0128846 對人NSCLC 細胞放射敏感性的調(diào)控作用及分子機制，以期為解決臨床NSCLC 放射抵抗問題提供潛在的治療靶點。

1 材料與方法

1.1 主要材料與儀器

人支氣管上皮細胞Beas-2B、人NSCLC 細胞A549、H460、H1299、H1975 和人胚腎細胞293T均購自中國科學(xué)院上海生命科學(xué)研究院細胞資源中心，培養(yǎng)代次為10。DMEM 培養(yǎng)基、DMEM/F12培養(yǎng)基、DMEM 高糖培養(yǎng)基、胎牛血清、0.25%胰蛋白酶（不含EDTA）、0.25%胰蛋白酶、表皮細胞生長因子、β-成纖維細胞生長因子、2% B27 添加物均購自美國Gibco 公司；青霉素和鏈霉素均購自浙江吉諾生物醫(yī)藥技術(shù)有限公司；Lipofectamine3000、Trizol 試劑均購自美國Invitrogen 公司；SYBR Green PCR 試劑盒購自日本Takara 公司；RIPA 裂解液購自北京普利萊基因技術(shù)有限公司；CCK-8 試劑盒、RNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒均購自上海碧云天生物技術(shù)有限公司；miR-1183 抑制劑、miR-1183 模擬物及陰性對照均購自蘇州吉瑪基因股份有限公司。NanoDrop2000 分光光度計、酶聯(lián)免疫分析儀均購自美國Thermo 公司；X-RAD 320 直線加速器購自美國North Branford 公司。質(zhì)粒（LUC）購自上海和元生物技術(shù)股份有限公司；引物購自廣州生工生物工程股份有限公司。雙熒光素酶報告基因分析系統(tǒng)購自美國Promega 公司。

1.2 細胞培養(yǎng)及照射

人支氣管上皮細胞Beas-2B 和人NSCLC 細胞A549、H460、H1299、H1975 分別培養(yǎng)于含10%胎牛血清、100 U/ml 青霉素、100 g/ml 鏈霉素的DMEM 培養(yǎng)基中；人胚腎細胞293T 培養(yǎng)于含10%胎牛血清的DMEM 高糖培養(yǎng)基中，培養(yǎng)條件均為37℃、5% CO2。放射抵抗細胞系是本實驗室前期經(jīng)分割輻射（2 Gy×30 次）誘導(dǎo)而成的，已建立具有穩(wěn)定放射抵抗能力的人NSCLC 細胞A549（命名為A549R），并每2 周給予低劑量（2 Gy）照射以維持細胞的輻射抗性，照射條件為6 MV X 射線，劑量率為4 Gy/min。

1.3 目標(biāo)circRNA、miRNA 的篩選

在GEO 數(shù)據(jù)庫（https://www.ncbi.nlm.nih.gov/geo）中下載微陣列數(shù)據(jù)集GSE101684，篩選出在4 對癌組織與癌旁正常組織中差異表達最顯著的10 種circRNA[篩選標(biāo)準(zhǔn)為log2FC（折疊變化）≥1.5，且P＜0.05]，選擇在親本細胞和放射抵抗細胞中表達差異最顯著的circRNA 作為目標(biāo)circRNA。利用人類環(huán)狀RNA 數(shù)據(jù)庫（http://www.circbank.cn）和circinteractome 數(shù)據(jù)庫（https://circinteractome.nia.nih.gov）預(yù)測目標(biāo)circRNA 下游的miRNA，篩選出沉默目標(biāo)circRNA 后，表達水平上升最顯著的miRNA作為目標(biāo)miRNA。

1.4 細胞轉(zhuǎn)染

將人NSCLC 細胞A549、A549R 接種于6 孔培養(yǎng)板中（1×105個/孔），培養(yǎng)至50%～70%融合度后轉(zhuǎn)染，轉(zhuǎn)染操作按照Lipofectamine3000 說明書進行。對A549R 細胞進行轉(zhuǎn)染，目標(biāo)circRNA 沉默載體為pLKD-CMV-G＆PR-U6-shRNA，干擾序列為5′-TCCAAGCTGGCCAGCAGCCAGC-3′；對A549細胞進行轉(zhuǎn)染，目標(biāo)circRNA 過表達載體為pIREShrGFP-1a，目標(biāo)circRNA 過表達序列見“http://www.circbank.cn/search.html?selectValue=has_circ_01288 46”。使用miRNA 抑制劑轉(zhuǎn)染A549 細胞以實現(xiàn)miRNA 沉默；使用miRNA 模擬物轉(zhuǎn)染A549R 細胞以實現(xiàn)miRNA 過表達，轉(zhuǎn)染對照組均為空載體。

1.5 細胞克隆形成實驗

將轉(zhuǎn)染后24 h 的人NSCLC 細胞A549、A549R各分為3 組進行照射，照射劑量分別為0、4、8 Gy，照射后將細胞接種于6 孔低吸附培養(yǎng)板中（1×104個/孔），使用DMEM/F12 無血清培養(yǎng)基培養(yǎng)，培養(yǎng)基中加入50 ng/ml 表皮細胞生長因子、10 ng/ml β-成纖維細胞生長因子和2% B27 添加物。培養(yǎng)7 d 后在顯微鏡下拍照分析，以細胞克隆最大徑＞20 μm為判定標(biāo)準(zhǔn)，統(tǒng)計細胞克隆形成率（細胞克隆形成率=細胞克隆數(shù)/細胞總數(shù)×100%）[15]。

1.6 熒光實時定量（ fluorescence real-time quantitative，qRT）PCR

使用Trizol 試劑從細胞中提取總RNA，使用NanoDrop2000 分光光度計檢測純化的總RNA 的質(zhì)量和濃度。按照RNA 反轉(zhuǎn)錄試劑盒說明書提取RNA，并進行反轉(zhuǎn)錄合成互補DNA（cDNA）。采用SYBR Green PCR 試劑盒檢測細胞中在人NSCLC癌組織與配對的癌旁正常組織中差異表達的10 種circRNA 以及可能與目標(biāo)circRNA 結(jié)合的miRNA的表達水平，操作按照說明書進行。以甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GADPH）作為目標(biāo)circRNA 的參考基因，U6 作為目標(biāo)miRNA 的參考miRNA。PCR 反應(yīng)條件：94℃預(yù)變性1 min，94℃變性10 s，60℃退火30 s，72℃延伸30 s，40 個循環(huán)。引物序列如表1 所示。

表1 熒光實時定量聚合酶鏈反應(yīng)的引物序列Table 1 Primers sequences used in fluorescence real-time quantitative polymerase chain reaction

1.7 雙熒光素酶報告基因的分析

質(zhì)粒在熒光素酶基因啟動子（LUC-目標(biāo)circRNA）下游插入序列5′-CUUACAGUAC-3′（目標(biāo)circRNA 中miRNA 的潛在結(jié)合序列）。將293T細胞接種于24 孔培養(yǎng)板中（5×104個/孔），將LUC-目標(biāo)circRNA 與miRNA 模擬物或miRNA 陰性對照共轉(zhuǎn)染293T 細胞，48 h 后裂解細胞，使用雙熒光素酶報告基因分析系統(tǒng)測定熒光素酶活性。

1.8 統(tǒng)計學(xué)分析

應(yīng)用SPSS 23.0 軟件、GraphPad Prism 7.0 軟件進行統(tǒng)計學(xué)分析。符合正態(tài)分布的計量資料以±s表示，2 組間數(shù)據(jù)的比較采用獨立樣本t檢驗（方差齊）。P＜0.05 為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 circRNA_0128846 高表達對人NSCLC 細胞放射抵抗的影響

由圖1A 可見，經(jīng)GEO 數(shù)據(jù)庫微陣列數(shù)據(jù)集GSE101684（包括4 對癌組織與配對的癌旁正常組織）篩選，在人NSCLC 癌組織中表達上調(diào)的前10 種circRNA 分別為circRNA_0116061、circRNA_0116961、circRNA_0106711、circRNA_0106714、circRNA_0128846、circRNA_0094088、circRNA_0046264、circRNA_0096041、circRNA_0096042 和circRNA_0096049。qRT-PCR 結(jié)果顯示，上述10 種circRNA 中，circRNA_0116961、circRNA_0106714、circRNA_0128846 和circRNA_0046264 在A549R 細胞中的相對表達水平均高于A549 細胞（均P＜0.05），其中circRNA_0128846表達差異最顯著（圖1B）。故本研究選擇circRNA_0128846 作為目標(biāo)circRNA。qRT-PCR 檢測circRNA_0128846 在正常人支氣管上皮細胞Beas-2B 以及人NSCLC細胞A549、H460、H1299、H1975中的相對表達水平，結(jié)果顯示，circRNA_0128846 在A549、H460、H1299、H1975 細胞中的相對表達水平均高于Beas-2B 細胞（均P＜0.01，圖1C）。以上4 株人NSCLC細胞的克隆形成實驗結(jié)果顯示，經(jīng)0、4、8 Gy 的X 射線照射后，隨著circRNA_0128846 表達水平的升高，4 株人NSCLC 細胞的克隆形成能力逐漸增強（圖2），這提示circRNA_0128846 的高表達可能與人NSCLC 細胞的放射抵抗呈正相關(guān)。

圖1 篩選目標(biāo)circRNA 并檢測其在正常人支氣管上皮細胞Beas-2B 及人非小細胞肺癌細胞A549、H460、H1299、H1975 中的表達情況 A 為以log2FC(折疊變化)≥1.5，且P＜0.05 為篩選標(biāo)準(zhǔn)，經(jīng)GEO 數(shù)據(jù)庫微陣列數(shù)據(jù)集GSE101684 篩選在4 對人NSCLC 癌組織與配對的癌旁正常組織中差異表達的circRNA 的熱圖，紅色、藍色條帶分別表示高表達、低表達；B 為qRT-PCR 檢測A549 細胞及其放射抵抗細胞（A549R）中10 種circRNA 的相對表達水平；C 為circRNA_0128846 的相對表達水平。a 表示與A549 細胞相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=3.592、2.972、10.000、2.997，P=0.023、0.041、0.001、0.040）；b 表示與Beas-2B 細胞相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.200、7.903、6.010、6.132，P=0.003、0.001、0.004、0.004）。circRNA 為環(huán)狀RNA；qRT-PCR 為熒光實時定量聚合酶鏈反應(yīng)Figure 1 Screening target circRNA and detecting its expression in normal human bronchial epithelial cell Beas-2B and human non-small cell lung cancer cell A549, H460, H1299, H1975

圖2 不同劑量X 射線照射后正常人支氣管上皮細胞Beas-2B 和人非小細胞肺癌細胞A549、H460、H1299、H1975 的克隆形成情況（×200）Figure 2 Clone formation in normal human bronchial epithelial cells Beas-2B and human non-small cell lung cancer cell A549, H460, H1299,H1975 after irradiation with different doses of X-ray radiation (×200)

2.2 circRNA_0128846 對人NSCLC細胞放射抵抗的影響

細胞克隆形成實驗結(jié)果顯示，在4、8 Gy X 射線的照射下，A549R細胞的輻射抗性顯著高于親本A549細胞（均P＜0.05，圖3）。qRT-PCR檢測結(jié)果表明，在A549 細胞中成功過表達了circRNA_0128846（圖4A），與對照組相比，過表達circRNA_0128846 顯著增強了A549細胞的克隆形成能力（0.22%對0.45%，圖4B）；在A549R 細胞中成功沉默了circRNA_0128846（圖5A），與對照組相比，沉默circRNA_0128846 顯著降低了A549R 細胞的克隆形成能力（0.23%對0.10%，圖5B），該結(jié)果提示circRNA_0128846 能夠促進人NSCLC 細胞的放射抵抗。

圖3 不同劑量X 射線照射后人非小細胞肺癌細胞A549 及其放射抵抗細胞（A549R）的克隆形成情況（×200） a 表示與A549 細胞相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.427、3.479，P=0.011、0.025）Figure 3 Clone formation in human non-small cell lung cancer cell A549 and its radioresistant cell A549R after irradiation with different doses of X-ray radiation (×200)

圖4 circRNA_0128846 過表達載體轉(zhuǎn)染人非小細胞肺癌細胞A549 48 h 后的相對表達水平（A）及8 Gy X 射線照射后的克隆形成能力（B，×200） a 表示與空載體相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.022、4.427，P=0.016、0.011）。 circRNA 為環(huán)狀RNAFigure 4 Relative expression level of circRNA_0128846 overexpression vector transfected human non-small cell lung cancer cell A549 for 48 h (A) and clone formation ability after 8 Gy X-ray irradiation (B, ×200)

圖5 circRNA_0128846 沉默載體轉(zhuǎn)染人非小細胞肺癌細胞A549 的放射抵抗細胞（A549R） 48 h 后的相對表達水平（A）及8 Gy X 射線照射后的克隆形成能力（B，×200） a 表示與空載體相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.002、3.780，P=0.004、0.019）。 circRNA 為環(huán)狀RNAFigure 5 Relative expression level of circRNA_0128846 silencing vector transfected the radioresistant cell (A549R) of human non-small cell lung cancer cell A549 for 48 h (A) and clone formation ability after 8 Gy X-ray irradiation (B, ×200)

2.3 與circRNA_0128846 結(jié) 合 的miRNA

在circinteractome 數(shù)據(jù)庫和人類環(huán)狀RNA 數(shù)據(jù)庫中取交集得到9 種可能與circRNA_0128846 結(jié)合的潛在miRNA。qRT-PCR 檢測A549R 細胞中circRNA_0128846 沉默后各miRNA 的表達，結(jié)果顯示，沉默circRNA_0128846 可上調(diào)miR-1183 和miR-1827 的表達（t=5.095、3.464，P=0.007、0.026），其中miR-1183 表達上調(diào)最顯著，該結(jié)果提示circRNA_0128846 可能與miR-1183 結(jié)合，并下調(diào)其表達。采用生物信息學(xué)預(yù)測circRNA_0128846 與miR-1183 潛在的結(jié)合位點如圖6 所示。qRT-PCR 檢測結(jié)果表明，在A549細胞中過表達circRNA_0128846 可顯著下調(diào)miR-1183 的表達（t=6.002，P=0.004）。在人胚腎293T細胞中進行雙熒光素酶報告基因分析的結(jié)果顯示，過表達miR-1183 可顯著降低circRNA_0128846 的表達（t=4.562，P=0.010），這提示miR-1183 可以與circRNA_0128846 結(jié)合并下調(diào)其表達。經(jīng)qRTPCR 驗證，miR-1183 在A549R 細胞中的表達水平顯著低于A549 細胞（t=6.025，P=0.004），這提示miR-1183 可能與人NSCLC 細胞的放射抵抗有關(guān)。

圖6 生物信息學(xué)預(yù)測circRNA_0128846 與miR-1183 的結(jié)合位點 circRNA 為環(huán)狀RNA；miR 為微小RNAFigure 6 Bioinformatics prediction of the binding site of circRNA_0128846 and miR-1183

2.4 circRNA_0128846 靶向miR-1183 的放射抵抗

經(jīng)qRT-PCR 驗證，使用miR-1183 抑制劑成功對A549 細胞進行了miR-1183 沉默，沉默miR-1183 顯著增強了8 Gy X 射線照射后A549 細胞的克隆形成能力（0.21%對0.31%，圖7）；同時，使用miR-1183 模擬物成功對A549R 細胞進行了miR-1183 過表達，過表達miR-1183 顯著降低了8 Gy X射線照射后A549R 細胞的克隆形成能力（0.26%對0.15%，圖8），這提示miR-1183 可抑制人NSCLC細胞的放射抵抗。過表達circRNA_0128846 可顯著增強8 Gy X 射線照射后A549 細胞的克隆形成能力（P＜0.01），而過表達miR-1183 逆轉(zhuǎn)了circRNA_0128846 誘導(dǎo)的放射抵抗（1.90%對1.20%，圖9），這表明circRNA_0128846 可以通過介導(dǎo)miR-1183促進人NSCLC 細胞的放射抵抗。

圖7 miR-1183 抑制劑轉(zhuǎn)染人非小細胞肺癌細胞A549 48 h 后的相對表達水平（A）及8 Gy X 射線照射后的克隆形成能力（B，×200）a 表示與空載體相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=4.848、3.293，P=0.008、0.030）。miR 為微小RNAFigure 7 Relative expression level of miR-1183 inhibitor transfected human non-small cell lung cancer cell A549 for 48 h (A) and clone formation ability after 8 Gy X-ray irradiation (B, ×200)

圖8 miR-1183 模擬物轉(zhuǎn)染人非小細胞肺癌細胞A549 的放射抵抗細胞（A549R） 48 h 后的相對表達水平（A）及8 Gy X 射線照射后的克隆形成能力（B，×200） a 表示與空載體相比，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（t=9.219、3.671，P=0.001、0.021）。 miR 為微小RNAFigure 8 Relative expression level of miR-1183 mimic transfected the radioresistant cell (A549R) of human non-small cell lung cancer cell A549 for 48 h (A) and clone formation ability after 8 Gy X-ray irradiation (B, ×200)

圖9 人非小細胞肺癌細胞A549 過表達circRNA_0128846 和miR-1183 后的克隆形成能力（×200） a 表示與circRNA_0128846 空載體相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=7.000，P=0.002）；b 表示與circRNA_0128846 過表達載體+miR-1183 空載體相比，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（t=6.325，P=0.003）。circRNA 為環(huán)狀RNA； miR 為微小RNAFigure 9 Clonal formation ability of human non-small cell lung cancer cell A549 after overexpression of circRNA_0128846 and miR-1183(×200)

3 討論

越來越多的研究結(jié)果表明，circRNA 在許多惡性腫瘤的發(fā)生發(fā)展中起著關(guān)鍵的調(diào)節(jié)作用[16]。隨著高通量測序及先進的生物信息學(xué)技術(shù)的發(fā)展，許多circRNA 被鑒定出來，這使得circRNA 與腫瘤的關(guān)系比以往更受關(guān)注。circRNA 的異常表達已被證實與NSCLC 的進展有關(guān)，如circRNA_100876在NSCLC 組織中的表達水平明顯高于鄰近的非腫瘤組織，circRNA_100876 的表達上調(diào)與NSCLC患者的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和腫瘤分期有關(guān)[17]。此外，circRNA_100876 表達水平較高的NSCLC 患者的總生存時間明顯短于circRNA_100876 表達水平較低的NSCLC 患者[17]，故某些circRNA 對NSCLC的發(fā)生、發(fā)展及診斷治療可能有重大意義。目前，關(guān)于circRNA_0128846 與腫瘤的關(guān)系僅有1 篇文獻報道，其研究結(jié)果顯示，circRNA_0128846 在結(jié)直腸癌組織中的表達水平顯著高于正常組織，circRNA_0128846 通過下調(diào)miR-1184 的表達來增加LIM 結(jié)構(gòu)域蛋白（AJUBA）的表達，使得Hippo/Yes 相關(guān)蛋白（YAP）通路信號失活，從而促進結(jié)直腸癌的發(fā)生[18]。在本研究中，我們通過生物信息學(xué)分析發(fā)現(xiàn)circRNA_0128846 在人NSCLC 細胞中顯著高表達。

目前，關(guān)于circRNA 與腫瘤放射敏感性關(guān)系的報道還不多見。研究結(jié)果表明，circZNF609 在前列腺癌組織和細胞系中異常上調(diào)，其通過調(diào)控miR-501-3p/已糖激酶2（HK2）軸促進糖酵解代謝，從而增強前列腺癌細胞的放射抵抗[19]。circ_0086720 通過靶向miR-375/紡錘體蛋白1（SPIN1）軸促進NSCLC 放射抵抗[20]。下調(diào)circ_CCNB2 可抑制miR-30b-5p/驅(qū)動蛋白家族成員18A（KIF18A）軸介導(dǎo)的細胞自噬，增強前列腺癌細胞的放射敏感性[21]。在本研究中，我們發(fā)現(xiàn)circRNA_0128846在人NSCLC 放射抵抗細胞中顯著高表達，沉默circRNA_0128846 能顯著增強人NSCLC 細胞的放射敏感性，過表達circRNA_0128846 能顯著降低人NSCLC 細胞的放射敏感性，circRNA_0128846 可作用于miR-1183，促進人NSCLC 細胞的放射抵抗。

circRNA 發(fā)揮生物學(xué)功能的重要途徑之一就是作為分子海綿吸附miRNA。大量研究結(jié)果證實miRNA 參與炎癥[22]、心臟病[23]、腫瘤[24]等多種疾病的發(fā)生、發(fā)展。目前，關(guān)于miR-1183 的研究還較少。miR-1183 可通過調(diào)控B 細胞淋巴瘤基因2（Bcl2）的表達參與風(fēng)濕性心臟病的發(fā)生、發(fā)展過程[25]。在腫瘤中，miR-1183 是circRNA_0073239和circRNA_0005273 調(diào)控腫瘤細胞增殖、遷移、糖酵解的重要下游靶標(biāo)[26-28]。Zhu 等[26]的研究結(jié)果表明，miR-1183 是circRNA_0073239 介導(dǎo)膠質(zhì)瘤放射抵抗的下游靶標(biāo)。本研究通過人類環(huán)狀RNA 數(shù)據(jù)庫和circinteractome 數(shù)據(jù)庫預(yù)測并驗證了circRNA_0128846 的下游靶標(biāo)miR-1183，并發(fā)現(xiàn)其可能是circRNA_0128846 介導(dǎo)人NSCLC 細胞放射抵抗的重要靶標(biāo)。我們發(fā)現(xiàn)，通過過表達miR-1183 顯著增強了人NSCLC 細胞的放射敏感性，而沉默miR-1183 顯著降低了人NSCLC 細胞的放射敏感性。

關(guān)于miR-1183 下游靶標(biāo)的研究不多，B 細胞淋巴癌基因2（Bcl2）和磷脂酰肌醇依賴性激酶1（pPDPK1）是miR-1183 的下游靶標(biāo)。在前期，我們通過TargetScan 和miRbase 數(shù)據(jù)庫分析預(yù)測了miR-1183 可能的下游靶標(biāo)，其中包括鼠雙微體2（mouse double minute 2，MDM2）和缺氧誘導(dǎo)因子1（hypoxia inducible factor-1，HIF-1），這些基因已被證實參與腫瘤的放射抵抗[29-30]。MDM2 作為一種癌基因，能調(diào)節(jié)抑癌基因p53 對細胞周期和凋亡的調(diào)控[31]。多項研究結(jié)果表明，MDM2 在腫瘤對輻射反應(yīng)的過程中發(fā)揮關(guān)鍵作用[32]。HIF-1 是一種關(guān)鍵的轉(zhuǎn)錄因子，可使腫瘤細胞適應(yīng)缺氧條件[33]。放療可以加速HIF-1 的激活，而HIF-1 反過來可通過多條信號途徑影響輻射反應(yīng)[34-35]。這些基因可能是miR-1183 調(diào)控腫瘤放射敏感性的重要靶標(biāo)。本研究中，circRNA_0128846 在人NSCLC 放射抵抗細胞中的表達顯著上調(diào)，而miR-1183 的表達下降，circRNA_0128846 可通過靶向結(jié)合并抑制miR-1183的表達，進而降低人NSCLC 細胞的放射敏感性，這提示circRNA_0128846 在NSCLC 的放射抵抗中發(fā)揮重要作用，其可能成為一種潛在的治療靶點，但具體的作用機制還需進一步探究。

利益沖突所有作者聲明無利益沖突

作者貢獻聲明陸瀅負責(zé)實驗的實施、論文的撰寫；鄧鑫州負責(zé)圖像的分析、數(shù)據(jù)的處理、論文最終版本的修訂；宋仕茂負責(zé)生物信息學(xué)的分析、論文摘要的校對；駱志國負責(zé)命題的提出、論文的審閱